本发明属于生物化学技术领域，具体涉及一种蛋白无血清培养基及其制备方法。
背景技术：
近年来，随着动物细胞培养技术的日益成熟，动物细胞培养生产疫苗、单克隆抗体以及功能蛋白的新兴产业迅速发展壮大。绝大多数的细胞培养需要动物来源的血清，血清可以为离体培养的细胞提供丰富的生长因子、激素和其它营养物质。然而，由于血清中蛋白种类较多、成分复杂，增加了下游提取工作的负担和成本。同时，血清价格昂贵、批次间质量不稳定、易引入动物源的病毒和支原体，给细胞培养带来了诸多不便。
无血清培养基是解决上述问题的关键，由于无血清培养基蛋白含量低、质量稳定、无病毒等潜在危险引入，大大降低了细胞培养和产物提取的成本，简化了生产工艺。无血清培养基的开发和应用有利于动物细胞的大规模、产业化培养。
目前国外已有生物企业研发的无血清培养基产品成功上市，如Gibco、Hyclone、Lonza等，但价格昂贵；国内无血清培养基的研发尚处于起步阶段，目前鲜有成熟品牌。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是提供一种蛋白无血清培养基及其制备方法，能够为细胞提供良好的生殖环境，且易于细胞提取。
为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：发明一种蛋白无血清培养基，其特征在于：1000质量份的超纯水中溶解以下质量份的粉状原料：
优选的，粉状原料的质量份数为：
优选的，所述粉状原料的粒径大于150目。
本发明还提供了一种上述蛋白无血清培养基的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)烘干：
按以下质量份数取原料：
进行混合烘干，制得混合料；
取1500～3000质量份碳酸氢钠烘干；
(2)制粉：将步骤(1)中的混合料球磨后过150目筛，取筛下部分并经混合制得第一粉末；烘干的碳酸氢钠球磨后过150目筛，取筛下部分制得第二粉末；
(3)溶解：使用时，将步骤(2)中制得的第一粉末溶于1000质量份的超纯水中，搅拌溶解均匀后加入第二粉末，再次搅拌溶解均匀，制得培养基；
(4)过滤除菌：将步骤(3)中制得的培养基过0.22μm滤膜进行过滤除菌。
优选的，步骤(1)中的烘干温度为50℃，烘干时间为1～2h。
优选的，步骤(2)中的球磨时间为30～60min。
优选的，步骤(2)中的混合由三维立体混合机来操作，操作时间为30～60min。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
1、细胞增殖：本发明的蛋白无血清培养基细胞增殖正常、活力稳定，与含8％小牛血清成品培养基相比无显著差异；
2、蛋白含量低：本发明的蛋白无血清培养基蛋白含量明显低于常规培养基，简化了提取工艺、降低了生产成本；
3、质量稳定：由于本产品成分已知、无动物源蛋白，重复生产质量稳定。
4、本发明适用范围广泛，可适用于Vero、BHK-21、A549、CHO等多种常用细胞系，且从常规血清培养基过渡简单，适应性快；
5、细胞贴壁速度快，以Vero细胞为例，采用本品培养6h，可贴壁90％以上；
6、本发明所有成分均已知，配置工艺简单、重现性较好。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细描述。
实施例一
本发明制备蛋白无血清培养基的步骤如下：
一种蛋白无血清培养基的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)烘干：
按以下质量份数取原料：
进行混合烘干，制得混合料；
取2800质量份碳酸氢钠烘干；本步骤中的烘干温度均为50℃，烘干时间为1h。
(2)制粉：将步骤(1)中的混合料球磨后过150目筛，球磨时间为45min，取筛下部分并经三维立体混合机混合45min制得第一粉末；烘干的碳酸氢钠球磨后过150目筛，取筛下部分制得第二粉末；第一粉末和第二粉末的储藏环境为温度2℃，避光且干燥的处所，待使用时现配现用；
(3)溶解：使用时，将步骤(2)中制得的第一粉末溶于1000质量份的超纯水中，搅拌溶解均匀后加入第二粉末，再次搅拌溶解均匀，制得培养基；
(4)过滤除菌：将步骤(3)中制得的培养基过0.22μm滤膜进行过滤除菌。
实施例二
本实施例与实施例一的不同之处在于：步骤(1)中的混合料由如下质量份的原料混合而成：
取1500质量份碳酸氢钠烘干；本步骤中的烘干时间为1.5h。
步骤(2)中球磨时间为30min，经三维立体混合机混合30min制得第一粉末；第一粉末和第二粉末的储藏环境为温度5℃；
实施例三
本实施例与实施例一的不同之处在于：步骤(1)中的混合料由如下质量份的原料混合而成：
取3000质量份碳酸氢钠烘干；本步骤中的烘干时间为2h。
步骤(2)中球磨时间为60min，经三维立体混合机混合60min制得第一粉末；第一粉末和第二粉末的储藏环境为温度8℃；
以Vero细胞为例，进行了对比试验，试验是在温度为37℃的环境中进行培养3天，CO2的通入量5.0％。其中，对比例一中所用培养基为MEM培养基+8％小牛血清，对比例二中所用培养基为F12培养基+8％小牛血清，实验数据如下：
从上述试验数据可以看出本发明的无血清培养基在细胞培育方面的主要性能完全不逊色于有血清的培养基，甚至还要优异些，完全能够满足细胞培育的需求。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以组合、变更或改型均为本发明的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。