1.用于人EGFR基因突变检测的探针,其特征在于,所述探针包括1-35探针对中的任一种或多种,每个探针对中包括捕获探针和检测探针;
1-35探针对的核苷酸序列如SEQ ID NO:1-70所示。
2.根据权利要求1所述的探针,其特征在于,所述检测探针上设置有标记物,所述标记物优选为地高辛、生物素、异硫氰酸荧光素标记物中的任一种。
3.人EGFR基因突变检测试剂盒,其特征在于,至少含有权利要求2的探针、酶以及与所述酶对应的底物中的任一种或多种;
所述酶上标记有与所述检测探针上设置的标记物结合的物质;
优选地,当检测探针上的标记物为地高辛或异硫氰酸荧光素时,酶上标记的物质相应的为地高辛抗体或异硫氰酸荧光素抗体;当检测探针上的标记物为生物素时,酶上标记的物质为亲和素;
优选地,所述酶为辣根过氧化物酶聚合物或碱性磷酸酶;
当所述酶为辣根过氧化物酶聚合物时,底物为TMB与H2O2的混合物、邻苯二胺、ABTS、3-(4-羟基)中的任一种;
当所述酶为碱性磷酸酶时,底物为对硝基苯磷酸盐、BCIP和NBT的组合物、4-硝基苯磷酸二钠、萘酚AS-BI磷酸盐、萘酚-AS-MX-磷酸盐中的任一种。
4.根据权利要求3所述的人EGFR基因突变检测试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括用于将所述捕获探针固定的固定物、杂交buffer、封闭蛋白、PBS、清洗液、检测孔板;
所述封闭蛋白优选为酪蛋白、胎牛血清、小牛血清中的任一种。
5.根据权利要求4所述的人EGFR基因突变检测试剂盒,其特征在于,所述固定物包括导电聚合物材料和盐离子化合物;
所述导电聚合物材料为苯胺、噻吩和吡咯导电分子单体中的任一种;
所述盐离子化合物为氯化盐、硝酸盐、硫酸盐中的任一种;
优选地,所述捕获探针与所述固定物以捕获溶液的形式存在,所述捕获溶液含有以下成分:导电聚合物材料的体积百分数为0.1%~5%,盐离子化合物的浓度为0.01mol/L~2mol/L,捕获探针的浓度为0.5-1.5μmol/L。
6.根据权利要求5所述的人EGFR基因突变检测试剂盒,其特征在于,所述捕获探针与所述固定物附着于所述检测孔板存在;
具体采用以下方法制备:将所述捕获溶液添加到所述检测孔板的反应孔中,然后于电场处理进行聚合反应,清洗即可。
7.根据权利要求3所述的人EGFR基因突变检测试剂盒,其特征在于,所述检测探针以检测溶液的形式存在;
所述检测溶液是以PBS作为溶剂,其中封闭蛋白的重量百分数为0.1%~5%,检测探针的浓度为0.5-1.5μmol/L。
8.根据权利要求3所述的人EGFR基因突变检测试剂盒,其特征在于,所述酶是以酶液的形式存在,所述酶液是以PBS作为溶剂,其中封闭蛋白的重量百分数为0.1%~5%,酶的体积百分数为0.05%~0.2%。
9.根据权利要求4所述的人EGFR基因突变检测试剂盒,其特征在于,所述清洗液包括含有质量浓度为0.04%-0.06%SDS的0.1×SSC-2×SSC混合液和含有体积百分数为0.05%-0.15%Tween20的PBS溶液。
10.一种检测人EGFR基因突变的方法,其特征在于,包括以下步骤:
将权利要求5所述的捕获溶液加入到检测孔板中,电场处理3-10个循环,每个循环电场处理的程序为:电压200-500mV,1-5s;电压800-1500mV,1-5s;
电场处理完毕后采用所述清洗剂清洗,然后加入待测样本与杂交buffer的混合溶液,电场处理3-10个循环,每个循环电场处理的程序为:电压200-500mV,1-5s;电压300-800mV,1-5s;
检测孔板清洗,然后加入权利要求7中所述的检测溶液,电场处理3-8个循环,每个循环电场处理的程序为:电压200-500mV,1-5s;电压300-800mV,1-5s;
检测孔板清洗,然后加入权利要求8中所述的酶液,孵育后清洗;
加入底物,在电压为-100~-300mV的电场处理下读数,得到电流值;
所述待测样本为体液,所述体液包括血浆、唾液、胸腔积液。