一种辛弗林对映体的分离方法
【技术领域】
[0001]本发明属于对映体分离技术领域，具体涉及采用高效液相色谱手性流动相添加剂技术分离辛弗林对映体的方法。
【背景技术】
[0002]辛弗林(Sym5Phrine)化学名1-(4_羟基苯基)_2_ (甲基氨基)乙醇，是肾上腺素α-受体兴奋剂，有收缩血管、升高血压、扩张气管和支气管的作用，临床用于支气管哮喘及手术和麻醉时低血压、虚脱及休克、体位性低血压等病的治疗；辛弗林还具有以下作用:提高新陈代谢、增加热量消耗、提高能量水平、氧化脂肪、减肥，所以，辛弗林也作为减肥药物中的有效成分，因此，辛弗林广泛用于医药、保健食品中。其结构式有一个手性中心，目前，该药仍然以消旋体形式应用，而其中L-辛弗林是该药的有效对映体，D-辛弗林是无效对映体，对人体会产生代谢负担，也可能产生毒副作用。
[0003]传统的制药方法是从植物中提取药物，天然的辛弗林可以从植物中提取，比如:芸香料植物酸橙(citrus aurantium)的干燥幼果，吴茱萸(Evodia rutaecarpa)，仙人掌科植物仙人球(coryphantha rami I 1sa Cutak)全草等，目前，化学合成方法是制药领域的主要发展方向，化学合成法是获得药物是主要来源，药物产量高、纯度高，传统的制药方式正逐渐被合成药物所取代。辛弗林可化学合成，化学合成法得到的是其外消旋体。
[0004]辛弗林有效对映体L-辛弗林在植物中的含量很低，最高含量为0.2%?0.4%，因此，如果直接从植物中提出单一对映体难度大、消耗大、工艺复杂；而合成的辛弗林为外消旋体，如何便捷、快速、经济、高效地对其进行分离是本领域的关健。
[0005]现有的分离方法，如2009年4月8日的公开号为CN101402577的“从个青皮中提取分离左旋-辛弗林的方法”专利，生产的安全性差，不利于规模生产。如2010年8月4日的公开号为101792394A的“一种萃取分离L-辛弗林的方法”专利，该方法所用仪器设备较多，操作繁锁，消耗时间长。
【发明内容】
[0006]本发明的目的之一在于提供一种辛弗林对映体的拆分方法，本发明使用常规色谱柱、常用添加剂，短时间内在高效液相色谱仪上即能实现辛弗林的分离。添加剂羧甲基-β -环糊精是一种低聚糖，由七个葡萄糖单元相连构成“锥筒”形，其环状分子中含有特殊空腔，内腔具有疏水性，外腔因羟基而具有亲水性，其大分子上含有许多手性中心，能选择性的与对映体作用，对映体分子的体积正好与空腔大小适合，紧密装入空腔，与其形成稳定性不同的、可逆的包合物，通过高效液相色谱仪的固定相时，因保留时间不同达到分离目的；辛弗林对映体有一个手性中心和一个苯环结构能顺利进入羧甲基-环糊精空腔内形成包合物，本发明利用它们的这种特性，将辛弗林样品溶解，将羧甲基-β_环糊精添加到流动相中，辛弗林进入羧甲基-β -环糊精的疏水空腔内发生包合作用，其极性部分与羧甲基-环糊精边缘的羟基发生极性作用；其氨基也可以与羧甲基产生静电作用，几种作用共同的影响，形成色谱行为差异较大的、稳定性不同的非对映体包合物，通过高效液相色谱仪实现辛弗林对映体分离。
[0007]一种辛弗林对映体的分离方法，包含以下步骤:
[0008]样品溶液的配制:取原料药盐酸辛弗林，加超纯水溶解配制溶液，以针筒式滤膜过滤，再超声脱气；
[0009]流动相的配制:取羧甲基环糊精溶于超纯水中，加入三乙胺和冰乙酸调节pH值为4.0?4.4，然后分别加入甲醇和乙腈，溶液经微孔滤膜过滤，超声脱气；
[0010]色谱分离:紫外检测波长为202nm，流动相流速为0.1?0.4ml/min，用平头进样器进样。
[0011]所述超纯水为电导率值:0?30ys/cm，电阻值〈18.3ΜΩ/cm，孔径:0.001?0.0001 μ mD
[0012]所述针筒式滤膜为0.45 μm针筒式滤膜，所述超声脱气的时间为30分钟。
[0013]本发明的有益效果在于:本发明使用常规色谱柱、常用添加剂，短时间内在高效液相色谱仪上，即能实现辛弗林的分离，具有高效、快速、经济、操作简便等特点。为手性药物对映体的进一步研宄提供了一种具有指导意义的方法，可广泛应用于制药行业对药物对映体进行分离分析的研宄中。
【附图说明】
[0014]图1所示为pH = 4.4、流速为0.3ml/min时盐酸辛弗林拆分效果图。
[0015]图2所示为pH = 4.2、流速为0.2ml/min时盐酸辛弗林拆分效果图。
[0016]图3所示为pH = 4.0、流速为0.lml/min时盐酸辛弗林拆分效果图。
【具体实施方式】
[0017]下文将结合具体实施例详细描述本发明。应当注意的是，下述实施例中描述的技术特征或者技术特征的组合不应当被认为是孤立的，它们可以被相互组合从而达到更好的技术效果。
[0018]实施例1
[0019]1、样品溶液的配制:
[0020]准确称取0.0050g原料药盐酸辛弗林，加超纯水溶解后转入1ml容量瓶中并定容至刻度，使用前以0.45 μ m针筒式滤膜过滤，超声脱气30min。
[0021]2、紫外波长的确定:
[0022]称取0.0OlOg的盐酸辛弗林分别用超纯水、甲醇-水(80:20)、乙腈-水(70:30)作为溶剂溶解至1ml比色管中。以相应溶剂作为参比溶液，通过紫外分光光度计进行波长扫描，再通过高效液相色谱的紫外检测器检验，最终确定最佳分析波长为202nm。
[0023]3、流动相的配制
[0024]准确称取0.06g幾甲基_β _环糊精溶于15ml超纯水中，加入二乙胺和冰乙酸调节PH值，用酸度计测量其pH值为4.4，然后分别加入15ml甲醇和70ml乙腈，溶液经0.45 μ m微孔滤膜过滤，超声脱气20min备用。
[0025]4、色谱分离实验
[0026]选用Hypersil ODS柱(4.6mmX 200mm, 5 μ m)作为本发明所用色谱柱，确定高效液相色谱仪紫外检测波长为202nm，流动相为步骤3中所制得体积比为15:70:15的甲醇-乙腈-水(含0.6g/L羧甲基-β -环糊精)10ml溶液，调节流动相流速为0.3ml/min，用平头进样器抽取步骤2中配制的5%辛弗林2μ I进样，在此操作条件下，辛弗林对映体基线分离，见图1，图1所示为pH = 4.4、流速为0.3ml/min时盐酸辛弗林拆分效果图。
[0027]实施例2
[0028]1、样品溶液的配制:
[0029]准确称取0.0050g原料药盐酸辛弗林，加超纯水溶解后转入1ml容量瓶中并定容至刻度，使用前以0.45 μ m针筒式滤膜过滤，超声脱气30min。
[0030]2、紫外波长的确定:
[0031]称取0.0OlOg的盐酸辛弗林分别用超纯水、甲醇-水(80:20)、乙腈-水(70:30)作为溶剂溶解至1ml比色管中。以相应溶剂作为参比溶液，通过紫外分光光度计进行波长扫描，再通过高效液相色谱的紫外检测器检验，最终确定最佳分析波长为202nm。
[0032]3、流动相的配制
[0033]准确称取0.06g羧甲基-β -环糊精溶于15ml超纯水中，加入三乙胺和冰乙酸调节PH值，用酸度计测量其pH = 4.2，然后分别加入15ml甲醇和70ml乙腈，溶液经0.45 μ m微孔滤膜过滤，超声脱气20min备用。
[0034]4、色谱分离实验
[0035]选用Hypersil ODS柱(4.6mmX 200mm, 5 μ m)作为本发明所用色谱柱，确定高效液相色谱仪紫外检测波长为202nm，流动相为步骤3中所制得体积比为15:70:15的甲醇-乙腈-水(含0.6g/L羧甲基-β -环糊精)10ml溶液，调节流动相流速为0.2ml/min，用平头进样器抽取步骤2中配制的5%辛弗林2μ I进样，在此操作条件下，辛弗林对映体基线分离，见图2，图2所示为pH = 4.2、流速为0.2ml/min时盐酸辛弗林拆分效果图。
[0036]实施例3
[0037]1、样品溶液的配制:
[0038]准确称取0.0050g原料药盐酸辛弗林，加超纯水溶解后转入1ml容量瓶中并定容至刻度，使用前以0.45 μ m针筒式滤膜过滤，超声脱气30min。
[0039]2、紫外波长的确定:
[0040]称取0.0OlOg的盐酸辛弗林分别用超纯水、甲醇-水(80:20)、乙腈-水(70:30)作为溶剂溶解至1ml比色管中。以相应溶剂作为参比溶液，通过紫外分光光度计进行波长扫描，再通过高效液相色谱的紫外检测器检验，最终确定最佳分析波长为202nm。
[0041]3、流动相的配制
[0042]准确称取0.06g幾甲基_ β _环糊精溶于15ml超纯水中，加入二乙胺和冰乙酸调节pH值，用酸度计测量pH = 4.0，然后分别加入15ml甲醇和70ml乙腈，溶液经0.45 ym微孔滤膜过滤，超声脱气20min备用。
[0043]4、色谱分离实验
[0044]选用Hypersil ODS柱(4.6mmX 200mm，5 μ m)作为本发明所用色谱柱，确定高效液相色谱仪紫外检测波长为202nm，流动相为步骤3中所制得体积比为15:70:15的甲醇-乙腈-水(含0.6g/L羧甲基-β -环糊精)10ml溶液，调节流动相流速为0.lml/min，用平头进样器抽取步骤2中配制的5%辛弗林2μ I进样，在此操作条件下，辛弗林对映体基线分离，见图3，图3所示为pH = 4.0、流速为0.lml/min时盐酸辛弗林拆分效果图。
[0045]本文虽然已经给出了本发明的一些实施例，但是本领域的技术人员应当理解，在不脱离本发明精神的情况下，可以对本文的实施例进行改变。上述实施例只是示例性的，不应以本文的实施例作为本发明权利范围的限定。
【主权项】
1.一种辛弗林对映体的分离方法，其特征在于，包含以下步骤: 样品溶液的配制:取原料药盐酸辛弗林，加超纯水溶解配制溶液，以针筒式滤膜过滤，再超声脱气； 流动相的配制:取羧甲基-β-环糊精溶于超纯水中，加入三乙胺和冰乙酸调节pH值为.4.0?4.4，然后分别加入甲醇和乙腈，溶液经微孔滤膜过滤，超声脱气； 色谱分离:紫外检测波长为202nm，流动相流速为0.1?0.4ml/min，用平头进样器进样。
2.根据权利要求1所述的辛弗林对映体的分离方法，其特征在于，所述超纯水为电导率值在O?30 μ s/cm之间，电阻值小于18.3ΜΩ /cm，孔径在0.001?0.0001 μ m之间。
3.根据权利要求1所述的辛弗林对映体的分离方法，其特征在于，所述针筒式滤膜为.0.45 μ m针筒式滤膜，所述超声脱气的时间为30分钟。
【专利摘要】本发明公开了一种高效液相色谱分离辛弗林药物对映体的方法。本发明以化工原料药盐酸辛弗林为实验材料，利用其与环糊精类添加剂形成稳定性不同的非对映体包合物，经高效液相色谱仪固定相后保留时间不同而实现了辛弗林对映体的分离。本发明使用普通的色谱柱，而且色谱柱可以反复使用；所用添加剂羧甲基-β-环糊精易溶于水、无毒、用量少、不堵塞色谱柱；盐酸辛弗林样品用量少，经过色谱柱后不被破坏，损耗小；所用流动相为亦可回收利用；因此，本发明具有经济、高效、快速、操作简便等特点，为手性药物对映体的进一步研究提供了一种具有指导意义的方法，可广泛应用于制药行业对药物对映体的进行分离分析的研究中。
【IPC分类】C07C215-60, C07C213-10
【公开号】CN104710318
【申请号】CN201510061061
【发明人】翟明翚, 齐海燕, 王颖, 苏立强, 张晓红, 祖广权
【申请人】齐齐哈尔大学
【公开日】2015年6月17日
【申请日】2015年2月6日