本发明涉及临床体外检测试剂技术领域，特别涉及一种丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒。
背景技术：
丙氨酸氨基转移酶主要存在于肝细胞浆内，细胞内浓度高于血清中1000-3000倍。只要有1%的肝细胞被破坏，就可以使血清酶增高一倍。因此，丙转氨酶被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。
如果丙氨酸氨基转移酶(alt)血清值超过正常上限2-3倍，并持续两周以上，表明有肝胆疾病存在的可能，但须排除嗜酒、化学药物中毒等对肝脏的损害;接触化学物质如四氯化碳、某些重金属、砒霜等可引起中毒性肝炎，以及某些生理状态下，如过度劳累、剧烈活动(乳酸在体内大量生成、积聚，使机体相对缺氧及低血糖，致使肝细胞膜通透性增加，引起转氨酶升高)、月经期时等都可能使转氨酶暂时性升高。上述原因造成的转氨酶增高一般不会高于60个单位（人血清或血浆中丙氨酸氨基转移酶参考范围为女性＜31u/l；男性＜41u/l），转氨酶值高于80个单位就有诊断价值，需到医院就诊。另外，丙转氨酶升高临床意义就在于对急性乙型肝炎、慢性肝炎、hbv携带者、重型肝炎以及肝硬化、肝癌等一系列病毒性肝炎的诊断和分析，alt的升高只表示肝脏可能受到了损害。除了肝炎，其他很多疾病都能引起丙转氨酶转氨酶升高。丙转氨酶活性变化与肝脏病理组织改变缺乏一致性，有的严重肝损患者丙转氨酶并不升高。因此肝功能损害需要综合其他情况来判断。
丙氨酸氨基转移酶(alt)升高要根据相关检查、结合病史、症状、体征等来综合判断。胆道疾病时，症状为发热、恶心、呕吐、腹痛、黄疸，临床上检查还可能伴随血胆红素升高。心脏疾病时，症状为胸闷、气短、浮肿、心悸，临床上检查伴有谷草转氨酶升高。肝脏疾病时，症状为低热、乏力、恶心、呕吐、食欲不振、失眠多梦、腹痛腹泻、肝区不适等。有丙氨酸氨基转移酶高的症状并不一定是肝炎引起的，应及时确定丙转氨酶高的原因，建议检查乙肝两对半明确是否有乙肝病毒感染，如果症状重，做对症治疗。当乙肝患者丙转氨酶升高，到正常值上限的2倍以上时，就应该进行抗病毒治疗。转氨酶水平越高，说明患者体内的免疫功能越活跃，抗病毒治疗的效果也就越好。此时就是乙肝抗病毒治疗最佳时期。
l-丙氨酸和α-酮戊二酸在alt的作用下产生丙酮酸和l-谷氨酸，丙酮酸与nadh和h+在ldh的作用下产生nad+。340nm波长下丙氨酸氨基转移酶的生成速度与nadh的消耗速度成正比。该方法是一种无需预处理样本，技术和设备要求不高，而精密度和特异性更高的分析方法。由于该方法不需要昂贵的设备，可以实现自动化，且可测定大量标本，因此受到临床广泛推广。但是普通的丙氨酸氨基转移酶检测试剂重复性不好，从而造成准确度差进而导致浪费试剂的不良后果。
技术实现要素：
针对现有技术中存在的问题，本发明提供了一种丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒。该试剂盒与常规的试剂盒相比，重复性好，准确度高，线性范围好，有利于试剂在临床上的推广应用。
本发明是通过以下措施实现的：
一种丙氨酸氨基转移酶酶检测试剂盒，其特征在于，它包含试剂r1、试剂r2和校准品，其中试剂r1组成为：
tris缓冲液100mmol/l
l-丙氨酸500mmol/l
乳酸脱氢酶（ldh）1200u/l
叠氮化钠0.5%（w/v）
试剂r2组成为：
tris缓冲液100mmol/l
nadh0.18mmol/l
α-酮戊二酸15mmol/l
aeo-90.1%-1%（v/v）。
所述试剂r1和试剂r2在使用时的体积比例为r1：r2=4：1。
本发明所使用的校准品为英国朗道公司生产的复合校准品。
本发明的试剂盒在具有双试剂功能的自动生化分析仪上进行，在340nm波长下记录吸光度值，其具体使用方法如下：
加入生理盐水、样本或校准品4μl，加入r1试剂300μl，预孵育5min后加入100μl的试剂r2，30秒后开始记录吸光度值a1，反应5min后，读取吸光度a2，并计算δa/min。
本发明的有益效果：
本发明提供的丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒，通过在试剂r2中加入aeo-9，通过分子中不同部分分别对于两相的亲和，使两相均将其看作本相的成分，分子排列在两相之间，使两相的表面相当于转入分子内部，从而降低表面张力。由于两相都将其看作本相的一个组分，就相当于两个相与表面活性剂分子都没有形成界面，就相当于通过这种方式部分的消灭了两个相的界面，就降低了表面张力和表面自由能，从而解决了试剂重复性不好这一难题，却不会对试剂的稳定性和准确度产生影响，有利于该试剂在市场中进一步的推广。
附图说明
图1实施例2试剂准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性;
图2实施例3试剂准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性;
图3实施例4试剂准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性;
图4实施例1-4试剂线性相关验证实验检测结果；
图5实施例1-4试剂稳定性验证实验检测结果；
图6实施例1-4试剂重复性实验检测结果。
具体实施方式
为了更好的理解本发明，下面结合具体实施例来进一步详细说明。
实施例1
选取市场上获得认可的一种准确度优异的丙氨酸氨基转移酶试剂盒作为对照组，它包括试剂r1、试剂r2、校准品。
其中试剂r1组成为：
tris缓冲液100mmol/l
l-丙氨酸500mmol/l
乳酸脱氢酶（ldh）1200u/l
叠氮化钠0.5%（w/v）
试剂r2组成为：
tris缓冲液100mmol/l
nadh0.18mmol/l
α-酮戊二酸15mmol/l。
本实施例描述的试剂盒，在使用时，其测定方法是采用具有双试剂功能的东芝120自动分析仪，操作如下：
加入生理盐水、样本或校准品20μl，之后再加入r1试剂400μl预孵育5min后加入100μl的试剂r2，30秒后开始记录吸光度值a1，反应5min后，读取吸光度a2，并计算δa/min。
本实施例所使用的校准品为英国朗道公司生产的复合校准品。
实施例2
该发明涉及的一种丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒，它包括试剂r1、试剂r2、校准品。
其中试剂r1组成为：
tris缓冲液100mmol/l
tris缓冲液100mmol/l
l-丙氨酸500mmol/l
乳酸脱氢酶（ldh）1200u/l
叠氮化钠0.5%（w/v）
试剂r2组成为：
tris缓冲液100mmol/l
nadh0.18mmol/l
α-酮戊二酸15mmol/l
aeo-90.1%（v/v）。
具体测定方法同实施例1。
实施例3
该发明涉及的一种丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒，它包括试剂r1、试剂r2、校准品。
其中试剂r1组成为：
tris缓冲液100mmol/l
tris缓冲液100mmol/l
l-丙氨酸500mmol/l
乳酸脱氢酶（ldh）1200u/l
叠氮化钠0.5%（w/v）
试剂r2组成为：
tris缓冲液100mmol/l
nadh0.18mmol/l
α-酮戊二酸15mmol/l
aeo-90.5%（v/v）。
具体测定方法同实施例1。
实施例4
该发明涉及的一种丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒，它包括试剂r1、试剂r2、校准品。
其中试剂r1组成为：
tris缓冲液100mmol/l
tris缓冲液100mmol/l
l-丙氨酸500mmol/l
乳酸脱氢酶（ldh）1200u/l
叠氮化钠0.5%（w/v）
试剂r2组成为：
tris缓冲液100mmol/l
nadh0.18mmol/l
α-酮戊二酸15mmol/l
aeo-91%（v/v）。
具体测定方法同实施例1。
对上述实施例1-4中制得的试剂盒分析性能进行实验验证。
准确度验证实验：
将实施例2、3、4的试剂盒作为实验组，实施例1中市场上获得认可的准确度优异的丙氨酸氨基转移酶试剂盒作为对照组进行对比实验，对40个样本进行检测，检测结果见图1-图3。
通过图1-图3检测数据可知，实施例2、3、4检测试剂盒与对照检测试剂盒的检测结果线性相关系数r分别为0.9982、0.9984、0.9985，相关性比较好，表明本发明的试剂盒与市场上获得认可的具有优异准确度的丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒有高度一致性，证明本发明试剂盒添加的其他各种成分对其准确性不会造成影响，试剂盒依然保持较好的准确度。
线性相关性验证实验：
找到丙氨酸氨基转移酶高值样本为800u/l，用生理盐水进行系列稀释，配制6个不同浓度的样本，依次为800u/l、640u/l、480u/l、320u/l、160u/l、0u/l浓度的样本，每个浓度水平各样本分别测定三次，分别取其平均值。分别利用实施例1、2、3、4的试剂进行检测。检测结果如图4所示。
上述检测结果显示，实施例1-4检测结果相关性均大于0.990，但实施例2、3、4的检测结果大于0.999，与实施例1相比具有更好的线性相关性，这说明本发明试剂具有更好的线性相关性。
稳定性验证实验：
在2℃～8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存试剂，检测四种实施例试剂的稳定性。四种试剂每月选取同一样本测定其吸光度三次，取平均值，与新鲜的实施例1试剂检测结果进行对比，从而确定试剂的稳定时间。检测数据如图5。
实验结果显示，实施例1-实施例4试剂在2℃～8℃、无腐蚀性气体的避光环境中能有效贮存15个月稳定，说明在试剂中加入aeo-9不会影响丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒的稳定性。
重复性验证实验：
在重复性条件下，用质控血清（正常值范围内）测试实施例1、2、3、4的试剂，重复测试10次，计算变异系数（cv），计算公式：
实验结果显示，实施例1的重复性为6.25%，而实施例2-实施例4的重复性分别为3.12%、3.44%、3.37%，均比实施例1的重复性好，说明在试剂中加入aeo-9能够有效的提高丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒的重复性。
综合以上分析，本发明提供的丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒，在试剂r2中通过加入一定量的aeo-9能够有效的提高丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒的重复性，而对试剂的准确度和稳定性没有影响。因此，本发明提供的重复性好的丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒有利于在市场中进一步的推广使用。