1.一种同时提取循环肿瘤细胞DNA和肿瘤游离DNA的试剂盒,其特征在于,包括:
细胞密度梯度分离液;
多孔隔膜分离管;
5mL容积的离心管;
血液游离DNA提取试剂盒。
2.根据权利要求1所述的同时提取循环肿瘤细胞DNA和肿瘤游离DNA的试剂盒,其特征在于,所述细胞密度梯度分离液为德国Geriner公司的产品Oncoquick肿瘤细胞密度梯度分离液。
3.根据权利要求1所述的同时提取循环肿瘤细胞DNA和肿瘤游离DNA的试剂盒,其特征在于,所述多孔隔膜分离管为武汉海吉力生物科技有限公司的产品:多孔隔膜分离管,容积为15ml。
4.根据权利要求1所述的同时提取循环肿瘤细胞DNA和肿瘤游离DNA的试剂盒,其特征在于,所述血液游离DNA提取试剂盒为武汉海吉力生物科技有限公司的产品:核酸提取试剂(ZD-E型)。
5.权利要求1~4任一所述的同时提取循环肿瘤细胞DNA和肿瘤游离DNA的试剂盒的使用方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将细胞密度梯度分离液加入多孔隔膜分离管中快速离心沉底;
(2)取肿瘤患者外周血加入步骤(1)的分离管中,在1200g重力加速度上离心25分钟;离心后外周血分为血浆层和红细胞层,血浆层在分离液上面,红细胞层在分离液下面,肿瘤细胞处于血浆与分离液层界面上,吸取出75%~85%体积血浆单独保存,注意不要吸到CTC细胞层,以免造成细胞的丢失;
(3)取出分离管多孔隔膜上目的细胞层以及分离液,加入到5ml离心管中与PBS缓冲液混匀,200g重力加速度离心,去上清,将细胞沉淀用单独保存的血浆重悬;
(4)重悬后的细胞采用血液游离DNA提取试剂盒从CTC细胞和血浆混合物中提取DNA。