质量鉴定的PCR图一； 图2是本发明实施例所述的单细胞基因组扩增产物质量鉴定的基因组测序图一； 图3是本发明实施例所述的单细胞基因组扩增产物质量鉴定的PCR图二； 图4是本发明实施例所述的单细胞基因组扩增产物质量鉴定的基因组测序图二； 图5是本发明实施例所述的单细胞基因组扩增产物质量鉴定的PCR图三； 图6是本发明实施例所述的单细胞基因组扩增产物质量鉴定的基因组测序图三；
【具体实施方式】
[0018] 下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完 整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于 本发明中的实施例，本领域普通技术人员所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的 范围。
[0019] 实施例一 一、材料： 1、标本：合作医院活检的囊胚期细胞5个。
[0020] 2、试剂：Qiagen的全基因组扩增试剂盒、MDA产物检测试剂盒、MDA产物纯化试剂 盒、life文库构建试剂盒、Agencourt?AMPure?XP磁珠、life模板制备试剂盒，life测序试 剂盒。
[0021] 3、仪器：PCR仪，琼脂糖凝胶电泳系统，ion torrent的PGM测序平台。
[0022] 4、耗材：1. 5ml、0. 2ml进口离心管，瑞宁移液枪及带滤芯枪头。
[0023] 二、操作步骤： 1、取细胞 取发育至囊胚期细胞5个，在显微镜下取出上述新鲜细胞后放入装有1 y 1 PBS缓冲液 的PCR管底，离心管编号1。
[0024]2、MDA法全基因组扩增 准备Buffer DLB :对Buffer DLB管进行离心处理从而使干粉聚集到管底，加入500W 无核酸酶的水，涡旋彻底混匀使其溶解，然后短暂离心，溶解后的Buffer DLB可在-20°C保 存6个月； 准备Buffer D2 :如表1所示，可配制12个反应，-20°C可保存3个月；
【主权项】
1. 一种单细胞基因组扩增产物质量鉴定的方法，其特征在于，包括以下步骤： 对单细胞进行分离并裂解，得到该单细胞的全基因组DNA; 对全基因组DNA进行单细胞全基因组扩增，得到全基因组扩增产物； 采用5对基因组上保守区段的特异性引物，将其放在一个扩增体系中，以全基因组扩 增产物为模板进行PCR扩增，对5个扩增产物进行电泳检测，根据检测结果判断全基因组扩 增产物的质量，结果显示为在电泳图上均匀分布条带的3-5个扩增产物为符合测序要求的 扩增产物样品； 对符合测序要求的扩增产物构建DNA测序文库； 对所述DNA测序文库进行高通量测序。
2. 根据权利要求1所述的单细胞基因组扩增产物质量鉴定的方法，其特征在于，单细 胞全基因组的扩增技术为多重置换扩增MDA全基因组扩增技术。
3. 根据权利要求2所述的单细胞基因组扩增产物质量鉴定的方法，其特征在于，所述 单细胞为人单细胞，基因组上保守区段选自DCTN6、RPL37A、URI1、SNTA1、人13号染色体上 位置 82722059、SEMA3A、人 16 号染色体上位置 86386387、RAD9A、DIRC3、EIF2B1 中的 5 种或 5种以上。
4. 根据权利要求3所述的单细胞基因组扩增产物质量鉴定的方法，其特征在于，所述 基因组上保守区段的特异性引物序列为： URIl引物I:TTCTGTTGAAGGAAAGAAGGTAGG， URIl引物 2:GTCTGATATTTTGGTGCACCCATTAC;chrl3_82722059 引物I:ACAGAAGTCTGGGATGTGGAGGA， chrl3_82722059 引物 2:GGGCAGCCCAAAAAGACAGACAGA; SEMA3A引物I:CCATGTTGGTCAG， SEMA3A引物 2:GATTCCACATTTA; chrl6_86386387 引物I:TTTGTGTGTGCATCTGTAAGCATG， chrl6_86386387 引物 2:GGGGGTCTAAGAGCTTGTAAAAAG; DIRC3 引物I:TGTGGAGTGGAGGTGCCTAAAG， DIRC3 引物 2:GTCCTACCAGAATGCCAGTCC; DCTN6 引物I:CTGGGATCTCTCCCTTGGGCGTAAA， DCTN6 引物 2:TTCAGGACAGTGATGCCCCAGGAA; RPL37A引物I:GCCTGAGGCTTGGTGGTGTGTATCC， RPL37A引物 2:AGTGCTGGTGAAGGGTCACAGCCA; SNTAl引物I:TGGCCCAGAGTGGGAGGTCATTGT， SNTAl引物 2:TGTTGCCCTATCCCATGCTGGAGA; RAD9A引物I:TGATTTGGGGTGGGGTGAATGTGA， RAD9A引物 2:AGTGGCTCAGCATGTCAAGGCCAG; EIF2B1 引物I:GGGAAGCCCAAGGGCCTGATTCTA， EIF2B1 引物 2 :TCATCCCGCAGCTCCAGTCTTCATC。
5. -种单细胞基因组扩增产物质量鉴定的试剂盒，其特征在于，包括所述基因组上保 守区段的特异性引物，以对全基因组扩增产物进行基因组上保守区段检测。
6. 根据权利要求5所述的单细胞基因组扩增产物质量鉴定的试剂盒，其特征在于，所 述单细胞为人单细胞，基因组上保守区段选自DCTN6、RPL37A、URI1、SNTA1、人13号染色体 上位置 82722059、SEMA3A、人 16 号染色体上位置 86386387、RAD9A、DIRC3、EIF2B1 中的 5 种 或多于5种。
7. 根据权利要求6所述的单细胞基因组扩增产物质量鉴定的试剂盒，其特征在于，所 述基因组上保守区段的特异性引物序列为： URIl引物I:TTCTGTTGAAGGAAAGAAGGTAGG， URIl引物 2:GTCTGATATTTTGGTGCACCCATTAC;chrl3_82722059 引物I:ACAGAAGTCTGGGATGTGGAGGA， chrl3_82722059 引物 2:GGGCAGCCCAAAAAGACAGACAGA; SEMA3A引物I:CCATGTTGGTCAG， SEMA3A引物 2:GATTCCACATTTA; chrl6_86386387 引物I:TTTGTGTGTGCATCTGTAAGCATG， chrl6_86386387 引物 2:GGGGGTCTAAGAGCTTGTAAAAAG; DIRC3 引物I:TGTGGAGTGGAGGTGCCTAAAG DIRC3 引物 2:GTCCTACCAGAATGCCAGTCC; DCTN6 引物I:CTGGGATCTCTCCCTTGGGCGTAAA， DCTN6 引物 2:TTCAGGACAGTGATGCCCCAGGAA; RPL37A引物I:GCCTGAGGCTTGGTGGTGTGTATCC， RPL37A引物 2:AGTGCTGGTGAAGGGTCACAGCCA; SNTAl引物I:TGGCCCAGAGTGGGAGGTCATTGT， SNTAl引物 2:TGTTGCCCTATCCCATGCTGGAGA; RAD9A引物I:TGATTTGGGGTGGGGTGAATGTGA， RAD9A引物 2:AGTGGCTCAGCATGTCAAGGCCAG; EIF2B1 引物I:GGGAAGCCCAAGGGCCTGATTCTA， EIF2B1 引物 2 :TCATCCCGCAGCTCCAGTCTTCATC。
8. 根据权利要求5-7中任一项所述的单细胞基因组扩增产物质量鉴定的试剂盒，其特 征在于，所述试剂盒还含有用于对单细胞进行全基因组扩增的试剂成分，所述单细胞全基 因组扩增采用多重置换扩增MDA或DOP-PCR。
【专利摘要】本发明涉及一种单细胞基因组扩增产物质量鉴定的方法和试剂盒，方法包括以下步骤：对单细胞进行分离并裂解，得到该单细胞的全基因组DNA；对全基因组DNA进行单细胞全基因组扩增，得到全基因组扩增产物；采用5对基因组上保守区段的特异性引物，将其放在一个扩增体系中，以全基因组扩增产物为模板进行PCR扩增，对5个扩增产物进行电泳检测，根据检测结果判断全基因组扩增产物的质量，结果显示为在电泳图上均匀分布条带的3-5个扩增产物为符合测序要求的扩增产物样品；对符合测序要求的扩增产物构建DNA测序文库；对所述DNA测序文库进行高通量测序。
【IPC分类】C12Q1-68
【公开号】CN104762405
【申请号】CN201510195108
【发明人】冯涛, 王丹红
【申请人】北京嘉宝仁和医疗科技有限公司, 湖南光琇高新生命科技有限公司
【公开日】2015年7月8日
【申请日】2015年4月22日