同时提取循环肿瘤细胞DNA和肿瘤游离DNA的试剂盒的制作方法

文档序号:12167095阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种同时提取循环肿瘤细胞DNA和肿瘤游离DNA的试剂盒,其特征在于,包括:

细胞密度梯度分离液;

多孔隔膜分离管;

5mL容积的离心管;

血液游离DNA提取试剂盒。

2.根据权利要求1所述的同时提取循环肿瘤细胞DNA和肿瘤游离DNA的试剂盒,其特征在于,所述细胞密度梯度分离液为德国Geriner公司的产品Oncoquick肿瘤细胞密度梯度分离液。

3.根据权利要求1所述的同时提取循环肿瘤细胞DNA和肿瘤游离DNA的试剂盒,其特征在于,所述多孔隔膜分离管为武汉海吉力生物科技有限公司的产品:多孔隔膜分离管,容积为15ml。

4.根据权利要求1所述的同时提取循环肿瘤细胞DNA和肿瘤游离DNA的试剂盒,其特征在于,所述血液游离DNA提取试剂盒为武汉海吉力生物科技有限公司的产品:核酸提取试剂(ZD-E型)。

5.权利要求1~4任一所述的同时提取循环肿瘤细胞DNA和肿瘤游离DNA的试剂盒的使用方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)将细胞密度梯度分离液加入多孔隔膜分离管中快速离心沉底;

(2)取肿瘤患者外周血加入步骤(1)的分离管中,在1200g重力加速度上离心25分钟;离心后外周血分为血浆层和红细胞层,血浆层在分离液上面,红细胞层在分离液下面,肿瘤细胞处于血浆与分离液层界面上,吸取出75%~85%体积血浆单独保存,注意不要吸到CTC细胞层,以免造成细胞的丢失;

(3)取出分离管多孔隔膜上目的细胞层以及分离液,加入到5ml离心管中与PBS缓冲液混匀,200g重力加速度离心,去上清,将细胞沉淀用单独保存的血浆重悬;

(4)重悬后的细胞采用血液游离DNA提取试剂盒从CTC细胞和血浆混合物中提取DNA。

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