嗜硫小红卵菌菌株，嗜硫小红卵菌菌剂及其应用的制作方法

本发明涉及生物农药技术领域，尤其涉及一种嗜硫小红卵菌菌剂在防控 纹枯病中的应用。

背景技术：

水稻纹枯病是水稻三大病害之一，由立枯丝核菌(Rhzioeotniasoalni) 引起。该病害在水稻整个生育期均可发生，主要危害叶鞘、叶片，危害大、 流行性强、寄主范围广，其产生的菌核抗逆能力强，对水稻的高产稳产造 成重大影响。

由于纹枯病菌腐生能力强、寄主范围广，国内外至今未发现对该病的 高抗品种。该病害的主要防治药剂-井冈霉素已产生明显的抗药性，每季的 用药次数已从20年前的2次增加到现在的3-5次。而化学药剂的使用引起 环境污染和农产品质量安全等重大问题。因此，筛选新型生物药剂防治水 稻纹枯病成为及其迫切的需要。

光合细菌(Photosynthetic Bacteria,PSB)是一类具有光能合成体系 的原核生物，能够以光为能源、在厌氧条件下利用自然界中的有机物、硫 化物、氨等作为供氢体兼碳源进行光合作用，属于革兰氏阴性菌。光合细 菌广泛分布于自然界的土壤、水田、沼泽、湖泊、江海等水生环境。光合 细菌绿色环保，生产条件简单，成本低，经济效益显著，使用十分方便。 农业上光合细菌已有较多研究，有研究表明光合细菌可以提高土壤肥力， 改善土壤盐化，板结现象。光合细菌喷洒还能改善植株根际微生物群落结 构，维持土壤生态系统的稳定，诱导作物对病害抗性，并且防治蔬菜病毒 病效果显著。目前，光合细菌防治水稻纹枯病的研究还未曾报道，本发明 发现光合细菌中的嗜硫小红卵菌防治水稻纹枯病具有很好的效果，在生产 实际中具有广阔的应用前景。

技术实现要素：

针对现有技术存在的不足，本发明目的是提供一种嗜硫小红卵菌菌株， 以解决上述背景技术中提出的问题。

为了实现上述目的，本发明是通过如下的技术方案来实现：一种嗜硫 小红卵菌菌株，所述嗜硫小红卵菌菌株为嗜硫小红卵菌IV-1，保藏于中国 典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2012369。

含有菌株的嗜硫小红卵菌菌剂。

进一步地，所述嗜硫小红卵菌菌剂由嗜硫小红卵菌菌株经活化、种子 培养、生产培养制备得到。

进一步地，菌浓度为10⁸-10¹⁰cfu/mL。

嗜硫小红卵菌菌剂在防治水稻纹枯病上的应用。

本发明的有益效果：本发明的一种嗜硫小红卵菌菌株，生产成本低、 生长速度快，高效、无毒、环保，可通过简单、快捷的操作方法制备得到 细菌菌剂，使用本发明菌株制备得到的菌剂具有使用方便，对水稻纹枯病 防治效果好，能够有效保障水稻的安全生产。

附图说明

通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明 的其它特征、目的和优点将会变得更明显：

图1为本发明实例2中2016年嗜硫小红卵菌菌剂对水稻纹枯病的防治 效果对比图。

图2为本发明实例3中2017年嗜硫小红卵菌菌剂对水稻纹枯病的防治 效果对比图。

具体实施方式

为使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了 解，下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。

本发明提供一种技术方案：一种嗜硫小红卵菌菌株，所述嗜硫小红卵 菌菌株为嗜硫小红卵菌IV-1，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号 为CCTCC NO:M2012369。

作为本发明的一个实施例：一种嗜硫小红卵菌IV-1(Rhodovulum sulfidophilum IV-1)菌株，保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)， 保藏编号为CCTCC NO：M2012369，保藏单位地址位于中国武汉大学，保藏 日期为2012年9月26日，该菌株被命名为嗜硫小红卵菌IV-1 (Rhodovulum sulfidophilum IV-1)。

所述嗜硫小红卵菌菌株IV-1，具有以下主要特征：G-，个体形态为卵 杆状，V-P反应阳性，甲基红反应阴性，H2S阳性，吲哚反应和过氧化氢 酶反应阳性，质量浓度为3％NaCl中能生长，最适生长温度为30～35℃， 最适生长pH值为6.5～7.5，菌体的特征吸收峰为385nm、525nm、585nm、 805nm和865nm，16S rDNA序列长度为1338bp，在Genbank中的登录号为 KF682218。

上述的应用，优选的，所述嗜硫小红卵菌菌剂的制备方法具体包括以 下步骤：

(1)活化：将嗜硫小红卵菌菌株IV-1的超低温保存种按平板培养法 进行培养，培养至红色菌落出现；平板培养法优选是采用双层MSYN固体培 养基进行培养，pH值优选为7.0～

7.2，培养温度优选为30℃～35℃，光照条件优选为2000～3000Lx；

(2)种子培养：将步骤(1)培养的红色单菌落接入血清瓶，用嗜硫 小红卵菌菌株IV-1种子培养基培养至对数生长期；种子培养基优选为MSYN 液体培养基，pH值优选为7.0～7.2，培养温度优选为30～35℃，光 照条件优选为2000～3000Lx；

(3)生产培养：将步骤(2)培养后得到的菌液按不少于嗜硫小红卵 菌菌株IV-1生产培养基总体积1％的接种量，优选1～5％，接种到生产 瓶中，用嗜硫小红卵菌菌株IV-1生产培养基培养至对数生长期；生产培养 基优选为MSYN液体培养基，pH值优选为7.0～7.2，培养温度优选为 30～35℃，光照条件优选为2000～3000Lx；

(4)菌剂制备：将步骤(3)生产培养得到的菌液分装，优选菌浓度 为5×10⁹cfu/mL。

所述嗜硫小红卵菌菌剂在防控水稻纹枯病上的应用：在水稻分蘖盛期， 嗜硫小红卵菌菌剂兑水稀释500倍喷施，每隔15天后喷施一次，一共喷施 3次，最后一次喷完15天后开展纹枯病病情指数调查，确定防治效果。

作为本发明的一个实施例：嗜硫小红卵菌菌剂的制备

本发明提供的一种嗜硫小红卵菌IV-1(Rhodovulum sulfidophilum IV-1)菌株，保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)，保藏编号为 CCTCC NO：M2012369，保藏单位地址位于中国武汉大学，保藏日期为2012 年9月26日。

一种本发明的嗜硫小红卵菌菌剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)活化：将嗜硫小红卵菌IV-1菌株的保存种按双层平板培养法进 行培养，培养至红色单菌落出现；采用的培养基为光合细菌固体培养基， 配方为：(NH4)2SO4 0.1wt％、Mg SO4 0.02wt％、NaHCO3 0.5wt％、K2HPO4 0.05 wt％、NaCl 0.02wt％、酵母膏0.15wt％和琼脂1.5wt％，pH＝7.0。

(2)种子培养：将步骤(1)培养出得红色单菌落接入至120mL血清 瓶中，在温度为30℃～32℃、光照条件为2000Lx～300Lx、pH＝7.0条 件下，用光合细菌液体培养基培养至对数生长期；。

(3)生产培养：将步骤(2)种子培养后得到的菌液接种到生产瓶中， 用光合细菌生产培养基(培养基成分与上述光合细菌液体培养基一致)进 行生产培养，菌液的接种量为所述光合细菌菌株生产培养基总体积的5％， 在温度为30℃～32℃、光照条件为2500Lx～4000Lx、pH＝7.0条件下， 培养至对数生长期。

(4)菌剂制备：将步骤(3)生产培养得到的菌液分装，优选菌浓度 为5×10⁹cfu/mL。

作为本发明的一个实施例：2016年嗜硫小红卵菌菌剂田间对水稻纹枯 病的防控

试验地设在长沙县春华镇，分别将实施例1制得的嗜硫小红卵菌菌剂 (浓度5×10⁹cfu/mL)兑水稀释500倍、化学农药(10％己唑醇，40mL/ 亩)、井冈霉素喷施于分蘖盛期的水稻叶片，每个处理设3个重复，每隔15 天喷施一次，共施用3次。最后一次施药15d后，按5点法取样计算水稻 叶片病情指数，并计算各自的防治效果。

图1为2016年实施例2的嗜硫小红卵菌菌剂、化学农药以及井冈霉素 对水稻纹枯病的防治效果对比图。从图1中可知：与空白对照相比，施用 嗜硫小红卵菌菌剂、化学农药以及井冈霉素各自的防治效果为78.73％、 76.25％和69.48％，并且通过统计分析发现，喷施嗜硫小红卵菌菌剂与化学 农药、井冈霉素的防治效果没有显著性差异(P<0.01)。

作为本发明的一个实施例：2017年嗜硫小红卵菌菌剂田间对水稻纹枯 病的防控

试验地设在长沙县春华镇，分别将实施例1制得的嗜硫小红卵菌菌剂 (浓度5×10⁹cfu/mL)兑水稀释500倍、化学农药(10％己唑醇，40mL/ 亩)、井冈霉素喷施于分蘖盛期的水稻叶片，每个处理设3个重复，每隔15 天喷施一次，共施用3次。最后一次施药15d后，按5点法取样计算水稻 叶片病情指数，并计算各自的防治效果。

图2为2017年实施例3的嗜硫小红卵菌菌剂、化学农药以及井冈霉素 对水稻纹枯病的防治效果对比图。从图2中可知：与空白对照相比，施用 嗜硫小红卵菌菌剂、化学农药以及井冈霉素各自的防治效果为77.42％、 79.33％和80.25％，并且通过统计分析发现，喷施嗜硫小红卵菌菌剂与化 学农药、井冈霉素的防治效果没有显著性差异(P<0.01)，表明光合细菌嗜 硫小红卵菌菌剂做为一种新型微生物菌剂，对水稻纹枯病具有非常好的防 治效果。

以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点,对 于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而 且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实 现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而 且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因 此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发 明内。

此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个 实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清 楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术 方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。