一种利用26个Y‑STR基因座对男性个体进行Y‑STR分型的方法和系统与流程

本发明涉及一种分型方法和系统，尤其涉及一种利用26个Y-STR基因座对男性个体进行Y-STR分型的方法和系统。
背景技术：
：串联重复序列(shorttandemrepeat,STR)是广泛存在于人类染色体DNA中的一类多态性遗传标记系统，因其存在范围广(平均16kb中即有一个STR基因座)，核心序列小(2-7bp)且扩增产物长度均小于500bp，等位基因位点的数字即代表序列重复的次数。STR基因座的等位基因片断长度集中，故可对多个STR基因座进行复合扩增。复合扩增多个STR基因座，累计鉴别能力可以接近或达到DNA指纹水平。Y染色体为男性特有的染色体，同一父系所有的男性个体都具有相同的Y-STR单倍型。Y-STR检验作为常染色体检验的一种补充手段，对家系排查、父权亲权鉴定、男女混合成分中男性成分的检测及多个男性混合成分的判定具有重要的应用价值，而且因为涉案犯罪行为人90％以上为男性，Y-STR检验在DNA检验中扮演着越来越重要的角色。现在法医DNA技术的作用更多的体现在被动比对方面，把Y-STR检验法引进到侦查学领域破获案件，创立了“Y-STR家系排查法”，可以缩小命案侦查范围，为侦查提出指向性的线索。家系排查指将犯罪现场提取到的Y-STR数据，与一定范围内的家系进行比对，一旦比中，便可以指向犯罪行为人所在家系。目前河南、山东等正在以县(市)为单位建库，以行政村为单元绘制家系图谱，在家系图谱的基础上采集生物样本，开展Y-STR数据库建设工作。通过Y数据库自动化比对，可快速指向犯罪嫌疑人所在家系，缩小侦查范围；快速指向无名尸体所在家系，指明侦查方向；可以排除女性DNA的干扰，获得明确的男性信息，入库自动比对。河南Y库采取“边打边建，以打促建”的方针，已经利用该库成功破获数百起命案积案，颇有成效。专利CN103866019中公开了一种用于法医Y-STR检测的Y-STR荧光复合扩增检验试剂，具体公开了21个Y-STR基因座及扩增引物。然而，其引物的设计使得一些Y-STR基因座的扩增产物排列过于紧密甚至前一个基因座的扩增产物跨到下一个基因座的范围内，造成分型无法判读，另外基因座排布紧密还可能造成等位基因分型标准物在分析时出现串扰、错位从而导致整个结果无法正确分析判读。如何提供一种可解决上述问题的对男性个体进行Y-STR分型的方法和系统成为有待解决的问题。技术实现要素：本发明提供了一种利用26个Y-STR基因座对男性个体进行Y-STR分型的方法，通过采用特定Y-STR基因座组合以及针对这些基因座设计的特定引物，使得在分型过程中不会出现分型无法判读、分型串扰、错位的问题，能准确地获得男性个体26个Y-STR基因座的基因型，从而为实现对该男性个体进行家系排查、父权亲权鉴定、男女混合成分中男性成分的检测及多个男性混合成分的判定等提供数据支持。本发明还提供一种利用26个Y-STR基因座对男性个体进行Y-STR分型的系统，通过该系统可以实现对男性个体针对上述26个基因座的准确分型。本发明还提供了一种复合检测体系，所述检测体系能准确获得男性个体26个Y-STR基因座的基因型。本发明还提供了一种检测试剂盒，包括所述的复合检测体系。本发明提供的一种利用26个Y-STR基因座对男性个体进行Y-STR分型的方法，该方法包括：1)获得男性个体的DNA；2)获得所述DNA26个Y-STR基因座的基因型，所述26个Y-STR基因座为DYS19、DYS385a/b、DYS389I/II、DYS390、DYS391、DYS392、DYS393、DYS437、DYS448、DYS456、DYS458、DYS635、GATAH4、DYS438、DYS439、DYS460、DYS447、DYS527a/b、DYS617、DYS522、DYS444、DYS508及DYS533，包括采用与所述基因座对应的扩增引物对其进行扩增以获得扩增产物的步骤；其中基因座DYS460的扩增引物对应于SEQIDNo.1至SEQIDNo.2的核苷酸序列；基因座DYS389I/II的扩增引物相同，为SEQIDNo.3至SEQIDNo.4的核苷酸序列；基因座DYS390，DYS392，DYS458，DYS437的扩增引物分别对应于SEQIDNo.5至SEQIDNo.12的核苷酸序列；基因座DYS385a/b的扩增引物相同，为SEQIDNo.13至SEQIDNo.14的核苷酸序列；基因座GATA-H4，DYS522，DYS456，DYS391，DYS447，DYS438，DYS448，DYS393，DYS635，DYS439，DYS19，DYS444的扩增引物分别对应于SEQIDNo.15至SEQIDNo.38的核苷酸序列；基因座DYS527a/b的扩增引物相同，为SEQIDNo.39至SEQIDNo.40的核苷酸序列；基因座DYS617，DYS508，DYS533的扩增引物分别对应于SEQIDNo.41至SEQIDNo.46的核苷酸序列；3)根据所述男性个体26个基因座的基因型获得该个体的Y-STR分型结果。在本发明的方案中，所述26个基因座是申请人通过对大量男性个体的生存环境、种族起源等进行综合分析获得的。针对上述基因座的引物也是申请人通过大量实验获得的，成功解决了在对男性个体的Y-STR分型过程存在的分型无法判读、分型串扰、错位的问题，同时这些特定Y染色体基因座的组合还能实现对男性个体进行家系排查、父权亲权鉴定、男女混合样本中男性成分来源推断，和/或男男混合样本中男性成分来源推断。进一步的，在本申请的方案中，“获得男性个体的DNA”指的是提取该个体的例如血液、组织等样本中的DNA，或者直接获得含有所述个体DNA的血卡。“所述男性个体的Y-STR分型结果”指的是能用于对该男性个体进行家系排查、父权亲权鉴定、男女混合样本中男性成分来源推断，和/或男男混合样本中男性成分来源推断的Y-STR分型结果。其中男男混合样本中男性成分来源推断指对来自非同一父系家族的男性个体的区分。在本发明的一个具体实施方式中，所述引物为荧光标记引物。在本发明的另一个具体实施方式中，其中2)还包括在获得扩增产物后，使用遗传分析仪分析该扩增产物，以获得所述27个基因座的基因型的步骤。在本发明的方案中，所述遗传分析仪可以是本领域技术人员常规使用的遗传分析仪，例如ABI3130或ABI3500型遗传分析仪，通过ID-X软件或其他GeneMapper软件等分析该PCR扩增产物中所述26个基因座的基因型。本发明提供的一种利用26个Y-STR基因座对男性个体进行Y-STR分型的系统，所述系统包括DNA获取体系，复合检测体系、推断体系；所述DNA获取体系用于获得所述男性个体的DNA；所述复合检测体系用于获得所述DNA26个Y-STR基因座的基因型，并根据该基因型获得该个体的Y-STR分型结果，所述26个Y-STR基因座为DYS19、DYS385a/b、DYS389I/II、DYS390、DYS391、DYS392、DYS393、DYS437、DYS448、DYS456、DYS458、DYS635、GATAH4、DYS438、DYS439、DYS460、DYS447、DYS527a/b、DYS617、DYS522、DYS444、DYS508及DYS533，获得所述26个基因座的基因型的过程包括采用与所述基因座对应的扩增引物对其进行扩增以获得扩增产物的步骤；其中基因座DYS460的扩增引物对应于SEQIDNo.1至SEQIDNo.2的核苷酸序列；基因座DYS389I/II的扩增引物相同，为SEQIDNo.3至SEQIDNo.4的核苷酸序列；基因座DYS390，DYS392，DYS458，DYS437的扩增引物分别对应于SEQIDNo.5至SEQIDNo.12的核苷酸序列；基因座DYS385a/b的扩增引物相同，为SEQIDNo.13至SEQIDNo.14的核苷酸序列；基因座GATA-H4，DYS522，DYS456，DYS391，DYS447，DYS438，DYS448，DYS393，DYS635，DYS439，DYS19，DYS444的扩增引物分别对应于SEQIDNo.15至SEQIDNo.38的核苷酸序列；基因座DYS527a/b的扩增引物相同，为SEQIDNo.39至SEQIDNo.40的核苷酸序列；基因座DYS617，DYS508，DYS533的扩增引物分别对应于SEQIDNo.41至SEQIDNo.46的核苷酸序列；所述推断体系用于根据所述个体的Y-STR分型结果对该男性个体进行家系排查、父权亲权鉴定、男女混合样本中男性成分来源推断，和/或男男混合样本中男性成分来源推断。在本发明的一个具体实施方式中，所述引物为荧光标记引物。更进一步的，所述复合检测体系还用于在获得扩增产物后，使用遗传分析仪分析该扩增产物，以获得所述26个基因座的基因型。更进一步的，所述遗传分析仪利用针对各基因座的等位基因的分型标准物来确定男性个体DNA中各基因座的基因型。本发明提供的一种复合检测体系，所述体系包括男性个体DNA，26个基因座，以及扩增引物，所述复合检测体系用于利用所述扩增引物获得所述DNA26个Y-STR基因座的扩增产物，并由所述扩增产物获得男性个体的DNA的26个基因座的基因型，并进一步由该基因型获得所述个体的Y-STR分型结果，所述26个Y-STR基因座为DYS19、DYS385a/b、DYS389I/II、DYS390、DYS391、DYS392、DYS393、DYS437、DYS448、DYS456、DYS458、DYS635、GATAH4、DYS438、DYS439、DYS460、DYS447、DYS527a/b、DYS617、DYS522、DYS444、DYS508及DYS533，所述扩增引物由与所述26个基因座对应的扩增引物组成，其中基因座DYS460的扩增引物对应于SEQIDNo.1至SEQIDNo.2的核苷酸序列；基因座DYS389I/II的扩增引物相同，为SEQIDNo.3至SEQIDNo.4的核苷酸序列；基因座DYS390，DYS392，DYS458，DYS437的扩增引物分别对应于SEQIDNo.5至SEQIDNo.12的核苷酸序列；基因座DYS385a/b的扩增引物相同，为SEQIDNo.13至SEQIDNo.14的核苷酸序列；基因座GATA-H4，DYS522，DYS456，DYS391，DYS447，DYS438，DYS448，DYS393，DYS635，DYS439，DYS19，DYS444的扩增引物分别对应于SEQIDNo.15至SEQIDNo.38的核苷酸序列；基因座DYS527a/b的扩增引物相同，为SEQIDNo.39至SEQIDNo.40的核苷酸序列；基因座DYS617，DYS508，DYS533的扩增引物分别对应于SEQIDNo.41至SEQIDNo.46的核苷酸序列。在本发明的方案中，所述DNA聚合酶可以是FastStartDNA聚合酶、TaqDNA聚合酶、HotstartDNA聚合酶中的一种或多种。本发明还提供了一种检测试剂盒，包括所述的复合检测体系。在本发明的方案中，本发明利用所述复合检测体系进行26个基因座的分型的方法，包括：1)将获取的男性个体DNA作为模板；2)使用所述扩增引物作为模板的男性个体DNA进行多重PCR扩增反应以得到扩增产物；3)将所述扩增产物利用遗传分析仪进行分析，以获得26个基因座的基因型。在本发明的方案中，所述26个基因座信息如表1所示：表1基因座重复序列5’标记DYS19TAGAROXDYS385a/bGAAAHEXDYS389I/II(TCTG)(TCTA)FAMDYS390(TCTA)(TCTG)FAMDYS391TCTATAMRADYS392TATFAMDYS393AGATROXDYS437TCTAHEXDYS448AGAGATTAMRADYS456AGATTAMRADYS458GAAAHEXDYS635TSTAROXGATA-H4TAGAHEXDYS438TTTTCTAMRADYS439AGATROXDYS460ATAGFAMDYS447TAAWATAMRADYS527abGAAAROXDYS617TATTAMRADYS522GATAHEXDYS444TAGAROXDYS508TATCHEXDYS533ATCTFAM本发明提供的扩增引物序列如下。所述扩增引物及其相对应的基因座如下表2所示，PCRU代表上游引物，PCRL代表下游引物；表2本发明方案具有以下的优点：1、本发明的检测方法和检测系统采用特定的STR基因座组合以及引物序列，使得最终获得的分型图谱上各位点之间排布均匀，且引物特异性高，可以得到完整的STR分型，峰型尖锐清晰，平衡性好，无Pull-up峰、stutter带，无非特异性人工产物出现，完全能够满足法医Y-STR检验的要求。2、使用本发明的检测方法和检测系统同时检测特定26个Y-STR位点具有高的亲权鉴定能力、男性个体进行家系排查、以及男女混合样本中男性成分来源推断，和/或男男混合样本中男性成分来源推断。3、本发明的方案可以通过使用荧光标记，利用常规的遗传分析仪，根据所要扩增的基因的分子量和荧光颜色的不同，获得直观的检测结果，并且该结果与现有检测系统相比，准确性为100％。4、本发明提供的方案能有效从基因水平为其家系排查、亲权鉴定等提供准确的科学依据。附图说明图1显示了本申请各基因座的等位基因排布图(其中第一行为蓝色荧光，第二行为绿色荧光，第三行为黄色荧光，第四行为红色荧光)。图2显示了使用本发明系统获得的一个样本的分型结果图。图3显示了使用专利CN103866019体系获得的等位基因分型标准物(ladder)的分型图(其中第一行为蓝色荧光，第二行为绿色荧光，第三行为黑色荧光，第四行为红色荧光)。图4显示了使用本申请体系获得的等位基因分型标准物(ladder)的分型图(其中第一行为蓝色荧光，第二行为绿色荧光，第三行为黑色荧光，第四行为红色荧光)。图5显示了使用专利CN103866019体系获得的基因座DYS460等位基因分型图(其中第一行为蓝色荧光，第二行为绿色荧光，第三行为黑色荧光，第四行为红色荧光)。具体实施方式以下实施例中使用的193份人抗凝血(男性193份)，由公安部物证鉴定中心提供。以下实施例中使用的方法如无特别说明均为常规方法，所用试剂耗材和仪器如下表3所示：表3实施例1、对本发明的对男性个体进行Y-STR分型的方法和系统准确性的验证在本实施例中，所述男性个体为193份男性人抗凝血，已知其个体来源，但在本申请实施例1的实施过程中设定其个体来源未知，采用本申请方法和系统对其进行Y-STR分型，包括：1)利用本发明的系统中的DNA获取体系获得男性个体的DNA，2)利用本发明的系统中的复合检测体系获得所述DNA26个Y-STR基因座的基因型，并根据该基因型获得该个体的Y-STR分型结果，3)利用本发明的系统中所述推断体系，根据所述个体的Y-STR分型结果对该男性个体进行家系排查、父权亲权鉴定、男女混合样本中男性成分来源，和/或男女混合样本中男性成分来源推断。本实施例中，所述复合检测体系用于利用所述扩增引物获得所述DNA26个Y-STR基因座的扩增产物，并由所述扩增产物获得男性个体的DNA的26个基因座的基因型，并进一步由该基因型获得所述个体的Y-STR分型结果；所述26个Y-STR基因座为DYS19、DYS385a/b、DYS389I/II、DYS390、DYS391、DYS392、DYS393、DYS437、DYS448、DYS456、DYS458、DYS635、GATAH4、DYS438、DYS439、DYS460、DYS447、DYS527a/b、DYS617、DYS522、DYS444、DYS508及DYS533；所述扩增引物由与所述26个基因座对应的扩增引物组成，其中基因座DYS460的扩增引物对应于SEQIDNo.1至SEQIDNo.2的核苷酸序列；基因座DYS389I/II的扩增引物相同，为SEQIDNo.3至SEQIDNo.4的核苷酸序列；基因座DYS390，DYS392，DYS458，DYS437的扩增引物分别对应于SEQIDNo.5至SEQIDNo.12的核苷酸序列；基因座DYS385a/b的扩增引物相同，为SEQIDNo.13至SEQIDNo.14的核苷酸序列；基因座GATA-H4，DYS522，DYS456，DYS391，DYS447，DYS438，DYS448，DYS393，DYS635，DYS439，DYS19，DYS444的扩增引物分别对应于SEQIDNo.15至SEQIDNo.38的核苷酸序列；基因座DYS527a/b的扩增引物相同，为SEQIDNo.39至SEQIDNo.40的核苷酸序列；基因座DYS617，DYS508，DYS533的扩增引物分别对应于SEQIDNo.41至SEQIDNo.46的核苷酸序列。1、获得含上述193个男性个体DNA的193份血卡作为实验样本，并使用标准DNA9948作为阳性对照样本。2、利用所述复合检测体系对上述样本进行26个基因座的分型，包括：使用所述扩增引物对DNA模板进行多重PCR扩增，以获得扩增产物；将扩增产物利用遗传分析仪确定26个基因座的基因型。具体过程如下：2.1、引物池配置扩增引物池的配置，其中所述26个基因座对应的扩增引物如上所述；本发明提供的各种引物序列由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。将合成好的引物用1×TE缓冲液稀释到100μM，将26个基因座的上下游引物等比混合，得到浓度为50μM的引物。从23管PCR引物中分别取不同体积加入到一个新的离心管中，作为23重PCR引物池，在该引物池中，各STR位点的引物的终浓度如下表4所示：表4STR基因座终浓度(μmol/L)DYS4600.15DYS389I/II0.3DYS3900.23DYS5330.2DYS3920.5DYS5080.3DYS4370.3DYS385a/b0.3GATA-H40.3DYS5220.3DYS4560.15DYS4580.2DYS3910.24DYS4470.26DYS4380.4DYS4480.2DYS6170.5DYS3930.15DYS6350.3DYS4390.3DYS190.4DYS4440.26DYS527a/b0.342.2、多重PCR反应本实施例使用9700型PCR扩增仪进行多重PCR反应。(1)配置PCRmix(25μL体系)，如下表5所示。表5试剂名称浓度PCR引物池12.5μLTris-HCl20mMKCl50mMMgCl21.6mM牛血清白蛋白0.8mg/mlTween-200.2％甘油3.2％NaN30.02％dNTP200μMTaqDNA聚合酶2U男性个体DNA模板卡片0.25mm2总计25μL(2)扩增程序PCR扩增过程的热循环参数为：①95℃，11min；②28个循环，每个循环94℃1min，60℃1min，72℃1min；③60℃，60min；④25℃，保温。2.3、PCR产物分型待分型样品的准备：1.电泳上样混合物的准备，按下面比率准备内标和去离子甲酰胺组成上样混合物：10μlTyper500内标+1000μl去离子甲酰胺，混合均匀。2.每管加入10μl上样混合物、1μl扩增产物，混匀。3.95℃变性3分钟，立即放在冰上冷却3分钟，之后电泳。ABI3130XL型遗传分析仪上进行检测。应用ABI3130XLDateCollectionSoftware3.1收集数据，GeneMapper3.3软件对电泳结果进行分析，获得所述26个基因座的基因型。2.4、结果分析使用本发明系统对193份DNA样品进行分型的一个代表性分型结果如图2所示，为了验证分型结果的准确性，从193份DNA样品中随机抽取100份DNA样品，对26个基因座进行测序(北京迈奥德恩生物科技有限公司测序)，采用本实施例的复合检测体系获得的所有的分型结果与测序结果均一致，一致性达到100％，此结果证本发明复合检测体系分型结果准确。3、根据所述男性个体26个基因座的基因型获得该个体的Y-STR分型结果，并进行父系亲属鉴定。由本实施例方法获得的上述193份检材的父系亲属鉴定结果，与其已知的个体父系亲属鉴定结果一致，说明本发明方法可以进行男性个体的父系亲属鉴定。进一步的，上述26个基因座的基因型也可以用于对男性个体进行家系排查、男女混合样本中男性成分来源推断，和/或男男混合样本中男性成分来源推断。实施例2本申请Y-STR分型系统与现有plus试剂盒在家系判断中的比较本发明的Y-STR分型系统相比于专利CN103866019检测体系增加了5个Y-STR位点，增大了对不同家系男性的分辨能力，另外所增加的Y-STR位点都属于低突变率位点，所以本发明系统中26个Y-STR位点都属于中低突变速率位点，更适用于家系排查，因为高突变位点容易导致家系排查中的错误排除。举例如下：2016年7月30日，河南省汝州市纸坊镇长东村马某(女，12岁)被强奸杀害，在尸检过程中提取了阴道拭子及肛门拭子，精斑预实验为阳性，经对两份检材进行DNA检验，于2016年7月31日得到同一男性的常染色体DNA及Y染色体DNA图谱。由于此案并无明确嫌疑人，而且案发地地处偏僻，外来人口少，分析此案侵害对象明确，应为本地人作案可能性大。因此，决定应用Y-STR家系排查法，对在案发地周围进行排查。专案组马上部署按家系采集案发地周围村庄男性成员血样，截止到2016年8月3日，采用本申请Y-STR分型系统检验1400余份血样。排查到汝州市纸坊镇西赵落村闵自保血样Y-STR分型与物证Y-STR分型26个位点中仅有在DYS527ab位点存在一个一步突变，不能排除闵姓家系的嫌疑。用商购获得的plus试剂盒对闵自保血样与物证进一步验证，发现二者在三个位点上存在突变，其中DYS627和DYS570属于一步突变，DYF387S1为两步突变。统计结果如下表所示，闵自保血样与物证在四个位点上存在突变，一般来说，容差大于3，则会排除该家系嫌疑，即采用plus试剂盒极可能会将闵姓家系错误的排除。但是我们仔细分析，以上四个发生突变的位点中有三个都属于快速突变位点，而且除DYF387S1为两步突变外，DYS570、DYS627、DYS527ab都属于一步突变，所以我们判断仍然不能排除这个家系的嫌疑。专案组一方面采用本申请Y-STR分型系统排查闵自保家系，一方面对该村所有闵姓人员采血检验，最后锁定嫌疑人为闵系家族成员闵军停。下表为DNATyperY26试剂盒的分型结果，FW为物证，T1为闵自保。plus试剂盒的分型，FW为物证，T1为闵自保。实施例3本发明检测系统与专利CN103866019中检测体系的比较1.本发明检测系统与专利CN103866019检测体系中针对各基因座所设计的引物扩增各等位基因的扩增产物大小范围如下：专利CN103866019：本申请(其中图1显示了本申请各基因座的扩增产物排布图)：从黑线标示可看出，专利CN103866019中DYS460、DYS389II的扩增产物排布过紧密，会造成以下两种问题：问题1)、等位基因分型标准物(ladder)分型错误。图3显示了使用专利CN103866019系统获得的等位基因分型标准物(ladder)的分型图，可以看出，所示专利CN103866019，基因座DYS438和DYS389II的等位基因分型标准物分型错位，DYS438的第一个峰应该是7，红框标示，第一个峰识别错误，由于该错误导致后续全部错位。本领域技术人员公知等位基因分型标准物分型错误将必然导致无法对样本进行正确分型。图4显示了使用本申请系统获得的等位基因分型标准物(ladder)的分型图，可以看出，各等位基因位点之间排布均匀，且引物特异性高，可以得到完整的STR分型，峰型尖锐清晰，平衡性好。问题2)、本该是前一个基因座的分型，却在下一个基因座的范围内，无法判读。比如DYS460的等位基因分布是7,8,9,10,11,12,13(https://yhrd.org/tools/marker/DYS460，YHRD数据库)。我们对812个男性样本的基因座DYS460做了测试，发现其中有4个样本的分型是13，有两个样本是14,如下表所示。LOCUS:DYS460等位基因分型样本个数频率810.0012315270935960691950.240147783251232103280.403940886699507112680.33004926108374412140.01724137931034481340.004926108374384241420.00246305418719212GD:0.67155324454175对于专利CN103866019，当DYS460出现分型是13时，对应峰的位置是120bp，14对应124bp。而DYS458的范围大小是121bp-164bp，所以用专利CN103866019的系统，DYS460等位基因14会在DYS458的范围内，DYS458出现两个峰而无法准确判断。DYS460分型为14的样本会在图5所示红框的位置。因此，对于DYS460基因座的一些等位基因类型，专利CN103866019系统是无法准确进行分型的。而本申请方案中，由于申请人对各基因座等位基因的引物，以及特定的基因座的组合和排布进行重新设计，使得不存在上述问题，由以上本申请的各等位基因的扩增产物大小范围可知，DYS460等位基因14不会错误的出现在下一个基因座DYS389I的位置上。2.本发明检测系统与专利CN103866019检测系统稳定性比较申请人经过试验验证，本发明的检测系统在引物池(引物mix)和PCR缓冲液混合一周以内都可以稳定的检测出各基因座的等位基因，而CN103866019检测系统在引物池和PCR缓冲液混合后，至少对于DYS389II基因座对应的扩增产物会因为引物之间形成二聚体而逐渐降低，两小时DYS389II基因座会因为其扩增产物低于检出限而发生等位基因分型缺失，如下表所示，等位基因分型成功比例随时间延长不断减少，一天以后基本上无法进行分型，而本申请系统在放置一周以后仍然能够对所有等位基因进行成功分型，上述系统PCR体系均采用常规的酶和试剂：对于基因座DYS389II：本发明检测系统与专利CN103866019检测系统相比，具有高的检测稳定性，能够更为准确，完整的获得男性个体基因座各等位基因的分型，能为后续的对男性个体进行家系排查、父权亲权鉴定、男女混合样本中男性成分的检测及多个男性混合样本中男性成分的检测提供准确、完整的数据。序列表<110>公安部物证鉴定中心<120>一种利用26个Y-STR基因座对男性个体进行Y-STR分型的方法和系统<130>165669GF<160>46<170>PatentInversion3.5<210>1<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>1cgaggaatctgacacctc18<210>2<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>2gcattccatatcatctatc19<210>3<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>3atcttctgtatccaactctc20<210>4<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>4ggcttatccctgagtagcag20<210>5<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>5cgataatattttacacatttt21<210>6<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>6cagggtgacagtaaaatgaa20<210>7<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>7aatcagacccagttgatgcaa21<210>8<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>8agacgctccaaaggaccca19<210>9<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>9aactcagcaacaggaatga19<210>10<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>10ctatggttctggcattacaag21<210>11<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>11gactatgggcgtgagtgcat20<210>12<211>24<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>12aaacagaggaagaccctgtcattc24<210>13<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>13ctgaagagctagacaccat19<210>14<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>14atcgcattccaattacatagt21<210>15<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>15ttagcactttcagcacatcac21<210>16<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>16gactctttcctctgatggtg20<210>17<211>22<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>17gcccatccaaatcattcataat22<210>18<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>18agccggtgctggaagacaga20<210>19<211>23<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>19atcgttgggaccttgtgataatg23<210>20<211>23<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>20attagggttctctagagggacag23<210>21<211>24<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>21gctgttccctattcattcaatcat24<210>22<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>22ctatagggagacggaataaaa21<210>23<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>23attcgtgttatctctgcctt20<210>24<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>24tgactggtgtgtcacagcatg21<210>25<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>25agtccatgacagctgatgc19<210>26<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>26gtggcagacgcctataatcc20<210>27<211>22<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>27tgacgttgtcaaagagcttcaa22<210>28<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>28tttattccgctgtgttggaga21<210>29<211>22<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>29gctggagtcattcctaatgtgg22<210>30<211>22<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>30aaactttgaggtatgtctcata22<210>31<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>31ctgtcatggaatgctctcttg21<210>32<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>32aatctgcccaaatatcca18<210>33<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>33atgctcgagttgttatgg18<210>34<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>34ctgaagtggcttggaattc19<210>35<211>22<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>35ctagcgtcaatctctgcacctg22<210>36<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>36ctgaatgactactgagtttct21<210>37<211>23<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>37atgtgtatgaaaggtgtgaacca23<210>38<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>38tgtacggctgtctaagggatc21<210>39<211>19<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>39gtcgttatcgcaaacatag19<210>40<211>20<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>40gatgcattctaggaagatta20<210>41<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>41tgtaggcaggttttatggagg21<210>42<211>22<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>42agtccgggagtgatagcattag22<210>43<211>22<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>43ccaaattccagcttattattcc22<210>44<211>25<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>44gcagagagtagatatagatgataga25<210>45<211>29<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>45ctgtctattcatctaacatctttgtcatc29<210>46<211>27<212>DNA<213>人工序列<220><223>引物<400>46gagatcaccaatgaaatgtatttattc27当前第1页1 2 3