定 供试品反应液中该杂质的峰，并按照面积归一法计算式I的含量。
[0163] 其中HPLC参数为：
[0164] 色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Agilent XDB-C18, 250*4. 6mm，5um)
[0165] 流动相：0· OlM磷酸二氢钾（pH 3· 0)和乙腈
[0166] 柱温：25°C
[0167] 流速：1. OmT ,/mi η
[0168] 运行时间：20min
[0169] 检测波长：2IOnm
[0170]
[0171] 测得式I含量为0.95%，在内控规定限度范围内，终止反应。
[0172] 实施例28 :作为标准品用于甲基化反应产物的质量控制
[0173] 将式I标准品和由化合物II制备化合物III的甲基化反应产物均用乙腈溶解，配 制成浓度为〇. 3mg/mL的溶液，按如下条件分别进行HPLC检测，记录色谱图至主成分峰保留 时间的3倍；控制拉科酰胺原料药中式I化合物单个最大杂质峰面积不得大于式I化合物 标准品溶液峰面积的0. 1%，总杂质峰面积之和不得大于式I化合物标准品溶液峰面积的 1. 0%。根据对照品色谱图中式I的保留时间确定甲基化反应产物中该杂质的峰，并按照面 积归一法计算式I的含量。
[0174] 其中HPLC参数为：
[0175] 色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Agilent XDB-C18, 250*4. 6mm，5um)
[0176] 流动相：0· OlM磷酸二氢钾（pH 3· 0)和乙腈
[0177] 柱温：25°C
[0178] 流速：1. OmT ,/mi η
[0179] 运行时间：20min
[0180] 检测波长：2IOnm
[0181] 按如下梯度运行：
[0182]
[0183] 测得式I含量为0. 98%，在内控规定限度范围内，可以用于下一步反应。
[0184] 实施例29 :作为标准品用于拉科酰胺的质量控制
[0185] 将式I标准品溶液和拉科酰胺原料药用乙腈：甲醇按体积比为80:20的混合溶液 溶解，配成0. 3mg/mL的溶液。按如下条件分别进行HPLC检测，记录色谱图至主成分峰保留 时间的3倍；控制拉科酰胺原料药中式I化合物单个最大杂质峰面积不得大于式I化合物 标准品溶液峰面积的0. 1%，总杂质峰面积之和不得大于式I化合物标准品溶液峰面积的 1. 0%。根据对照品色谱图中式I的保留时间确定该拉科酰胺原料药的溶液中该杂质的峰， 并按照面积归一法计算式I的含量。
[0186] 其中HPLC参数为：
[0187] 色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱（Agilent XDB-C18, 250*4. 6mm，5um)
[0188] 流动相：乙腈/甲醇/0· OlM磷酸氢二铵=20/5/75(体积比），pH为7.0和乙腈/ 甲醇=80/20(体积比）
[0189] 柱温：25°C
[0190] 流速：1. OmT ,/mi η
[0191] 运行时间：20min
[0192] 检测波长：2IOnm
[0193] 按如下梯度运行：
[0194]
[0195] 检测结果如下表所示：
[0196]
[0197] 上述产品的批号为购于上^$第一生彳i药业有k公司生产的拉科酰胺原料药的产 品批号。
【主权项】
1. 一种如式I所示的拉科酰胺类似物的分离方法，其包括下列步骤：(a) 将拉科酰胺类似物的反应母液进行水洗、酸洗再水洗； (b) 减压浓缩蒸除有机溶剂，得到油状物； (c) 将所述的油状物进行正相柱层析或高效液相制备色谱，得到式I化合物即可； 所述的拉科酰胺类似物的反应母液的制备方法，包括下述步骤：在有机溶剂和水的两 相溶剂中，在碱和相转移催化剂的存在下，将式II化合物与甲基化试剂进行取代反应，得 到即可；2. 如权利要求1所述的分离方法，其特征在于，在所述的分离方法中，所述的酸为经水 稀释后的fe; 和/或，在所述的分离方法中，所述的正相柱层析的条件为：流动相为正己烷或石油 醚，与乙酸乙酯的混合液，进行洗脱； 和/或，在所述的分离方法中，所述的高效液相制备色谱的条件为：流动相A为乙腈或 甲醇，流动相B为水，进行梯度洗脱。3. 如权利要求1所述的分离方法，其特征在于，在所述的分离方法中，所述的正相柱层 析的色谱柱的内径为30mm ; 和/或，在所述的分离方法中，所述的正相柱层析的色谱柱的长度为400mm ; 和/或，在所述的分离方法中，所述的正相柱层析的填料为硅胶。4. 如权利要求2所述的分离方法，其特征在于，在所述的分离方法中，当所述的流动相 为正己烷和乙酸乙酯时，正己烷和乙酸乙酯的体积比为2~5 ;当所述的流动相为石油醚和 乙酸乙酯时，石油醚和乙酸乙酯的体积比为2~4 ; 和/或，在所述的分离方法中，所述的正相柱层析的洗脱体积为5~10个柱体积。5. 如权利要求2所述的分离方法，其特征在于，在所述的分离方法中，所述的正相柱层 析的洗脱液经蒸馏除去溶剂，得到式I化合物。6. 如权利要求1所述的分离方法，其特征在于，在所述的分离方法中，所述的高效液相 制备色谱的色谱柱为Varian L&L4002 ; 和/或，在所述的分离方法中，所述的高效液相制备色谱的色谱柱的内径为50_ ; 和/或，在所述的分离方法中，所述的高效液相制备色谱的色谱柱的长度为200_ ; 和/或，在所述的分离方法中，所述的高效液相制备色谱的填料为PLRP-S ;所述的高效 液相制备色谱的填料的粒径为10 μ m，孔径为10nm。7. 如权利要求2所述的分离方法，其特征在于，在所述的分离方法中，所述的梯度洗脱 为 O - 15min，A:B = 30:70 ;15 - 55min，A:B = 30:70 - 80:20 ;55 - 65min，A:B = 90:10， 进行线性梯度洗脱。8. 如权利要求2所述的分离方法，其特征在于，在所述的分离方法中，所述的高效液相 制备色谱的流速为100mL/min ; 和/或，在所述的分离方法中，所述的高效液相制备色谱的检测波长为210nm ; 和/或，在所述的分离方法中，所述的高效液相制备色谱的温度为25°C~35°C。9. 如权利要求2所述的分离方法，其特征在于，在所述的分离方法中，所述的高效液相 制备色谱的洗脱液经蒸馏除去溶剂，得到式I化合物。10. 如权利要求1所述的分离方法，其特征在于，在所述的拉科酰胺类似物的反应母液 的制备方法中，所述的有机溶剂为甲苯或二氯甲烷； 和/或，在所述的拉科酰胺类似物的反应母液的制备方法中，所述的有机溶剂与式II 化合物的体积摩尔比为4L/mol~5L/mol ; 和/或，在所述的拉科酰胺类似物的反应母液的制备方法中，所述的水与式II化合物 的体积摩尔比为〇. lL/mol~0. 5L/mol ; 和/或，在所述的拉科酰胺类似物的反应母液的制备方法中，所述的有机溶剂与所述 的水的体积比为17~28 ; 和/或，在所述的拉科酰胺类似物的反应母液的制备方法中，所述的碱为无机碱； 和/或，在所述的拉科酰胺类似物的反应母液的制备方法中，所述的碱与式II化合物 的摩尔比为3~5 ; 和/或，在所述的拉科酰胺类似物的反应母液的制备方法中，所述的相转移催化剂为 季铵盐相转移催化剂； 和/或，在所述的拉科酰胺类似物的反应母液的制备方法中，所述的相转移催化剂与 式II化合物的摩尔比为0. 1~0. 15 ; 和/或，在所述的拉科酰胺类似物的反应母液的制备方法中，所述的甲基化试剂为碘 甲烷、硫酸二甲酯和对甲苯磺酸甲酯中的一种或多种； 和/或，在所述的拉科酰胺类似物的反应母液的制备方法中，所述的甲基化试剂与式 Π 化合物的摩尔比为3~5 ; 和/或，在所述的拉科酰胺类似物的反应母液的制备方法中，所述的取代反应的温度 为 0°C~50°C ; 和/或，在所述的拉科酰胺类似物的反应母液的制备方法中，所述的取代反应的时间 为 3h ~100h。
【专利摘要】本发明公开了一种拉科酰胺类似物的分离方法。本发明提供了一种如式I所示的拉科酰胺类似物的分离方法，其包括下列步骤：(a)将拉科酰胺类似物的反应母液进行水洗、酸洗再水洗；(b)减压浓缩蒸除有机溶剂，得到油状物；(c)将所述的油状物进行正相柱层析或高效液相制备色谱，得到式I化合物即可；所述的拉科酰胺类似物的反应母液的制备方法，包括下述步骤：在有机溶剂和水的两相溶剂中，在碱和相转移催化剂的存在下，将式II化合物与甲基化试剂进行取代反应，得到即可。本发明的如式I所示的拉科酰胺类似物是对拉科酰胺进行质量控制的必需品；本发明的分离方法可以高效地分离得到上述的类似物。
【IPC分类】C07C271/22, C07C269/08, C07C269/06
【公开号】CN104892460
【申请号】CN201510355245
【发明人】黄臻辉, 袁永雷, 谢建树, 魏宪民
【申请人】上海上药第一生化药业有限公司, 上海医药集团股份有限公司
【公开日】2015年9月9日
【申请日】2015年6月24日