本发明涉及医药领域，具体涉及一种化合物及其制备方法和应用。
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部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。癌症是由多种因素引起的复杂性疾病，也被称为恶性肿瘤，其特征为异常细胞的失控生长并向其它部位扩散，进而引起组织和器官衰竭，最终导致死亡。根据最新的who统计数据，由于癌症导致的死亡数量每年高达数百万，到2030年全球各类癌症患者的数量将达到2200万，严重威胁了人类健康和生活质量。在与肿瘤发生发展密切相关的各类生物靶标中，作为受体酪氨酸激酶重要成员之一的间充质上皮细胞转化因子(c-met)，被广泛认为是干预和治疗癌症的重要靶标，有望为各种肿瘤的治疗提供更多的机会。海洋是一个开放的、复杂的生态系统，生活着几十万种的动、植物和上亿种微生物。现在从海洋动植物、微生物中寻找新的高活性化合物已成为天然产物研究的新领域。海洋放线菌代谢产物丰富、结构多样化、活性新颖、易于培养，其能够产生的化合物类型涉及生物碱、大环内酯类、萜烯、杂环化合物、醌类、肽类、醚类及脂肪酸等；其部分化合物的结构类型、性质与陆生放线菌中发现的有着很大的差异。发明人发现，目前从海洋放线菌代谢产物中寻找有活性的药物已成为国内外重要的研究课题，此项研究虽然起步较晚，但发展迅速，目前已有许多化合物进入临床实验。己有的研究表明，由于海洋环境的特殊性，赋予生活在海洋中的放线菌在生理性状和遗传背景上以特殊性，因此海洋放线菌必定能够产生结构新颖的代谢物质，并同陆地放线菌一样，成为抗肿瘤、抗生素等制药业的重要微生物资源。技术实现要素：因此，本发明的目的是在于提供一种化合物及其制备方法和应用，所述化合物具有式(i)所示结构：其中，r1选自c1-c3烷基和c1-c3烷氧基，r2和r3各自独立地选自h、-oh、c1-c3烷基和c1-c3烷氧基。本发明的化合物具有良好的抗肿瘤活性，能够抑制肝癌、乳腺癌以及肺癌细胞的增殖，并且具有c-met抑制活性。本发明的化合物提取分离自海洋放线菌的发酵产物，制备工艺简单那、易于操作和实施，易于工业化大规模生产，具备广阔的应用前景。具体地，本发明的技术方案如下所述：在本发明的第一方面，本发明提供了一种化合物或其异构体或其药学上可接受的盐，所述化合物具有式(i)所示结构：其中，r1选自c1-c3烷基和c1-c3烷氧基，r2和r3各自独立地选自h、-oh、c1-c3烷基和c1-c3烷氧基。在本发明的实施方式中，r2和r3不同时为相同基团。在本发明的实施方式中，本发明所述化合物具有式(ii)或式(iii)所示结构：其中，r2和r3各自独立地选自h、-oh、c1-c3烷基和c1-c3烷氧基，但r2和r3不同时为相同基团。在本发明的一些实施方式中，所述式(ii)化合物中，r2和r3各自独立地选自h、-oh、c1-c3烷基。在本发明的一些实施方式中，所述式(iii)化合物中，r2和r3各自独立地选自h、-oh、c1-c3烷氧基。在本发明的实施方式中，本发明所述化合物选自以下结构：在本发明的实施方式中，所述药学上可接受的盐的例子包括无机酸盐，例如盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐和硝酸盐；有机酸盐，例如醋酸盐、丙酸盐、草酸盐、琥珀酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、延胡索酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和抗坏血酸盐；无机碱盐，例如钠盐、钾盐、钙盐、锌盐、镁盐和铝盐；以及有机碱盐，例如精氨酸盐、苄星盐、胆碱盐、二乙胺盐、二醇胺盐、甘氨酸盐、赖氨酸盐、葡甲胺盐、乙醇胺盐和氨基丁三醇盐。以及，所述药学上可接受的盐也包括两性离子盐(内盐)，还包括季铵盐，例如烷基铵盐。在本发明的实施方式中，上述药学上可接受的盐可以是在化合物的最后分离和纯化中直接得到。也可以是通过将上述化合物，或其异构体，与一定数量的酸或碱适当(例如等当量)进行混合而得到。这些盐可能在溶液中形成沉淀而以过滤方法收集，或在溶剂蒸发后回收而得到，或在水介质中反应后冷冻干燥制得。在本发明的第二方面，本发明提供了制备上述化合物的方法，本发明的化合物分离自海洋放线菌的发酵产物，所述海洋放线菌为链霉菌属(streptomycessp.)编号11010，简称cicc11010，订购于中国工业微生物菌种保藏管理中心)，订购网址为http://www.china-cicc.org/。在本发明的一些实施方式中，所述方法包括将cicc11010菌种接种于液体培养基中，摇床培养，获得种子液；将种子液接种于固体培养基中，静置培养，得到固体发酵产物后进行分离纯化得到式(i)化合物。在本发明实施方式中，所述液体培养基由以下重量的组分组成：可溶性淀粉15-25g，kno30.5-1g，k2hpo40.3-0.8g，mgso4·7h2o0.5-1g，nacl0.3-0.8g，feso4·7h2o0.01-0.03g，琼脂10-15g，蒸馏水1l，ph7-8。在本发明的一些实施方式中，所述液体培养基由以下重量的组分组成：可溶性淀粉20.0g，kno31.0g，k2hpo40.5g，mgso4·7h2o0.5g，nacl0.5g，feso4·7h2o0.01g，琼脂15.0g，蒸馏水1.0l，ph7.2-7.4。0.06kg/cm2灭菌30min。在本发明的实施方式中，所述固体培养基为大米固体培养基，其组成为：大米500-700g，蒸馏水1l；在本发明的一些实施方式中，1l蒸馏水中大米的用量为600g，经高压灭菌得到。在本发明的实施方式中，所述摇床培养的条件为在25-30℃，120-250转/分钟的摇床中培养2-5天；在一些实施方式中，该条件进一步为在28℃、200rpm/分钟的摇床中培养3天。在本发明的实施方式中，所述静置培养的条件为在25-30℃，静置培养50-80天，在本发明的一些实施方式中，该条件进一步为在28℃下静置培养60天。在本发明的实施方式中，所述分离纯化的步骤包括：发酵产物经有机溶剂浸提、浓缩后进行柱层析，最后经反相高效液相色谱分离得到式(i)化合物；优选地，所述分离纯化过程包括：将发酵产物用等体积乙酸乙酯过夜浸提2次，取浸提液，浓缩得浓缩浸膏；将所得浓缩浸膏进行硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂进行梯度进行洗脱，薄层跟踪各洗脱部分，检识含有相同化合物的馏分，合并；所得馏分用反相高效液相色谱分离得式(i)化合物。在本发明的实施方式中，所述硅胶柱的填料为200-300目，优选为300目。在本发明的实施方式中，所述浓缩浸膏与填料的质量比为1：5-20，优选为1:10。在本发明的实施方式中，所述柱层析梯度洗脱时体积比为：80:1～5:1，2倍梯度。在本发明的实施方式中，所述反相高效液相的色谱条件如下：色谱柱：sepaxamethystc-18，5μm，21.2×250mm；检测波长：254nm；流动相：乙腈-水溶液体系，体系中含0.2-0.5wt‰的三氟乙酸，等度洗脱，乙腈/水体积比为20:80，流速5ml/min。在本发明的某些实施方式中，本发明所述化合物的制备方法包括：将cicc11010接种于500ml锥形瓶中，每瓶含250ml液体培养基，在28℃下200转/分钟摇床培养3天，得到接种有cicc11010的发酵培养基；取该发酵培养基15ml接种于固体培养基中，在28℃下静置培养60天，得到发酵产物；将发酵产物用等体积乙酸乙酯过夜浸提2次，取浸提液，浓缩得浓缩浸膏。将所得浓缩浸膏进行硅胶柱层析，填料300目，浸膏与填料质量比为1:10，以石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂按照体积比为80:1，40:1，20:1，10:1，5:1的梯度进行洗脱，薄层跟踪各洗脱部分，检识含有相同化合物的馏分，合并；将所得馏分用反相高效液相色谱分离，色谱条件如下：色谱柱：sepaxamethystc-18，5μm，21.2×250mm；检测波长：254nm。流动相：乙腈-水溶液体系，体系中含0.2wt‰三氟乙酸，等度洗脱，乙腈/水体积比为20:80，流速5ml/min；收集20-23min、25-28min、32-35min、40-43min、43-46min、52-55min的色谱峰，回收溶剂，分别得到本发明的化合物ii-1、ii-2、ii-3、iii-1、iii-2、iii-3。在本发明的第三方面，本发明提供了一种组合物或药物制剂，其包含上述第一方面中所述的化合物和至少一种药学上可接受的辅料或载体。本发明所述的组合物通常安全、无毒且为生物学上所需要的，因此，本发明中所述药学上可接受的载体或辅料是无毒且安全的，而且其与本发明所述化合物的组合也是无毒且安全的。本发明所述的药学上可接受的载体和辅料通常为本领域人员所熟知的，或者可由本领域技术人员根据实际情况能够确定的。本发明化合物的组合物或药物制剂，本领域技术人员可根据实际情况有选择的以以下任意方式施与：口服、喷雾吸入、直肠给药、鼻腔给药、阴道给药、局部给药、非肠道给药如皮下、静脉、肌内、腹膜内、鞘内、心室内、胸骨内或颅内注射或输入，或借助一种外植的储器用药，其中优选口服、肌注、腹膜内或静脉内用药方式。本发明化合物或含有这些化合物的药物组合物或药物制剂可以单位剂量形式给药。给药剂型可以是液体剂型、固体剂型。液体剂型可以是真溶液类、胶体类、微粒剂型、乳剂剂型、混旋剂型。其他剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、栓剂、冻干粉针剂、包合物、填埋剂、贴剂、擦剂等。本发明的药物组合或药物制剂中还可以含有常用的载体，这里所述可药用载体包括但不局限于：离子交换剂，氧化铝，硬脂酸铝，卵磷脂，血清蛋白如人血清蛋白，缓冲物质如磷酸盐，甘油，山梨酯，山梨酸钾，饱和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物，水，盐或电解质如硫酸鱼精蛋白，磷酸氢二钠，磷酸氢钾，氯化钠，锌盐，胶态氧化硅，三硅酸镁，聚乙烯吡咯烷酮，纤维素物质，聚乙二醇，羧甲基纤维素钠，聚丙烯酸酯，蜂蜡，羊毛酯等。载体在药物组合物中的含量可以是1重量％-98重量％，通常大约占到80重量％。为方便起见，局部麻醉剂，防腐剂，缓冲剂等可直接溶于载体中。口服片剂和胶囊可以含有赋形剂如粘合剂，如糖浆，阿拉伯胶，山梨醇，黄芪胶，或聚乙烯吡咯烷酮，填充剂，如乳糖，蔗糖，玉米淀粉，磷酸钙，山梨醇，氨基乙酸，润滑剂，如硬脂酸镁，滑石，聚乙二醇，硅土，崩解剂，如马铃薯淀粉，或可接受的增润剂，如月桂醇钠硫酸盐。片剂可以用制药学上公知的方法包衣。口服液可以制成水和油的悬浮液，溶液，乳浊液，糖浆，也可以制成干品，用前补充水或其它合适的媒质。这种液体制剂可以包含常规的添加剂，如悬浮剂，山梨醇，纤维素甲醚，葡萄糖糖浆，凝胶，羟乙基纤维素，羧甲基纤维素，硬脂酸铝凝胶，氢化的食用油脂，乳化剂，如卵磷脂，山梨聚糖单油酸盐，阿拉伯树胶；或非水载体(可能包含可食用油)，如杏仁油，油脂如甘油，乙二醇，或乙醇；防腐剂，如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯，山梨酸。如需要可添加调味剂或着色剂。栓剂可包含常规的栓剂基质，如可可黄油或其它甘油酯。对于胃肠外投药，液态剂型通常由化合物和一种消毒的载体制成。载体首选水。依照所选载体和药物浓度的不同，化合物既可溶于载体中也可制成悬浮溶液，在制成注射用溶液时先将化合物溶于水中，过滤消毒后装入封口瓶或安瓿中。必须认识到，本发明化合物的最佳给药剂量和间隔是由化合物性质和诸如给药的形式、路径和不为以及所治疗的特定哺乳动物等外部条件决定的，而这一最佳给药剂量可用常规的技术确定。同时也必须认识到，最佳的疗程，即同时化合物在额定的时间内每日的剂量，可用本领域内公知的方法确定。在本发明的第四方面，本发明还提供了上述第一方面中所述的化合物在制备抗癌或抗肿瘤药物中的应用。其中，所述癌症或肿瘤选自肝癌、乳腺癌和肺癌(比如非小细胞肺癌)。以及，本发明提供了上述第一方面中所述的化合物在制备c-met激酶抑制剂药物的应用。在本发明的实施方式中，本发明的化合物ii-1～ii-3、iii-1～iii-3对人肝癌细胞hepg2(ic50为5-10μm)、人乳腺癌细胞mcf-7(ic50为4-12μm)以及人非小细胞肺癌细胞a549(ic50为5-13μm)均表现出有效的增殖抑制活性，尤其化合物ii-3、iii-1～iii-3的抑制活性显著优于阳性对照药5-fu。在本发明的实施方式中，本发明的化合物ii-1～ii-3、iii-1～iii-3(5μm)对c-met均具有有效的抑制作用，尤其化合物iii-1～iii-3对c-met的抑制活性最高可达88％。具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。本发明所使用的试剂或原料均可通过常规途径购买获得，如无特殊说明，本发明所使用的试剂或原料均按照本领域常规方式使用或者按照产品说明书使用。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。本发明的发酵菌采用中国工业微生物菌种保藏管理中心(cicc)出售链霉菌属streptomycessp.的编号为11010的菌种，以下实施例中简称为cicc11010。实施例1菌种：链霉菌属streptomycessp.cicc11010，购自中国工业微生物菌种保藏管理中心(cicc)，以下简称cicc11010。培养基：1、液体培养基：可溶性淀粉20.0g，kno31.0g，k2hpo40.5g，mgso4·7h2o0.5g，nacl0.5g，feso4·7h2o0.01g，琼脂15.0g，蒸馏水1.0l，ph7.2-7.4。0.06kg/cm2灭菌30min。2、固体培养基：大米600g，蒸馏水1l，灭菌30min。制备方法：将cicc11010接种于500ml锥形瓶中，每瓶含250ml液体培养基，在28℃下200转/分钟摇床培养3天，得到接种有cicc11010的发酵培养基。取该发酵培养基15ml，接种于固体培养基中，在28℃下静置培养60天，得到发酵产物。将发酵产物用等体积乙酸乙酯过夜浸提2次，取浸提液，浓缩得浓缩浸膏。将所得浓缩浸膏(乙酸乙酯部位)进行硅胶柱(填料300目)层析。浸膏与填料质量比为1:10。以石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂按照体积比为80:1，40:1，20:1，10:1，5:1的梯度进行洗脱，薄层跟踪各洗脱部分，检识含有相同化合物的馏分，合并。所得馏分用反相高效液相色谱分离，色谱条件如下：色谱柱：sepaxamethystc-18，5μm，21.2×250mm。检测波长：254nm。流动相：乙腈-水溶液体系(含三氟乙酸，0.2wt‰)，等度洗脱，乙腈/水体积比为20:80，流速5ml/min。收集20～23min、25～28min、32～35min、40～43min、43-46min、52-55min的色谱峰，回收溶剂，分别得到本发明的化合物ii-1、ii-2、ii-3、iii-1、iii-2、iii-3。化合物ii-1～ii-3、iii-1～iii-3的鉴定：ii-1：8-(二甲基氨基)-1-甲基-4,9-二氧代-6-苯基-4,9-二氢-2h-苯并[f]异吲哚-2-羧酸甲酯methyl8-(dimethylamino)-1-methyl-4,9-dioxo-6-phenyl-4,9-dihydro-2h-benzo[f]isoindole-2-carboxylatechemicalformula:c23h20n2o41h-nmr(400mhz,cdcl3)7.89(s,1h),7.50-7.54(m,2h),7.35-7.48(m,4h),7.03(s,1h),3.75(s,3h)，3.30(s,6h),2.05(s,3h).m/z:389.15,[m+h]+。13c-nmr(100mhz,cdcl3)182.5,181.0,152.0,144.3,141.4,136.8,126.2,125.8,124.9,124.6,122.1,120.1,119.5,118.6,115.6,107.8,103.3,55.3,45.4,9.3。ii-2：5-(二甲基氨基)-1-羟基-3-甲基-4,9-二氧代-7-苯基-4,9-二氢-2h-苯并[f]异吲哚-2-羧酸甲酯methyl5-(dimethylamino)-1-hydroxy-3-methyl-4,9-dioxo-7-phenyl-4,9-dihydro-2h-benzo[f]isoindole-2-carboxylatechemicalformula:c23h20n2o51h-nmr(400mhz,cdcl3)7.93(s,1h),7.52-7.55(m,2h),7.30-7.42(m,4h),3.89(s,3h)，3.28(s,6h),2.11(s,3h).m/z:405.14,[m+h]+。13c-nmr(100mhz,cdcl3)182.2,181.3,153.6,145.1,144.2,138.4,136.5,129.3,126.1,127.8,127.1,120.4,116.4,111.5,112.2,110.2,104.6,54.5,45.9,9.8。ii-3：5-(二甲基氨基)-1-羟基-4,9-二氧代-7-苯基-4,9-二氢-2h-苯并[f]异吲哚-2-羧酸甲酯methyl5-(dimethylamino)-1-hydroxy-4,9-dioxo-7-phenyl-4,9-dihydro-2h-benzo[f]isoindole-2-carboxylatechemicalformula:c22h18n2o51h-nmr(400mhz,cdcl3)7.78(s,1h),7.50-7.58(m,2h),7.36-7.44(m,4h),6.98(s,1h),4.05(s,3h),3.38(s,6h)。m/z:391.13,[m+h]+。13c-nmr(100mhz,cdcl3)182.1,181.2,151.6,143.7,141.4,140.8,129.8,129.2,127.9,127.6,124.3,120.1,118.8,116.6,109.9,104.3,54.2,45.4。iii-1：8-(二甲基氨基)-1-甲氧基-6-苯基-2-丙基-2h-苯并[f]异吲哚-4,9-二酮8-(dimethylamino)-1-methoxy-6-phenyl-2-propionyl-2h-benzo[f]isoindole-4,9-dionechemicalformula:c24h22n2o41h-nmr(400mhz,cdcl3)7.75(s,1h),7.45-7.56(m,2h),7.30-7.45(m,4h),6.94(s,1h),4.21(s,3h),3.31(s,6h),2.54(q,j＝6.8hz,2h),1.13(t,j＝6.8hz,3h)。m/z:403.17,[m+h]+。13c-nmr(100mhz,cdcl3)181.0,179.5,152.1,143.7,141.4,140.8,129.6,129.2,127.9,126.0,125.5,123.1,117.6,116.5,109.8,109.9,104.3,54.8,45.6,29.1,8.9。iii-2：5-(二甲基氨基)-1-羟基-3-甲氧基-7-苯基-2-丙基-2h-苯并[f]异吲哚-4,9-二酮5-(dimethylamino)-1-hydroxy-3-methoxy-7-phenyl-2-propionyl-2h-benzo[f]isoindole-4,9-dionechemicalformula:c24h22n2o51h-nmr(400mhz,cdcl3)7.65(s,1h),7.43-7.50(m,2h),7.35-7.44(m,4h),3.98(s,3h),3.34(s,6h),2.58(q,j＝6.8hz,2h),1.03(t,j＝6.8hz,3h)。m/z:419.16,[m+h]+。13c-nmr(100mhz,cdcl3)182.1,179.6,159.3,143.7,141.4,140.8,129.8,129.2,127.9,127.6,122.3,120.1,116.6,112.4,111.3,109.9,104.3,54.8,45.4,29.4,8.2。iii-3：5-(二甲基氨基)-1-羟基-7-苯基-2-丙基-2h-苯并[f]异吲哚-4,9-二酮5-(dimethylamino)-1-hydroxy-7-phenyl-2-propionyl-2h-benzo[f]isoindole-4,9-dionechemicalformula:c23h20n2o41h-nmr(400mhz,cdcl3)7.78(s,1h),7.38-7.46(m,2h),7.28-7.36(m,4h),6.99(s,1h),3.26(s,6h),2.62(q,j＝6.8hz,2h),1.05(t,j＝6.8hz,3h)。m/z:389.15,[m+h]+。13c-nmr(100mhz,cdcl3)182.1,180.3,151.9,143.7,141.4,140.8,129.8,127.9,129.2,127.6,120.1,118.8,116.6,115.3,113.4,109.9,104.3,45.4,29.1。实验例1体外抑制肿瘤细胞增殖实验实验材料：人肝癌细胞hepg2、人乳腺癌细胞mcf-7以及人非小细胞肺癌细胞a549，96孔板，细胞计数板，countstar自动细胞计数仪，dmem/highglucose培养基，胎牛血清，青霉素-链霉素混合溶液，胰酶，pbs缓冲液，cck-8，二甲基亚砜(dmso)，多功能酶标仪(biotek)，阳性对照药：5-fu，实验药：实施例1制备的化合物ii-1、ii-2、ii-3、iii-1、iii-2、iii-3。实验方法：取对数生长期的肿瘤细胞，用胰酶消化制成单细胞悬液，再在countstar自动细胞计数仪上计数，按每孔4000个细胞稀释，均匀接种于96孔板上，每孔100μl。另设空白对照：仅有相同体积培养基；阴性对照：只加细胞悬液、不加药。向实验孔中加入不同浓度的待测化合物(ii-1～ii-3、iii-1～iii-3)，每个浓度设定4个复孔，阴性对照孔和空白对照孔分别加入100μl培养基。在37℃，5％co2的培养箱中孵育72h后，每孔弃去100μl后，加入10μl的cck-8，再在37℃培养箱中孵育1.5h后，用多功能酶标仪(biotek)测定在450nm时的od值，然后再进行数据处理。用graphpadprism5软件计算ic50值，抑制率公式如下：实验结果：见表1。表1化合物对肿瘤细胞的增殖抑制活性a表示三次实验的平均值±标准差(sd)实验结果表明，本发明实施例1制备的化合物ii-1～ii-3、iii-1～iii-3对人肝癌细胞hepg2、人乳腺癌细胞mcf-7以及人非小细胞肺癌细胞a549均表现出较好的增殖抑制活性，尤其化合物ii-3、iii-1～iii-3的抑制活性显著优于阳性对照药5-fu。实验例2体外对c-met激酶抑制实验实验材料：met激酶，底物肽fam-p2，atp，dmso，edta，384孔培养板，激酶反应缓冲液:50mmhepes(ph7.5)，0.0015％brij-35；激酶反应终止液：100mmhepes(ph7.5)，0.015％brij-35，50mmedta；阳性对照药staurosporine；待测化合物(即化合物ii-1～ii-3、iii-1～iii-3)。实验方法：待测化合物分别首先溶解在100％dmso中，每个化合物起始浓度为50μm，再稀释到1μm。分为阴性对照组(不加化合物的空白组)、阳性对照组(以克唑替尼crizotinib为阳性对照，简称cr)和待测化合物组。激酶反应：(1)配置2.5倍激酶溶液:在1倍激酶缓冲液中加入激酶，形成2.5倍激酶溶液。(2)配置2.5倍底物溶液:将fam标记的底物肽和atp加入1倍激酶缓冲液，形成2.5倍底物溶液。(3)向含有5μl的化合物溶液的384孔反应板中加入10μl的2.5倍激酶溶液,并在室温下孵育10分钟。(4)向384孔反应板中加入10μl的2.5倍底物溶液，在28℃下反应特定的时间后加入25μl终止液终止反应。从caliper上复制转化率数据然后换算成抑制率：抑制率(％)＝(max-conversion)/(max-min)×100％其中：“conversion”代表化合物组的转化率；“max”代表未加化合物的dmso对照；“min”代表低对照。实验结果：见表2。表2体外对c-met激酶的抑制活性(5μm)抑制率(％)±sd(标准差)化合物ii-166.71.4化合物ii-259.98.3化合物ii-374.60.5化合物iii-180.91.6化合物iii-288.10.4化合物iii-377.32.2cr78.94.3实施例1制备的化合物ii-1～ii-3、iii-1～iii-3对c-met均具有一定的抑制作用，尤其化合物iii-1～iii-3对c-met的抑制活性与阳性对照药克唑替尼相当甚至更好。以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。当前第1页12