一种辅助鉴定大豆百粒重性状的分子标记HNUSOY05及其应用的制作方法

文档序号:12412766阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种辅助鉴定大豆百粒重性状的分子标记HNUSOY05,其特征在于,所述分子标记表现为SEQ ID NO.1所示核苷酸序列在大豆11号染色体的1001963至1002153区间内插入/缺失长度多态性;具有SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的大豆表现为高百粒重;缺失SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的大豆表现为低百粒重。

2.权利要求1所述分子标记HNUSOY05在大豆遗传育种、大豆百粒重性状辅助鉴定、大豆百粒重性状筛选中的应用。

3.一种权利要求1所述分子标记HNUSOY05的引物对,其特征在于,所述引物对的上游引物HNUSOY05F的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示,下游引物HNUSOY05R的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

4.权利要求2所述分子标记HNUSOY05的引物对在大豆遗传育种、大豆百粒重性状辅助鉴定、大豆百粒重性状筛选中的应用。

5.一种利用权利要求3所述分子标记HNUSOY05鉴定大豆百粒重性状的方法,其特征在于,以待测大豆基因组DNA为模板,利用权利要求3所述分子标记HNUSOY05的引物对进行PCR扩增;扩增产物采用琼脂糖凝胶电泳检测;若检测得到长度为637bp的单一片段,则待测大豆品种具有高百粒重性状;若检测得到长度为446bp的单一片段,则待测大豆品种具有低百粒重性状。

6.根据权利要求5所述方法,其特征在于,所述高百粒重是指籽粒的百粒重≥20.0克;所述低百粒重是指籽粒百粒重≤12.0克。

7.根据权利要求5所述方法,其特征在于,具体步骤如下:

1)提取待检测大豆样品中的基因组DNA;

2)以步骤1)所得的待检测大豆样品基因组DNA为模板,利用分子标记HNUSOY05的引物对进行PCR扩增反应,获得PCR产物;每25μL所述PCR反应体系包含2.5mmol/LMgCl2、1U rTaq酶、800μmol/L dNTP、0.2μmol/L上游引物HNUSOY05F和下游引物HNUSOY05R、50ng模板基因组DNA;

3)利用步骤2)所得PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳;若检测得到长度为637bp的单一片段,则待测大豆品种具有高百粒重性状;若检测得到长度为446bp的单一片段,则待测大豆品种具有低百粒重性状。

8.根据权利要求7所述方法,其特征在于,步骤2)所述PCR扩增反应为降落PCR扩增反应。

9.根据权利要求8所述方法,其特征在于,所述降落PCR扩增反应的程序为94℃预变性7min;94℃变性20s,60℃退火20s,每个循环降0.5℃,72℃延伸30s,30个循环;94℃变性20s,45℃退火20s,72℃延伸30s,10个循环;72℃终延伸7min。

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