进行所述离子交换处理时，所述液体乳在离子交换柱中 保留时间为4-10分钟。根据本发明的一些优选实施例，所述液体乳在离子交换柱中保留时 间为6-8分钟。由此，能够有效提高离子交换吸附的效率，有利于乳铁蛋白的提取。
[0039] 根据本发明的实施例，所述洗脱为梯度洗脱，参照图2,所述梯度洗脱包括：预洗 脱、第一洗脱和第二洗脱。具体地，根据本发明的一些具体示例，所述梯度洗脱包括：利用水 进行预洗脱；利用第一洗脱溶液进行第一洗脱；以及利用第二洗脱溶液进行第二洗脱，其 中，所述第一洗脱溶液和第二洗脱溶液分别独立地含有选自氯化钠、氯化钾、氯化镁及氯化 钙的盐的至少一种，并且所述第二洗脱溶液中的盐浓度高于所述第一洗脱溶液中的盐。由 此，能够有效洗脱获得乳铁蛋白，且获得的乳铁蛋白能够保持天然构型，结构完整，纯度高， 活性好。
[0040] 根据本发明的一些具体示例，所述第一洗脱溶液为25质量％ -35质量％的氯化钠 溶液；所述第二洗脱溶液为75质量％ -100质量％的氯化钠溶液。根据本发明的一些优选 实施例，所述第一洗脱溶液为30质量％的氯化钠溶液；所述第二洗脱溶液为80质量％ -90 质量％的氯化钠溶液。由此，提取获得的乳铁蛋白纯度高，活性好。
[0041] 其中，需要说明的是，进行梯度洗脱时，所采用的水、第一洗脱溶液和第二洗脱溶 液的体积不受特别限制，只要能够有效除去杂质，洗脱获得乳铁蛋白即可。根据本发明的一 些具体示例，利用2-10柱体积，优选5柱体积的水进行预洗脱。根据本发明的一些实施例， 利用5-20柱体积，优选10-15柱体积的水进行第一洗脱。根据本发明的另一些实施例，利 用5-20柱体积，优选10-15柱体积的水进行第二洗脱。由此，乳铁蛋白得率高、活性好、纯 度高。
[0042] S200 :脱盐处理
[0043] 对所述含有乳铁蛋白的盐溶液进行脱盐处理，以便获得所述乳铁蛋白。
[0044] 根据本发明的实施例，进行脱盐处理的方法不受特别限制，只要能够有效脱盐，纯 化乳铁蛋白即可。根据本发明的一些实施例，可以采用有机膜过滤进行脱盐处理。根据本 发明的一些具体示例，利用孔径为30000-80000Da的有机膜进行所述脱盐处理。由此，能够 有效提高乳铁蛋白的纯度。其中，膜浓缩倍数和电离度也不受特别限制，根据本发明的一些 具体示例，膜浓缩倍数为9-11，优选10 ;且电离度低于0. lms/ds。由此，能够有效防止损伤 乳铁蛋白的活性。
[0045] 根据本发明的实施例，本发明的方法可以进一步包括：将所述乳铁蛋白进行冷冻 干燥，以便获得乳铁蛋白冻干粉。由此，便于包装处理，利于工业化生产的进行。
[0046] 根据本发明的实施例，本发明的方法还可以进一步包括：将所述乳铁蛋白进行膜 除菌处理。由此，能够有效提高食品安全性，有利于工业化生产的进行。其中，所述膜除菌 处理采用的膜的孔径不受特别限制，只要能够有效除菌即可。根据本发明的一些具体示例， 利用孔径为〇. 2微米的膜进行所述膜除菌处理。由此，除菌效果好，制备获得的乳铁蛋白安 全性尚。
[0047] 此外，根据本发明的实施例，本发明的方法具有以下优点的至少之一：
[0048] 1、利用本发明的方法能够从液体乳中有效提取获得乳铁蛋白，并且，操作简单、成 本低、效率高、适于工业化生产，且获得的乳铁蛋白活性高，质量好。
[0049] 2、针对乳铁蛋白的制备原料，现有技术中均采用牛初乳，而本发明可以采用呈新 鲜牛奶、羊奶、乳清，或者由乳粉和水的混合物形式的液体乳。
[0050] 3、目前已有记载的提取乳铁蛋白的方法，均是将牛初乳通过加入酸酶等方法去除 了酪蛋白后再进行离子交换吸附；而本发明无需去除酪蛋白，直接采用上述的液体乳进行 离子交换吸附，即可提取获得乳铁蛋白。
[0051] 4、本发明结合强阳离子交换树脂和离子梯度洗脱，提取获得的乳铁蛋白活性好、 纯度高。
[0052] 下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的 实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条 件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪 器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
[0053] 实施例1
[0054] 根据本发明的制备乳铁蛋白的方法，参照图1和图2,按照以下步骤制备乳铁蛋 白：
[0055] I. 1离子交换
[0056] 取脂肪含量为0,粒径分布D90为1微米以下的牛奶（预先经过脱脂），加热至1°C; 然后，利用强阳离子交换树脂对温度为1°C的牛奶进行离子交换处理，以便使乳铁蛋白吸附 于离子交换柱上，其中，该阳离子交换树脂的功能基团为磺丙基或SO3，粒径大小为200 μ m ; 牛奶在离子交换柱中保留时间为4分钟。
[0057] 1. 2梯度洗脱
[0058] 对上述离子交换柱进行梯度洗脱，以便获得含乳铁蛋白的盐溶液，具体如下：
[0059] a.利用2柱体积的水进行预洗脱；
[0060] b.利用5柱体积的25质量％的氯化钠溶液进行第一洗脱；
[0061] c.利用5柱体积的75质量％的氯化钠溶液进行第二洗脱。
[0062] L 3脱盐处理
[0063] 利用孔径为1000 Da的有机膜，对上述获得的含乳铁蛋白的盐溶液进行脱盐处理， 以便获得乳铁蛋白，其中，膜浓缩倍数为9,经过脱盐处理后溶液电离度低于0. lms/ds，经 检测，获得的乳铁蛋白纯度为91%。
[0064] L 4冷冻干燥或膜除菌
[0065] 进一步，将上述乳铁蛋白进行冷冻干燥，以便获得乳铁蛋白冻干粉；或者，
[0066] 将上述乳铁蛋白进行膜除菌处理，以便获得无菌乳铁蛋白溶液，
[0067] 其中，膜除菌的膜的孔径为0. 2微米。
[0068] 实施例2
[0069] 根据本发明的制备乳铁蛋白的方法，参照图1和图2,按照以下步骤制备乳铁蛋 白：
[0070] I. 1离子交换
[0071] 取脂肪含量为0. lg/L，粒径分布D90为1微米以下的牛奶（预先经过脱脂），加热 至4°C;然后，利用强阳离子交换树脂对温度为4°C的牛奶进行离子交换处理，以便使乳铁蛋 白吸附于离子交换柱上，其中，该阳离子交换树脂的功能基团为磺丙基或SO3，粒径大小为 200 μ m ;牛奶在离子交换柱中保留时间为6分钟。
[0072] 1. 2梯度洗脱
[0073] 对上述离子交换柱进行梯度洗脱，以便获得含乳铁蛋白的盐溶液，具体如下：
[0074] a.利用4柱体积的水进行预洗脱；
[0075] b.利用7柱体积的30质量％的氯化钾溶液进行第一洗脱；
[0076] c.利用7柱体积的80质量％的氯化钾溶液进行第二洗脱。
[0077] L 3脱盐处理
[0078] 利用孔径为1000 ODa的有机膜，对上述获得的含乳铁蛋白的盐溶液进行脱盐处 理，以便获得乳铁蛋白，其中，膜浓缩倍数为10,经过脱盐处理后溶液电离度低于〇. Ims/ ds，经检测，获得的乳铁蛋白纯度为92 %。
[0079] 1. 4冷冻干燥或膜除菌
[0080] 进一步，将上述乳铁蛋白进行冷冻干燥，以便获得乳铁蛋白冻干粉；或者，
[0081] 将上述乳铁蛋白进行膜除菌处理，以便获得无菌乳铁蛋白溶液，
[0082] 其中，膜除菌的膜的孔径为0. 2微米。
[0083] 实施例3
[0084] 根据本发明的制备乳铁蛋白的方法，参照图1和图2,按照以下步骤制备乳铁蛋 白：
[0085] I. 1离子交换
[0086] 取脂肪含量为0. 2g/L，粒径分布D90为1微米以下的牛奶（预先经过脱脂），加 热至50°C ;然后，利用强阳离子交换树脂对温度为50°C的牛奶进行离子交换处理，以便使 乳铁蛋白吸附于离子交换柱上，其中，该阳离子交换树脂的功能基团为磺丙基，粒径大小为 200 μ m ;牛奶在离子交换柱中保留时间为8分钟。
[0087] 1. 2梯度洗脱
[0088] 对上述离子交换柱进行梯度洗脱，以便获得含乳铁蛋白的盐溶液，具体如下：
[0089] a.利用5柱体积的水进行预洗脱；
[0090] b.利用10柱体积的30质量％的氯化钾溶液进行第一洗脱；
[0091] c.利用10柱体积的85质量％的氯化钾溶液进行第二洗脱。
[0092] L 3脱盐处理
[0093] 利用孔径为30000Da的有机膜，对上述获得的含乳铁蛋白的盐溶液进行脱盐处 理，以便获得乳铁蛋白，其中，膜浓缩倍数为10,经过脱盐处理后溶液电离度低于