一种用于脐带间充质干细胞的培养基的制作方法

文档序号：12940491阅读：642来源：国知局

本发明属于生物技术领域，特别涉及一种用于脐带间充质干细胞的培养基。

背景技术：

脐带间充质干细胞(mesenchymalstemcells，mscs)是指存在于新生儿脐带组织中的一种多功能干细胞，它能分化成许多种组织细胞，具有广阔的临床应用前景。

脐带间充质干细胞具有较高的分化潜能，可向多个方向进行分化。它在骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、内皮和心肌等组织工程方面具有广阔的临床应用前景。有报道从人脐带中分离出间充质干细胞，且细胞含量、增殖能力优于骨髓间充质干细胞，免疫原性比骨髓间充质干细胞低，并且具有取材方便，无伦理学争议等优点，因此越来越受到研究工作者们的关注。干细胞的培养体系主要应用含动物血清(如胎牛血清)的培养基，在此种环境下生长的干细胞，其内部结构会发生何种变化尚未可知。现有的培养基存在脐带间充质干细胞的生长速率低的问题。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种用于脐带间充质干细胞的培养基，以提高脐带间充质干细胞的生长速率，以及脐带间充质干细胞在体外增殖分化的活性。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种用于脐带间充质干细胞的培养基，由以下组分组成：

基础培养基、人血清白蛋白、杨梅素、三七总皂苷、大黄素、亚油酸、胰蛋白酶、抑肽酶、光蛋白聚糖、碱性成纤维细胞生长因子、叶酸、β-巯基乙醇、黄芪多糖、转铁蛋白、维生素、氨基酸。

具体的，各组分的含量如下：

基础培养基10-50g/l

人血清白蛋白5-20g/l

杨梅素5-20mg/l

三七总皂苷5-20mg/l

大黄素5-20mg/l

亚油酸2-10mg/l

胰蛋白酶1-10mg/l

抑肽酶4-10mg/l

光蛋白聚糖5-20μg/l

碱性成纤维细胞生长因子1-10μg/l

叶酸1-15mg/l

β-巯基乙醇2-10mg/l

黄芪多糖50-80mg/l

转铁蛋白1-10mg/l

维生素80-500mg/l

氨基酸80-500mg/l。

优选的，各组分的含量如下：

基础培养基20-30g/l

人血清白蛋白10-15g/l

杨梅素10-15mg/l

三七总皂苷10-15mg/l

大黄素10-15mg/l

亚油酸5-8mg/l

胰蛋白酶4-8mg/l

抑肽酶6-9mg/l

光蛋白聚糖10-15μg/l

碱性成纤维细胞生长因子2-8μg/l

叶酸5-10mg/l

β-巯基乙醇5-8mg/l

黄芪多糖60-70mg/l

转铁蛋白2-8mg/l

维生素180-360mg/l

氨基酸180-360mg/l。

更优选的，各组分的含量如下：

基础培养基24g/l

人血清白蛋白12g/l

杨梅素12mg/l

三七总皂苷12mg/l

大黄素13mg/l

亚油酸6mg/l

胰蛋白酶5mg/l

抑肽酶8mg/l

光蛋白聚糖13μg/l

碱性成纤维细胞生长因子5μg/l

叶酸8mg/l

β-巯基乙醇6mg/l

黄芪多糖68mg/l

转铁蛋白5mg/l

维生素280mg/l

氨基酸260mg/l。

所述人血清白蛋白为人脐血人血清白蛋白。

所述基础培养基为imdm培养基。

所述维生素为水溶性维生素，包括维生素b1，维生素b2和维生素c等。

所述氨基酸为多种氨基酸复合物，包括l-脯氨酸、l-丝氨酸、l-丙氨酸、l-异亮氨酸、l-门冬氨酸、l-酪氨酸、l-谷氨酸、l-苯丙氨酸、精氨酸、赖氨酸、缬氨酸、苏氨酸、组氨酸、甲硫氨酸、胱氨酸甘氨酸等的部分或者全部。

有益效果：本发明的培养基将基础培养基、人血清白蛋白、杨梅素、三七总皂苷、大黄素、亚油酸、胰蛋白酶、抑肽酶、光蛋白聚糖、碱性成纤维细胞生长因子、叶酸、β-巯基乙醇、黄芪多糖、转铁蛋白、维生素、氨基酸进行复配，各组分起到协同作用，能够成功培养脐带间充质干细胞，促进脐带间充质干细胞增殖，提高脐带间充质干细胞的生长速率，提高脐带间充质干细胞在体外增殖分化的活性，降低细胞凋亡率。

具体实施方式

根据下述实施例，可以更好的理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。

实施例1

基础培养基24g/l，人血清白蛋白12g/l，杨梅素12mg/l，三七总皂苷12mg/l，大黄素13mg/l，亚油酸6mg/l，胰蛋白酶5mg/l，抑肽酶8mg/l，光蛋白聚糖13μg/l，碱性成纤维细胞生长因子5μg/l，叶酸8mg/l，β-巯基乙醇6mg/l，黄芪多糖68mg/l，转铁蛋白5mg/l，维生素280mg/l，氨基酸260mg/l。