本发明为一种绿藻来源的鼠李寡糖的制备方法及其在化妆品中的应用，具体涉及鼠李寡糖的制备方法，属于生物技术应用领域。
背景技术：
随着年龄增长，维持皮肤弹性以及起到深层保湿作用的胶原蛋白开始减少，皮肤蛋白的活性开始降低，导致皮肤角质层中的水分含量降低，从而使皮肤的柔软性和弹性下降。为了解决这一问题，市面上所售的化妆品大多通过添加亲水性保湿成分，达到滋润皮肤的目的。目前化妆品中较为常用的保湿成分有多元醇类（丙二醇等）、多糖类（透明质酸等）、神经酰胺类。最新研究发现，鼠李糖具有很好的吸湿保湿活性，并且能够作用于表皮层、皮肤新生核心层，令皮肤细胞再生，具有卓越的深层抗衰老能力，而且鼠李糖具有强大抗氧化功效，能减缓真皮层的松弛，从而有效对抗老化。
在自然界中，鼠李糖通常与其他组分相结合存在于动物、植物多糖中。生产鼠李糖的传统方法是从天然植物中提取，如橡树皮中的栎皮酮，柑橘皮中的柚苷。这些物质中含有鼠李糖基，通过水解可得到鼠李糖。再通过萃取及其它化工单元过程操作获得鼠李糖纯品。但这种生产方法劳动强度大，在提取过程中需要用到有毒或腐蚀性化学试剂，并且原材料的季节和地域性来源及运输等均给生产带来许多不便。绿藻是最常见的极易生长繁殖的藻类，是一类广温、广盐、耐干性的大型海藻。研究发现绿藻多糖是一种由鼠李糖、木糖、葡萄糖醛酸组成并富含硫酸基的聚阴离子糖链。研究发现绿藻多糖的单糖组成为鼠李糖、木糖、葡萄糖醛酸，其中鼠李糖的质量百分比高达64.2%。因此绿藻多糖是制备鼠李寡糖及其衍生物优良来源，其中生物酶解法是目前公认的最有效的途径。大量研究报道绿藻寡糖具有美白、保湿、降血脂、防辐射、抗凝血活性，同时也具有分子量小易吸收的特性，这些生物活性小分子越来越多的被应用到化妆品中。中国专利申请号201410298678.2公开了一种利用Catenovulum sp. LP214发酵产浒苔多糖裂解酶制备分子量分布为402-1430 Da的鼠李糖硫酸酯寡糖的方法。中国专利申请号201410462306.9公开了一种利用硫酸酯多糖降解酶制备分子量分布﹤5000 Da的石莼寡糖的方法。经查阅相关文献和书籍，目前并无利用多酶耦合调控制备绿藻来源的鼠李糖及其寡糖的制备，并将其作为功能性成分应用于化妆品中的相关报道。
技术实现要素：
本发明提供一种绿藻来源的鼠李寡糖的制备方法及其在化妆品中的应用，实验证明鼠李寡糖具有吸湿性和保湿性，能够作用于皮肤细胞从而有效地防止肌肤水分流失，对干燥性皮肤具有显著疗效，而且来源安全、天然无毒副性，因此可以应用于化妆品中。
为实现上述发明目的，本发明所采用的技术方案为。
（1）绿藻多糖的提取：将水洗、干燥、粉碎的绿藻粉按料液比1:30加水，95-100℃提取3 h，趁热离心得上清液，即为绿藻多糖溶液。
（2）鼠李多糖的制备：调绿藻多糖溶液pH至8.5，-20℃条件下放置18-24 h，室温下解冻，过300目筛绢，得到不溶物。不溶物加入一倍乙醇，离心，加水复溶得到鼠李多糖溶液。
（3）酶解：将多糖降解酶加入鼠李多糖溶液中，同时加入Mg2+，于40-50 ℃，pH 7.5-8.5，酶解0.5-2 h；酶解结束后，加热至沸保温1-2 min，冷却后，10000 r/min离心10 min，得到上清酶解液；上清酶解液中加入α-葡萄糖苷酶，于45-50℃，pH 4.0-5.5，酶解0.5-1.5 h；酶解结束后，加热至沸保温1-2 min，冷却后，8000 r/min离心10 min得到上清液；将上清液用截留分子量为2000 Da的超滤膜除去大分子物质，冷冻干燥得到鼠李寡糖。
步骤（1）中的绿藻，是浒苔、石莼、礁膜中的一种或几种的组合。
步骤（2）中的鼠李多糖溶液，糖浓度为5-15 mg/ml。
步骤（3）中的多糖降解酶，酶活力为200-300 IU/ml， 加酶量为2-15% (v/v)。酶活力单位定义为40 ℃条件下，每分钟产生1μg还原糖（以葡萄糖
计）所需要的酶量。
步骤（3）中的α-葡萄糖苷酶，酶活力为6×104-8×104 IU/g，加酶量为1-3% (v/v)。
步骤（3）中的Mg2+，加入量为0.01-0.1% (v/v)。
步骤（3）中的鼠李寡糖，分子量范围为164-1048 Da，其中鼠李糖、木糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖的摩尔比为11:4:3:5。
本发明所述的化妆品，其特征在于包含鼠李寡糖0.1-10%，胶原蛋白溶液0.01-0.1%，维生素E 0.03-0.3%，维生素C 0.05-0.5%，透明质酸0.0001-0.001%。
本发明所述绿藻来源的鼠李寡糖，可提高角质层的结合水比例，通过改变皮肤代谢，达到预防皮肤老化的功能，让肌肤更加水润有弹性，对干燥性皮肤具有显著疗效。
本发明具有以下优点。
（1）原料丰富，绿藻是最常见的极易生长繁殖的藻类，是一类广温、广盐、耐干性的大型海藻，与其它海藻类相比，绿藻是一种廉价的海洋生物质资源。
(2) 本发明利用多酶耦合的调控作用制备绿藻来源的鼠李糖及其寡糖，所用方法简单易行、反应条件温和、反应时间短，能够高效获得绿藻来源的鼠李寡糖。
（3）所得鼠李寡糖分子量小，易于被皮肤吸收，在干燥状态下能够有效防止人皮肤成纤维细胞受到破坏，显著提高细胞存活率，令皮肤细胞再生，有效预防皮肤老化。
附图说明
图1为所述鼠李寡糖片段的质谱图。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明的技术方案作进一步详细的说明。
实施例1
鼠李寡糖制备方法如下。
（1）绿藻多糖的提取：将水洗、干燥、粉碎的浒苔粉按料液比1:30加水，95-100℃提取3 h，趁热离心得上清液，即为绿藻多糖溶液。
（2）鼠李多糖的制备：调绿藻多糖溶液pH至8.5，-20℃条件下放置18-24 h，室温下解冻，过300目筛绢，得到不溶物。不溶物加入一倍乙醇，离心，加水复溶得到鼠李多糖溶液。
（3）酶解：将酶活力为200 IU/ml的多糖降解酶加入鼠李多糖溶液中，加酶量为5% (v/v)，同时加入Mg2+，于40℃，pH 7.5，酶解0.5 h；酶解结束后，加热至沸保温1-2 min，冷却后，10000 r/min离心10 min，得到上清酶解液；上清酶解液中加入酶活力为6×104 IU/g的α-葡萄糖苷酶，加酶量为3% (v/v)，于45℃，pH 4.0，酶解0.5 h；酶解结束后，加热至沸保温1-2 min，冷却后，8000 r/min离心10 min得到上清液；将上清液用截留分子量为2000 Da的超滤膜除去大分子物质，冷冻干燥得到鼠李寡糖。
一种添加绿藻来源的鼠李寡糖的化妆品包括以下重量百分含量的组分：
鼠李寡糖0.1%，胶原蛋白溶液0.03%，维生素E 0.05%，维生素C 0.07%，透明质酸0.0003%，其余为去矿物质水。
实施例2
鼠李寡糖制备方法如下。
（1）绿藻多糖的提取：将水洗、干燥、粉碎的浒苔粉按料液比1:30加水，95-100℃提取3 h，趁热离心得上清液，即为绿藻多糖溶液。
（2）鼠李多糖的制备：调绿藻多糖溶液pH至8.5，-20℃条件下放置18-24 h，室温下解冻，过300目筛绢，得到不溶物。不溶物加入一倍乙醇，离心，加水复溶得到鼠李多糖溶液。
（3）酶解：将酶活力为300 IU/ml的多糖降解酶加入鼠李多糖溶液中，加酶量为4% (v/v)，同时加入Mg2+，于45℃，pH 8.0，酶解1 h；酶解结束后，加热至沸保温1-2 min，冷却后，10000 r/min离心10 min，得到上清酶解液；上清酶解液中加入酶活力为7×104 IU/g的α-葡萄糖苷酶，加酶量为2% (v/v)， 于50℃，pH 4.5，酶解1 h；酶解结束后，加热至沸保温1-2 min，冷却后，8000 r/min离心10 min得到上清液；将上清液用截留分子量为2000 Da的超滤膜除去大分子物质，冷冻干燥得到鼠李寡糖。
一种添加绿藻来源的鼠李寡糖的化妆品包括以下重量百分含量的组分：
鼠李寡糖1%，胶原蛋白溶液0.07%，维生素E 0.1%，维生素C 0.15%，透明质酸0.0005%，其余为去矿物质水。