通过瞬时表达对植物基因进行定点插入的方法及获得的瞬时表达细胞、组织和突变植株与流程

文档序号:12412162阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种通过瞬时表达对植物基因进行定点插入的方法,其特征在于,包括如下步骤:以目的植物的细胞或组织为瞬时表达对象,在目的植物的细胞或组织中瞬时表达序列特异性核酸酶及一段供体DNA序列,在特异性核酸酶的作用下,目的基因被剪切并产生双链断裂,供体DNA序列插入到双链断裂处,完成对基因的定点插入。

2.根据权利要求1所述的通过瞬时表达对植物基因进行定点插入的方法,其特征在于,在所述目的植物的细胞或组织中瞬时表达序列特异性核酸酶及一段供体DNA序列包括如下步骤:向目的植物的细胞或组织中直接导入靶标片段的核酸酶或导入用于表达特异于靶标片段的核酸酶的遗传物质,同时导入供体DNA序列。

3.根据权利要求2所述的通过瞬时表达对植物基因进行定点插入的方法,其特征在于,所述遗传物质为DNA质粒、DNA线性片段或体外转录的RNA。

4.根据权利要求1所述的通过瞬时表达对植物基因进行定点插入的方法,其特征在于,所述序列特异性核酸酶为能实现基因组编辑的核酸酶,锌指核酸酶ZFN、类转录激活因子效应物核酸酶TALEN或CRISPR/Cas9核酸酶。

5.根据权利要求1所述的通过瞬时表达对植物基因进行定点插入的方法,其特征在于,所述供体DNA序列为单链DNA或双链DNA。

6.根据权利要求1所述的通过瞬时表达对植物基因进行定点插入的方法,其特征在于,所述细胞为任何能作为瞬时表达受体并能经过组织培养再生为完整植株的细胞;所述组织为任何能作为瞬时表达受体并能经过组织培养再生为完整植株的组织。

7.根据权利要求6所述的通过瞬时表达对植物基因进行定点插入的方法,其特征在于,所述细胞为原生质体细胞或悬浮细胞;所述组织为愈伤组织、幼胚、成熟胚、叶片、茎尖、幼穗或下胚轴。

8.根据权利要求1所述的通过瞬时表达对植物基因进行定点插入的方法,其特征在于,向所述目的植物的细胞或组织中导入序列特异性核酸酶及一段供体DNA序列方法为基因枪法、农杆菌侵染法、PEG诱导原生质体法、电极法、碳化硅纤维介导法或真空渗入法。

9.根据权利要求1所述的通过瞬时表达对植物基因进行定点插入的方法,其特征在于,所述植物可为单子叶植物或双子叶植物。

10.采用权利要求1-9任一项所述方法获得的瞬时表达细胞、瞬时表达组织和培养后得到的定点插入突变植株。

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