0，在45°C的条件下搅拌4.0h后，然后升温至85°C，恒温lOmin，制得乳清蛋白酶解液；
C、分离:去除b步骤制得的乳清蛋白酶解液中的固体物质，收集酶解液中分子量在3000Da?5000Da之间的滤液，制得粗乳清蛋白肽；
d、纯化:将粗乳清蛋白肽用水调制成混合液、其质量百分比浓度为5%，用模拟移动床连续吸附进行分离纯化，然后将吸附液进行喷雾干燥，即制得具有抗菌活性的乳清蛋白肽，所述的模拟移动床连续吸附分离，其吸附剂为XAD1600N吸附树脂、吸附原料为粗乳清蛋白肽用水调制成混合液、其控制流量为5BV/h ;解析剂为乙醇溶液、其质量百分浓度为70%、其控制流量为15BV/h ;冲洗剂为去离子水、其控制流量为10BV/h ;吸附树脂的再生剂是NaOH溶液、其质量百分浓度为2%、其控制流量为5BV/h ;全程切换时间为300s、温度控制在25°C、压力控制为0.5MPa ；
以上均为质量份数。
[0014]实施例4
具有抗菌活性的乳清蛋白肽的制作方法，其操作步骤如下:
a、预处理:将I份食品级乳清蛋白粉与10份水混合，在90°C下恒温5min后，降温至60°C，用NaOH溶液调节溶液pH至7.5，制成乳清蛋白溶液；
b、酶解:在a步骤制得的乳清蛋白溶液中加入胰性蛋白酶0.003份，同时用NaOH溶液维持系统的PH为7.5，在60°C的条件下搅拌6.0h后，然后升温至100°C，恒温15min，制得乳清蛋白酶解液；
C、分离:去除b步骤制得的乳清蛋白酶解液中的固体物质，收集酶解液中分子量在3000Da?5000Da之间的滤液，制得粗乳清蛋白肽；
d、纯化:将粗乳清蛋白肽用水调制成混合液、其质量百分比浓度为25%，用模拟移动床连续吸附进行分离纯化，然后将吸附液进行喷雾干燥，即制得具有抗菌活性的乳清蛋白肽，所述的模拟移动床连续吸附分离，其吸附剂为XAD16N吸附树脂、吸附原料为粗乳清蛋白肽用水调制成混合液、其控制流量为15BV/h ;解析剂为乙醇溶液、其质量百分浓度为90%、其控制流量为25BV/h ;冲洗剂为去离子水、其控制流量为20BV/h ;吸附树脂的再生剂是NaOH溶液、其质量百分浓度为4%、其控制流量为10BV/h ;全程切换时间为600s、温度控制在50°C、压力控制为1.0MPa ；
以上均为质量份数。
[0015]实施例5
具有抗菌活性的乳清蛋白肽的制作方法，其操作步骤如下:
a、预处理:将I份食品级乳清蛋白粉与8份水混合，在85°C下恒温5min后，降温至55°C，用NaOH溶液调节溶液pH至8.0，制成乳清蛋白溶液；
b、酶解:在a步骤制得的乳清蛋白溶液中加入胰性蛋白酶0.003份，同时用NaOH溶液维持系统的pH为8.0，在55°C的条件下搅拌5.0h后，然后升温至95°C，恒温15min，制得乳清蛋白酶解液；
C、分离:去除b步骤制得的乳清蛋白酶解液中的固体物质，收集酶解液中分子量在3000Da?5000Da之间的滤液，制得粗乳清蛋白肽；
d、纯化:将粗乳清蛋白肽用水调制成混合液、其质量百分比浓度为20%，用模拟移动床连续吸附进行分离纯化，然后将吸附液进行喷雾干燥，即制得具有抗菌活性的乳清蛋白肽；
以上均为质量份数。
[0016]所述的模拟移动床连续吸附分离，其吸附剂为XAD1600N吸附树脂、吸附原料为粗乳清蛋白肽用水调制成混合液、其控制流量为10BV/h ;解析剂为乙醇溶液、其质量百分浓度为90%、其控制流量为20BV/h ;冲洗剂为去离子水、其控制流量为20BV/h ;吸附树脂的再生剂是NaOH溶液、其质量百分浓度为4%、其控制流量为10BV/h ;全程切换时间为600s、温度控制在50°C、压力控制为0.8MPa。
[0017]以上实施例中所用的食品级乳清蛋白为澳大利亚迈高公司生产，其蛋白含量为82%;胰蛋白酶是由牛、羊、猪胰脏提取而得的一种肽链内切酶，能选择地水解蛋白质中由赖氨酸或精氨酸的羧基所构成的肽链，只断裂赖氨酸或精氨酸的羧基参与形成的肽键，本申请中所用的胰蛋白酶是由上海雅心生物科技有限公司生产，其酶活力为200万U/g;使用的XAD16N吸附树脂、XAD18吸附树脂或XAD1600N吸附树脂，为北京赛福莱博科技有限公司生产。
【主权项】
1.具有抗菌活性的乳清蛋白肽的制作方法，其操作步骤如下: a、预处理:将I份乳清蛋白粉与3?20份水混合，在80?90°C下恒温5min后，降温至45°C?60°C，用NaOH溶液调节溶液pH至7.0?8.5，制成乳清蛋白溶液； b、酶解:在a步骤制得的乳清蛋白溶液中加入胰性蛋白酶0.001?0.005份，同时用NaOH溶液维持系统的pH为7.0?8.5，在45°C?60°C的条件下搅拌2.0?8.0h后，然后升温至85°C?100°C,恒温1min?15min,制得乳清蛋白酶解液； C、分离:去除b步骤制得的乳清蛋白酶解液中的固体物质，收集酶解液中分子量在3000Da?5000Da之间的滤液，制得粗乳清蛋白肽； d、纯化:将粗乳清蛋白肽用水调制成混合液、其质量百分比浓度为5%?25%，用模拟移动床连续吸附进行分离纯化，然后将吸附液进行喷雾干燥，即制得具有抗菌活性的乳清蛋白妝； 以上均为质量份数。
2.如权利要求1所述的具有抗菌活性的乳清蛋白肽的制作方法，作为进一步优化，其操作步骤如下: a、预处理:将I份乳清蛋白粉与3?10份水混合，在80?90°C下恒温5min后，降温至45°C?60°C，用NaOH溶液调节溶液pH至7.0?8.5，制成乳清蛋白溶液； b、酶解:在a步骤制得的乳清蛋白溶液中加入胰性蛋白酶0.002?0.003份，同时用NaOH溶液维持系统的pH为7.0?8.5，在45°C?60°C的条件下搅拌4.0?6.0h后，然后升温至85°C?100°C,恒温1min?15min,制得乳清蛋白酶解液； C、分离:去除b步骤制得的乳清蛋白酶解液中的固体物质，收集酶解液中分子量在3000Da?5000Da之间的滤液，制得粗乳清蛋白肽； d、纯化:将粗乳清蛋白肽用水调制成混合液、其质量百分比浓度为5%?25%，用模拟移动床连续吸附进行分离纯化，然后将吸附液进行喷雾干燥，即制得具有抗菌活性的乳清蛋白妝； 以上均为质量份数。
3.如权利要求1所述的具有抗菌活性的乳清蛋白肽的制作方法，其特征在于所述的模拟移动床连续吸附分离，其吸附剂为大孔吸附树脂、吸附原料为粗乳清蛋白肽用水调制成混合液、其控制流量为5?15BV/h ;解析剂为乙醇溶液、其质量百分浓度为70?90%、其控制流量为15?25BV/h ;冲洗剂为去离子水、其控制流量为10?20BV/h ;吸附树脂的再生剂是NaOH溶液、其质量百分浓度为2%?4%、其控制流量为5?10BV/h ;全程切换时间为300?600s、温度控制在25?50°C、压力控制为0.5?1.0MPa0
4.如权利要求1所述的具有抗菌活性的乳清蛋白肽的制作方法，其特征在于所述乳清蛋白为食品级。
5.如权利要求1所述的具有抗菌活性的乳清蛋白肽的制作方法，其特征在于所述的大孔吸附树脂为XAD16N吸附树脂、XAD18吸附树脂或XAD1600N吸附树脂。
【专利摘要】本发明的具有抗菌活性的乳清蛋白肽的制作方法，涉及生物技术领域，其生产步骤包括预处理、酶解、分离和纯化四个步骤，并在纯化步骤中利用模拟移动色谱分离法，对分离后的粗乳清蛋白肽进行工业化生产，得到具有抗菌活性的乳清蛋白肽。其利用胰蛋白酶水解乳清蛋白制作具有抗菌活性的肽，实现了乳清蛋白的深加工，其工艺简单，水解产物抗菌活性高，适合工业化推广生产；此方法自动化程度高、生产成本低、提取效率高，通过本发明制得的抗菌肽不仅具有较为显著的抑菌效果而且安全营养，为天然保鲜剂的开发提供可靠的基料或配料，可以提高我国防腐剂产品的重量和安全性，适应天然食品添加剂市场发展的要求。
【IPC分类】C07K1-16, C12P21-06
【公开号】CN104673866
【申请号】CN201510103796
【发明人】刘妍妍, 王宪青, 张丽萍, 刁静静
【申请人】黑龙江八一农垦大学
【公开日】2015年6月3日
【申请日】2015年3月10日