同时检测女性皮肤和发质SNP遗传多态性位点的复合扩增试剂盒及其应用的制作方法

本发明属于分子生物学领域，涉及一种分子标记及其应用，具体为一种同时检测女性皮肤和发质snp遗传多态性位点的复合扩增试剂盒及其应用。
背景技术：
：护肤和美发一直是女性关注的焦点。消费者调查研究显示，随着经济水平的增长，女性在护肤和美发上的花费也越来越高。但越来越高的投入消费并没有真的为女性带来好的皮肤和发质，反而常常造成粗糙暗沉或者头发分叉打结等更严重的后果。研究表明，人的基因差异性导致皮肤和发质属性在个体间有很大不同。mmp1(基质金属蛋白酶1)，又称间质性胶原酶，属基质金属蛋白酶家族，主要作用底物为纤维性胶原，可降解细胞外基质(emc)中的胶原纤维和明胶及改变细胞的微环境。当mmp1过度表达时，会降解emc的胶原蛋白，真皮层结构由于胶原蛋白的分解而遭到破坏，导致皮肤出现皱缩细纹等衰老症状。mc1r基因是黑素皮质素受体1基因，可调节皮肤中黑色素生成的量，控制黑色素细胞修复紫外线造成的dna伤害，mc1r信号缺陷会延缓机体清除皮肤中已经存在的dna损伤的能力，有助于黑色素的发展。当mc1r的snp位点等位基因由c突变为t时对光更敏感，容易使色素沉着，雀斑发生的可能性更高。nqo1基因编码醌氧化还原酶1，可通过两种途径催化体内的醌类物质，其中一种途径会导致细胞内产生大量的自由基和活性氧基团，故该基因上的位点突变，会使不同基因携带者的抗氧化能力有所不同。aqp3水通道蛋白是一类在细胞膜上与水分子通透性相关的转运蛋白，可增加细胞膜的水通透性，在机体内水平衡和内环境维持中发挥重要作用。aqp3基因是编码水通道蛋白的基因之一，主要在皮肤中表达，该基因的多态位点造成不同基因型人群皮肤水合能力产生差异。研究发现，在亚洲人中，fgfr2和edar两个基因发生突变时，会导致毛囊生长增加生成较厚的毛发。针对此，为帮助护肤美发的女性从基因层面更科学的了解自身特质，针对性的改善原有饮食习惯，选择具有合适成分的护肤美发产品，有必要对女性的皮肤发质基因进行检测。目前市场上此类检测并不多，常见的有皮肤抗氧化、抗老化和保湿能力方面的检测，检测位点少，且使用检测方法为芯片检测，一次性检测成本高；关于发质基因的检测产品，还未出现。上述检测现状限制了基因检测在女性皮肤发质方面的应用价值。技术实现要素：解决的技术问题：为了克服现有技术的缺陷，获得一种检测位点涵盖全面，检测方法简单，检测成本低的产品，本发明提供了同时检测女性皮肤和发质snp遗传多态性位点的复合扩增试剂盒及其应用。技术方案：同时检测女性皮肤和发质snp遗传多态性位点的复合扩增试剂盒，试剂盒包含6个snp位点基因座的引物，所述6个snp位点基因座为：mc1r(rs1805007)，nqo1(rs1800566)，aqp3(rs17553719)，fgfr2(rs4752566)，edar(rs3827760)，mmp1(rs1799750)；其中括号中的rs号表示该位点在dbsnp数据库中的编号。优选的，所述引物包括针对各个snp位点基因座的共用上游引物和特异性下游引物，特异性下游引物于3’末端第2位、第3位或第4位引入错配碱基。优选的，所述引物及其序列如下：用于检测位点mc1rrs1805007c/t/g/a的共用上游引物为：seq1：5’-atgagcaccagcatggctc-3’；用于检测位点mc1rrs1805007c的特异性引物为下列核苷酸序列之一：seq2：5’-tctccatcttctacgcattgc-3’；seq3：5’-tctccatcttctacgcacggc-3’；seq4：5’-tctccatcttctacgcacttc-3’；用于检测位点mc1rrs1805007t的特异性引物为下列核苷酸序列之一：seq5：5’-atttcatctccatcttctacgcattgt-3’；seq6：5’-atttcatctccatcttctacgcacggt-3’；seq7：5’-atttcatctccatcttctacgcacttt-3’用于检测位点mc1rrs1805007g的特异性引物为下列核苷酸序列之一：seq8：5’-atttctttctccatcttctacgcagtgg-3’；seq9：5’-atttctttctccatcttctacgcacggg-3’；seq10：5’-atttctttctccatcttctacgcacttg-3’用于检测位点mc1rrs1805007a的特异性引物为下列核苷酸序列之一：seq11：5’-atttggcatctccatcttctacgcattgt-3’；seq12：5’-atttggcatctccatcttctacgcacgat-3’；seq13：5’-attggtcatctccatcttctacgcacttt-3’用于检测位点nqo1rs1800566c/t/a的共用上游引物为：seq14：5’-gcatggaagctgttgacttac-3’；用于检测位点nqo1rs1800566c的特异性引物为下列核苷酸序列之一：seq15：5’-caatgctatatgtcagttcagg-3’；seq16：5’-caatgctatatgtcagttacgg-3’；seq17：5’-caatgctatatgtcagttgatg-3’用于检测位点nqo1rs1800566t的特异性引物为下列核苷酸序列之一：seq18：5’-atttcaatgctatatgtcagttcaga-3’；seq19：5’-atttcaatgctatatgtcagttgcga-3’；seq20：5’-atttcaatgctatatgtcagttgata-3’用于检测位点nqo1rs1800566a的特异性引物为下列核苷酸序列之一：seq21：5’-atttattcaatgctatatgtcagttcagt-3’；seq22：5’-atttattcaatgctatatgtcagttgtgt-3’；seq23：5’-atttattcaatgctatatgtcagttgatt-3’用于检测位点aqp3rs17553719t/g/c的共用上游引物为：seq24：5’-agagtttggggagtgcatcg-3’；用于检测位点aqp3rs17553719t的特异性引物为下列核苷酸序列之一：seq25：5’-atccgctgctcgctgcacca-3’；seq26：5’-atccgctgctcgctgctgca-3’；seq27：5’-atccgctgctcgctgctcga-3’用于检测位点aqp3rs17553719g的特异性引物为下列核苷酸序列之一：seq28：5’-atttatccgctgctcgctgcaccg-3’；seq29：5’-atttatccgctgctcgctgctagg-3’；seq30：5’-atttatccgctgctcgctgcgctg-3’用于检测位点aqp3rs17553719c的特异性引物为下列核苷酸序列之一：seq31：5’-ttatccgctgctcgctgctagc-3’；seq32：5’-ttatccgctgctcgctgcaccc-3’；seq33：5’-ttatccgctgctcgctgcgcac-3’用于检测位点fgfr2rs4752566t/g的共用上游引物为：seq34：5’-ctgtgggttccgcattcat-3’；用于检测位点fgfr2rs4752566t的特异性引物为下列核苷酸序列之一：seq35：5’-attacaaccccgaatatacgtaaaga-3’；seq36：5’-attacaaccccgaatatacgtaagta-3’；seq37：5’-atattacaaccccgaatatacgtagata-3’用于检测位点fgfr2rs4752566g的特异性引物为下列核苷酸序列之一：seq38：5’-acaaccccgaatataccaaaagc-3’；seq39：5’-acaaccccgaatataccaaattc-3’；seq40：5’-acaaccccgaatataccaagatc-3’用于检测位点edarrs3827760c/t/g的共用上游引物为：seq41：5’-gtgctgatgcggtcaaagagt-3’；用于检测位点edarrs3827760c的特异性引物为下列核苷酸序列之一：seq42：5’-acgtacaactctgagaagcctc-3’；seq43：5’-acgtacaactctgagaaggcac-3’；seq44：5’-acgtacaactctgagaaggatc-3’用于检测位点edarrs3827760t的特异性引物为下列核苷酸序列之一：seq45：5’-attacgtacaactctgagaaggctt-3’；seq46：5’-attacgtacaactctgagaagccat-3’；seq47：5’-attacgtacaactctgagaagcatt-3’用于检测位点edarrs3827760g的特异性引物为下列核苷酸序列之一：seq48：5’-attgttacgtacaactctgagaaggctg-3’；seq49：5’-attgttacgtacaactctgagaagccag-3’；seq50：5’-attgttacgtacaactctgagaagcatg-3’用于检测位点mmp1rs1799750g/-的上游引物为：seq51：5’-tcccacctttcccactgtatc-3’；用于检测位点mmp1rs1799750g/-的下游引物为：seq52：5’-tcttcccattcttcttacc-3’；其中，下划线标记的碱基为引入的错配碱基。进一步的，检测位点为mc1rrs1805007c时，使用引物组合为共用上游引物seq1以及seq4；检测位点为mc1rrs1805007t时，使用引物组合为共用上游引物seq1以及seq5；检测位点为mc1rrs1805007g时，使用引物组合为共用上游引物seq1以及seq9；检测位点为mc1rrs1805007a时，使用引物组合为共用上游引物seq1以及seq12；检测位点为nqo1rs1800566c时，使用引物组合为共用上游引物seq14以及seq16；检测位点为nqo1rs1800566t时，使用引物组合为共用上游引物seq14以及seq20；检测位点为nqo1rs1800566a时，使用引物组合为共用上游引物seq14以及seq22；检测位点为aqp3rs17553719t时，使用引物组合为共用上游引物seq24以及seq27；检测位点为aqp3rs17553719g时，使用引物组合为共用上游引物seq24以及seq29；检测位点为aqp3rs17553719c时，使用引物组合为共用上游引物seq24以及seq31；检测位点为fgfr2rs4752566t时，使用引物组合为共用上游引物seq34以及seq35；检测位点为fgfr2rs4752566g时，使用引物组合为共用上游引物seq34以及seq38；检测位点为edarrs3827760c时，使用引物组合为共用上游引物seq41以及seq44；检测位点为edarrs3827760t时，使用引物组合为共用上游引物seq41以及seq46；检测位点为edarrs3827760g时，使用引物组合为共用上游引物seq41以及seq48；检测位点mmp1rs1799750g/-时，使用引物组合为上游引物seq51及seq52。优选的，所述引物通过荧光染料fam标记。优选的，所述试剂盒包含分子量内标，且通过荧光染料siz标记。优选的，所述试剂盒包括反应混合物、热启动taq酶、sdh2o；其中，反应混合物包括：mgcl27.5mm，tris-hclbuffer125mm，kcl125mm，dntps7.5mm，bsa2mg/ml。以上所述试剂盒在同时检测女性皮肤和发质中的应用。有益效果：(1)本发明所述试剂盒通过引物优化，提高引物对snp的识别能力，使引物能有效识别一个碱基的差异，扩大了最适退火温度范围，避免了因退火温度要求精确所导致检测结果的假阳性发生，提高了检测准确性和可靠性；(2)本发明所述试剂盒首次将arms技术与毛细管电泳方法结合，将4个女性皮肤基因和2个发质基因同时检测，是目前女性皮肤和发质检测位点最多的试剂盒；(3)本发明所述试剂盒使用方便，操作方法简单，检测时长缩短。附图说明图1是本发明试剂盒对标准品9948分型结果图；图2是本发明试剂盒对志愿者1分型结果图；图3是本发明试剂盒对志愿者2分型结果图。具体实施方式以下实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改和替换，均属于本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。以下实施例中未作具体说明的分子生物学试验方法，均参照《分子克隆实验指南》(第三版)或者按照试剂盒和产品说明书进行；所述试剂盒生物材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。实施例中，pcr仪购自德国eppendorf公司，型号为mastercyclernexus；abi3130xl遗传分析仪购自美国abi公司；c-taqdna聚合酶、reactionmix、siz-500为本公司产品。实施例1同时检测女性皮肤和发质snp遗传多态性位点的复合扩增试剂盒，试剂盒包含6个snp位点基因座的引物，所述6个snp位点基因座为：mc1r(rs1805007)，nqo1(rs1800566)，aqp3(rs17553719)，fgfr2(rs4752566)，edar(rs3827760)，mmp1(rs1799750)；其中括号中的rs号表示该位点在dbsnp数据库中的编号。所述引物包括针对各个snp位点基因座的共用上游引物和特异性下游引物，特异性下游引物于3’末端第2位、第3位或第4位引入错配碱基。所述引物及其序列如下：用于检测位点mc1rrs1805007c/t/g/a的共用上游引物为：seq1：5’-atgagcaccagcatggctc-3’；用于检测位点mc1rrs1805007c的特异性引物为下列核苷酸序列之一：seq2：5’-tctccatcttctacgcattgc-3’；seq3：5’-tctccatcttctacgcacggc-3’；seq4：5’-tctccatcttctacgcacttc-3’；用于检测位点mc1rrs1805007t的特异性引物为下列核苷酸序列之一：seq5：5’-atttcatctccatcttctacgcattgt-3’；seq6：5’-atttcatctccatcttctacgcacggt-3’；seq7：5’-atttcatctccatcttctacgcacttt-3’用于检测位点mc1rrs1805007g的特异性引物为下列核苷酸序列之一：seq8：5’-atttctttctccatcttctacgcagtgg-3’；seq9：5’-atttctttctccatcttctacgcacggg-3’；seq10：5’-atttctttctccatcttctacgcacttg-3’用于检测位点mc1rrs1805007a的特异性引物为下列核苷酸序列之一：seq11：5’-atttggcatctccatcttctacgcattgt-3’；seq12：5’-atttggcatctccatcttctacgcacgat-3’；seq13：5’-attggtcatctccatcttctacgcacttt-3’用于检测位点nqo1rs1800566c/t/a的共用上游引物为：seq14：5’-gcatggaagctgttgacttac-3’；用于检测位点nqo1rs1800566c的特异性引物为下列核苷酸序列之一：seq15：5’-caatgctatatgtcagttcagg-3’；seq16：5’-caatgctatatgtcagttacgg-3’；seq17：5’-caatgctatatgtcagttgatg-3’用于检测位点nqo1rs1800566t的特异性引物为下列核苷酸序列之一：seq18：5’-atttcaatgctatatgtcagttcaga-3’；seq19：5’-atttcaatgctatatgtcagttgcga-3’；seq20：5’-atttcaatgctatatgtcagttgata-3’用于检测位点nqo1rs1800566a的特异性引物为下列核苷酸序列之一：seq21：5’-atttattcaatgctatatgtcagttcagt-3’；seq22：5’-atttattcaatgctatatgtcagttgtgt-3’；seq23：5’-atttattcaatgctatatgtcagttgatt-3’用于检测位点aqp3rs17553719t/g/c的共用上游引物为：seq24：5’-agagtttggggagtgcatcg-3’；用于检测位点aqp3rs17553719t的特异性引物为下列核苷酸序列之一：seq25：5’-atccgctgctcgctgcacca-3’；seq26：5’-atccgctgctcgctgctgca-3’；seq27：5’-atccgctgctcgctgctcga-3’用于检测位点aqp3rs17553719g的特异性引物为下列核苷酸序列之一：seq28：5’-atttatccgctgctcgctgcaccg-3’；seq29：5’-atttatccgctgctcgctgctagg-3’；seq30：5’-atttatccgctgctcgctgcgctg-3’用于检测位点aqp3rs17553719c的特异性引物为下列核苷酸序列之一：seq31：5’-ttatccgctgctcgctgctagc-3’；seq32：5’-ttatccgctgctcgctgcaccc-3’；seq33：5’-ttatccgctgctcgctgcgcac-3’用于检测位点fgfr2rs4752566t/g的共用上游引物为：seq34：5’-ctgtgggttccgcattcat-3’；用于检测位点fgfr2rs4752566t的特异性引物为下列核苷酸序列之一：seq35：5’-attacaaccccgaatatacgtaaaga-3’；seq36：5’-attacaaccccgaatatacgtaagta-3’；seq37：5’-atattacaaccccgaatatacgtagata-3’用于检测位点fgfr2rs4752566g的特异性引物为下列核苷酸序列之一：seq38：5’-acaaccccgaatataccaaaagc-3’；seq39：5’-acaaccccgaatataccaaattc-3’；seq40：5’-acaaccccgaatataccaagatc-3’用于检测位点edarrs3827760c/t/g的共用上游引物为：seq41：5’-gtgctgatgcggtcaaagagt-3’；用于检测位点edarrs3827760c的特异性引物为下列核苷酸序列之一：seq42：5’-acgtacaactctgagaagcctc-3’；seq43：5’-acgtacaactctgagaaggcac-3’；seq44：5’-acgtacaactctgagaaggatc-3’用于检测位点edarrs3827760t的特异性引物为下列核苷酸序列之一：seq45：5’-attacgtacaactctgagaaggctt-3’；seq46：5’-attacgtacaactctgagaagccat-3’；seq47：5’-attacgtacaactctgagaagcatt-3’用于检测位点edarrs3827760g的特异性引物为下列核苷酸序列之一：seq48：5’-attgttacgtacaactctgagaaggctg-3’；seq49：5’-attgttacgtacaactctgagaagccag-3’；seq50：5’-attgttacgtacaactctgagaagcatg-3’用于检测位点mmp1rs1799750g/-的上游引物为：seq51：5’-tcccacctttcccactgtatc-3’；用于检测位点mmp1rs1799750g/-的下游引物为：seq52：5’-tcttcccattcttcttacc-3’；其中，下划线标记的碱基为引入的错配碱基。所述引物通过荧光染料fam标记。所述试剂盒包含分子量内标，且通过荧光染料siz标记。所述试剂盒包括反应混合物、热启动taq酶、sdh2o；其中，反应混合物包括：mgcl27.5mm，tris-hclbuffer125mm，kcl125mm，dntps7.5mm，bsa2mg/ml。实施例21、检材采集：检材为志愿者口腔拭字，共6份。2、模板dna提取：采用chelex-100法从6份志愿者的口腔拭子检材中提取模板dna。3、pcr扩增：(1)、使用的复扩检测引物为：mc1rrs1805007seq1：5’-atgagcaccagcatggctc-3’cseq4：5’-tctccatcttctacgcacttc-3’tseq5：5’-atttcatctccatcttctacgcattgt-3’gseq9：5’-atttctttctccatcttctacgcacggg-3’aseq12：5’-atttggcatctccatcttctacgcacgat-3’nqo1rs1800566seq14：5’-gcatggaagctgttgacttac-3’cseq16：5’-caatgctatatgtcagttacgg-3’tseq20：5’-atttcaatgctatatgtcagttgata-3’aseq22：5’-atttattcaatgctatatgtcagttgtgt-3’aqp3rs17553719seq24：5’-agagtttggggagtgcatcg-3’tseq27：5’-atccgctgctcgctgctcga-3’gseq29：5’-atttatccgctgctcgctgctagg-3’cseq31：5’-ttatccgctgctcgctgctagc-3’fgfr2rs4752566seq34：5’-ctgtgggttccgcattcat-3’tseq35：5’-attacaaccccgaatatacgtaaaga-3’gseq38：5’-acaaccccgaatataccaaaagc-3’edarrs3827760seq41：5’-gtgctgatgcggtcaaagagt-3’cseq44：5’-acgtacaactctgagaaggatc-3’tseq46：5’-attacgtacaactctgagaagccat-3’gseq48：5’-attgttacgtacaactctgagaaggctg-3’mmp1rs1799750seq51：5’-tcccacctttcccactgtatc-3’g/-seq52：5’-tcttcccattcttcttacc-3’(2)、pcr扩增体系为：采用上述复合扩增引物进行pcr扩增10μl体系：模板dna1μl复合扩增引物2μlreactionmix4.0μlc-taqdna聚合酶0.4μldh2o2.6μl(3)、pcr扩增程序为：95℃变性2min，然后94℃变性30s，60℃退火60s，72℃延伸1min，进行29个循环，最后72℃保温10min，10℃保存。4、毛细管电泳检测：以siz-500作为dna分子量内标，将上述pcr扩增产物1μl、甲酰胺12μl内标siz-5001μl混合后加入96孔板中，95℃变性3min，立即冰浴3min，离心后放入abi3130xl遗传分析仪进行电泳检测，其中2份志愿者的基因座分型检测结果如图2、3所示。5、检测结果及建议：(1)志愿者1的基因检测结果及建议:检测结果显示该志愿者皮肤的胶原蛋白分解速度较快，皮肤弹性下降风险中等；抗晒能力强，紫外线照射下色素不容易沉着；皮肤抗氧化能力中等；皮肤保湿能力弱。鉴于头发密度也会受环境及平时护理影响，该志愿者可能头发密度一般。该检测结果与志愿者实际情况接近。饮食方面：建议多食用猪蹄、猪皮、牛蹄筋、鸡翅、甲鱼、鱼皮等富含胶原蛋白的食物；多食用蔬菜(菠菜、甘蓝、萝卜玉米等)、水果(蓝莓、樱桃等)、绿茶、香菇真菌类等，另外蜂蜜、西红柿、西兰花、胡萝卜、牛奶、大豆、猕猴桃、三文鱼、海带等可能有利于皮肤保湿。避免奶油、全脂牛奶、人造黄油和奶糖，避免饱和脂肪酸，避免吃进太多含胡萝卜素的蔬果如胡萝卜、木瓜等。护肤品方面：优选含有透明质酸、吡咯烷酮羧酸钠(pcana)、尿素、神经酰胺、角鲨烷、氨基酸类、脂肪酸类、植物油类(氢化蓖麻油、乳木果油、葡萄籽油等)等成分的护肤品。避免含有香料、酒精、色素等成分分护肤品。(2)志愿者2的基因检测结果及建议:检测结果显示该志愿者的皮肤胶原蛋白分解速度快，皮肤弹性下降风险高；抗晒能力强，紫外线照射下色素不容易沉着；皮肤抗氧化能力中等；皮肤保湿能力弱；在无病理等意外情况影响下，该志愿者头发浓密。该检测结果与志愿者实际情况接近。饮食方面：多食用抗氧化类食物如蔬菜(菠菜、甘蓝、萝卜玉米等)、水果(蓝莓、樱桃等)、绿茶、香菇真菌类等；富含维生素e的食物如坚果类(腰果、核桃、榛子等)；富含胶原蛋白的食物如猪蹄、猪皮、牛蹄筋、鸡翅、甲鱼、鱼皮等。避免奶油、全脂牛奶、人造黄油和奶糖，避免饱和脂肪酸以及含胡萝卜素的蔬果如胡萝卜、木瓜等。蜂蜜、西红柿、西兰花、胡萝卜、牛奶、大豆、猕猴桃、三文鱼、海带等可能有利于皮肤保湿。护肤品方面：优选含有辅酶q10、艾地苯醌、维生素c及其衍生物(维生素c葡萄糖苷、维生素c磷酸镁、维生素c棕榈酸酯)、α-硫辛酸、葡萄籽浸液、番茄红素等成分的护肤品；避免含有皂基、椰油酰羟乙磺胺、椰油酰胺丙基甜菜碱、月桂基硫酸铵(als)，月桂醇硫酸酯钠(sls)，月桂醇聚醚硫酸酯钠(sles)，月桂醇聚醚硫酸酯(mles)等成分的护肤品。序列表<110>无锡中德美联生物技术有限公司南京迪康金诺生物技术有限公司<120>同时检测女性皮肤和发质snp遗传多态性位点的复合扩增试剂盒及其应用<160>52<170>siposequencelisting1.0<210>1<211>19<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>1atgagcaccagcatggctc19<210>2<211>21<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>2tctccatcttctacgcattgc21<210>3<211>21<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>3tctccatcttctacgcacggc21<210>4<211>21<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>4tctccatcttctacgcacttc21<210>5<211>27<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>5atttcatctccatcttctacgcattgt27<210>6<211>27<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>6atttcatctccatcttctacgcacggt27<210>7<211>27<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>7atttcatctccatcttctacgcacttt27<210>8<211>28<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>8atttctttctccatcttctacgcagtgg28<210>9<211>28<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>9atttctttctccatcttctacgcacggg28<210>10<211>28<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>10atttctttctccatcttctacgcacttg28<210>11<211>29<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>11atttggcatctccatcttctacgcattgt29<210>12<211>29<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>12atttggcatctccatcttctacgcacgat29<210>13<211>29<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>13attggtcatctccatcttctacgcacttt29<210>14<211>21<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>14gcatggaagctgttgacttac21<210>15<211>22<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>15caatgctatatgtcagttcagg22<210>16<211>22<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>16caatgctatatgtcagttacgg22<210>17<211>22<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>17caatgctatatgtcagttgatg22<210>18<211>26<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>18atttcaatgctatatgtcagttcaga26<210>19<211>26<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>19atttcaatgctatatgtcagttgcga26<210>20<211>26<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>20atttcaatgctatatgtcagttgata26<210>21<211>29<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>21atttattcaatgctatatgtcagttcagt29<210>22<211>29<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>22atttattcaatgctatatgtcagttgtgt29<210>23<211>29<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>23atttattcaatgctatatgtcagttgatt29<210>24<211>20<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>24agagtttggggagtgcatcg20<210>25<211>20<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>25atccgctgctcgctgcacca20<210>26<211>20<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>26atccgctgctcgctgctgca20<210>27<211>20<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>27atccgctgctcgctgctcga20<210>28<211>24<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>28atttatccgctgctcgctgcaccg24<210>29<211>24<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>29atttatccgctgctcgctgctagg24<210>30<211>24<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>30atttatccgctgctcgctgcgctg24<210>31<211>22<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>31ttatccgctgctcgctgctagc22<210>32<211>22<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>32ttatccgctgctcgctgcaccc22<210>33<211>22<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>33ttatccgctgctcgctgcgcac22<210>34<211>19<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>34ctgtgggttccgcattcat19<210>35<211>26<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>35attacaaccccgaatatacgtaaaga26<210>36<211>26<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>36attacaaccccgaatatacgtaagta26<210>37<211>28<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>37atattacaaccccgaatatacgtagata28<210>38<211>23<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>38acaaccccgaatataccaaaagc23<210>39<211>23<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>39acaaccccgaatataccaaattc23<210>40<211>23<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>40acaaccccgaatataccaagatc23<210>41<211>21<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>41gtgctgatgcggtcaaagagt21<210>42<211>22<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>42acgtacaactctgagaagcctc22<210>43<211>22<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>43acgtacaactctgagaaggcac22<210>44<211>22<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>44acgtacaactctgagaaggatc22<210>45<211>25<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>45attacgtacaactctgagaaggctt25<210>46<211>25<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>46attacgtacaactctgagaagccat25<210>47<211>25<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>47attacgtacaactctgagaagcatt25<210>48<211>28<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>48attgttacgtacaactctgagaaggctg28<210>49<211>28<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>49attgttacgtacaact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