制备莫诺苷的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于原料药品制备领域，涉及一种制备莫诺苷的方法。
【背景技术】
[0002] 莫诺苷（morroniside)为中药山茱萸的主要成分，其中莫诺苷具有神经保护、抗 凝血及血小板聚集、保护心肌细胞、抑制黑素形成、促进骨折愈合等方面等药效作用，尤其， 对缺血性脑损伤具良好的有保护和修复作用。目前，莫诺苷主要用于中药山茱萸及含山茱 萸的中成药含量测定。但由于莫诺苷稳定性较差，遇热、遇酸碱均易发生分解，导致其生产、 制备成本高，使用推广受阻。
[0003] 已有诸多关于莫诺苷制备方法的报道（李小娜等.山茱萸中马钱苷和莫诺苷对照 品的制备，中草药，2006, 37 (8) : 1168-1170)，该文报道了水提一醇沉一AB-8大孔吸附树脂 富集一硅胶粗分一高效液相色谱分离的方法，从山茱萸药材中制备莫诺苷。
[0004] CN101385735A(200710113824. X)中也公开了莫诺苷的制备方法及其新用途。 CN1569867A(200410014771. 2)公开了山茱萸提取物莫诺苷的制备方法和用途，其制备方法 包括山茱萸药材用乙醇提取，提取液减压浓缩，浓缩液加水沉淀，上清液用大孔吸附树脂或 活性炭进行柱层析，除去杂质，乙醇梯度洗脱，洗脱液减压浓缩并干燥，经反相硅胶分离得 到山茱萸提取物莫诺苷，其医药新用途为在制备防治糖尿病血管病变药物中的应用。
[0005] CN102477053A(201010557777. X)公开了一种从山茱萸中提取莫诺苷和马钱苷的 方法。工艺步骤包括70%乙醇超声提取，正丁醇萃取，萃取液浓缩回收正丁醇至干，得到粗 苷，以正丁醇-乙醇-水为两相溶剂系统，将上述粗苷用下相溶解，高速逆流色谱分离，流出 物分别减压蒸干，分别将干燥物用正丁醇和乙酸乙酯结晶2-3次，滤出结晶分别干燥即得 产品。据信采用该发明生产莫诺苷和马钱苷，工艺简单、成本低、产品含量高。
[0006] CNlO 1974048A (201010210730. 6)公开了一种从山茱萸中提取莫诺苷的方法。工艺 步骤包括原料加乙醇超声提取，提取液回收乙醇，过极性大孔树脂吸附，水一醇梯度洗脱， 生物膜纯化浓缩，水饱和正丁醇萃取，再经乙酸乙酯二氯甲烷混合溶液结晶，减压干燥得产 品。据信该发明生产过程简单、可操作性强，所得产品含量高、成本低。该方法具体包括以 下几个步骤：1)超声醇提：将山茱萸原料粉碎加4~15倍量乙醇，常温超声提取1~3小 时提取2~3次；2)大孔树脂吸附：将提取液回收乙醇，过滤，加入大孔树脂柱吸附，水一醇 梯度洗脱，收集莫诺苷流分；3)膜过滤：上述莫诺苷流分加入超滤膜超滤，再加入纳滤膜纳 滤，收集浓缩液；4)萃取；将上述浓缩液加水饱和正丁醇萃取3~5次，合并萃取液，减压浓 缩，得浓缩浸膏；5)结晶：将浸膏溶于乙酸乙酯，除去不溶物和水层，加入无水硫酸钠回收 乙酸乙酯至小体积，滤过加入二氯甲烷，有白色沉淀析出，放置结晶，重复结晶2~3次，减 压干燥即得莫诺苷产品。
[0007] CN102329353A(201110280760. 9)公开了一种莫诺苷的制备方法，采用：山茱萸药 材粉碎后水洗醇沉；醇沉液浓缩，调节PH值至1~3上非极性~弱极性的大孔树脂，水洗至 无色，再用10%~30%的乙醇溶液洗脱3~5倍柱体积，收集洗脱液，浓缩；浓缩液上非极 性~弱极性的大孔树脂，水洗，再用10 %~30%的乙醇溶液洗脱3~5倍柱体积，收集洗脱 液，低温减压干燥，结晶即得。
[0008] 然而，本领域仍然需要有新的制备莫诺苷的方法，特别是需要具有优异效能的方 法来制备莫诺苷。
【发明内容】
[0009] 本发明的目的是提供一种制备莫诺苷的方法，并且期待该方法具有优异的工艺效 能。
[0010] 为此，本发明一个方面提供了制备莫诺苷的方法，包括如下步骤：
[0011] 1)将山茱萸原料，用含水甲醇进行渗漉，得到山茱萸提取液；
[0012] 2)将所述步骤1)得到的山茱萸提取液进行浓缩，得到山茱萸提取液的浸膏；
[0013] 3)将所述步骤2)得到的山茱萸浸膏与硅胶混匀、干燥、研细后，装填于色谱柱中； 所述色谱柱中已装有柱层析用空白硅胶；
[0014] 4)用洗脱液对所述色谱柱进行洗脱，以相当于所述色谱柱中空白硅胶柱体积的流 出液为1个流分，按照下述洗脱法a~洗脱法c中的任意一种进行洗脱并收集流分，用薄层 色谱法合并相似流分，再除去所述收集到的流分中的洗脱液，用甲醇溶解残留物，得甲醇溶 解液；
[0015] 其中，
[0016] 所述洗脱法a为：弃去最先洗脱出的第1~第3个流分，收集第4~第7个流分；
[0017] 所述洗脱法b为：弃去最先洗脱出的第1~第5个流分，收集第6~第9个流分；
[0018] 所述洗脱法c为：弃去最先洗脱的第1~第7个流分，收集第8~第12个流分。
[0019] 5)将步骤4)所得甲醇溶解液进行重结晶，得到产物。
[0020] 根据本发明的方法，其中步骤1)中，所述山茱萸可以为原药材，也可以为粉末，如 为粉末，其目数为10-60目，优选10-20目。
[0021] 根据本发明的方法，其中步骤1)中，所用溶剂为含水甲醇，水与甲醇的体积比为 70 :30~5 :95 ;或者是30~95%甲醇溶液；例如是50~90%甲醇溶液；例如是60~90% 甲醇溶液。
[0022] 根据本发明的方法，其中步骤1)中，的渗漉法是在室温状态下，温度为室温 (5°C~35°C，优选 20°C~25°C。
[0023] 根据本发明的方法，其中步骤2)中，每毫升山茱萸提浸膏中，相当于含有所述山 茱萸原料的干重为2g~10g，优选4~5g。
[0024] 根据本发明的方法，其中步骤3)中，所述硅胶的目数为粒径规格为200目~300 目；所述用于与山茱萸浸膏混匀的硅胶的用量，为所述山茱萸原料干重的5%~15%，优选 7~10% ;所述色谱柱中，已装填有柱层析用空白硅胶，所述柱层析用空白硅胶的用量为所 述山茱萸原料干重的10%~40%，优选14-20% ;所述色谱柱的径高比为1 :0. 5~1 :5,优 选 1 :1 ~1 :3,优选 1 :1 ~1 :1· 5。
[0025] 根据本发明的方法，其中所述步骤4)中，洗脱液由二氯甲烷与甲醇组成，依次是 体积比为100 :〇、100 :10、100 :30混合的混合液；每种比例的混合液使用2~4个柱体积 (即相当于所述色谱柱中空白硅胶柱体积）。
[0026] 根据本发明的方法，其中所述步骤5)中，重结晶溶剂为甲醇或乙醇。
[0027] 此外，上述方法的步骤1)中，所述渗漉法可按照包括如下步骤的方法进行：将所 述山茱萸浸润于溶剂后，装入底部装有脱脂棉的渗漉器中，并像所述渗漉器中加入溶剂，使 所述渗漉器中的溶剂液面高出所述山茱萸面5厘米~15厘米，放置12小时~48小时后，收 集渗漉液，得到所述山茱萸提取液；所述溶剂为含水甲醇，温度为5°C~35°C，特别是室温。
[0028] 本发明通过缩小硅胶柱的径高比，使用径高比小于等于1 :5的硅胶柱，减少洗脱 时间和洗脱液的用量，以达到降低生产成本的目的，且该方法所用空白硅胶用量小（为药 材干重的10%~40% )，经过1次上柱后，再进行重结晶，即可得到纯度大于70%的莫诺 苷，该产品可以用于进一步精制、纯化，生产高纯度莫诺苷，也可直接用于生产各种目标产 品。该方法具有生产周期短，溶剂用量小，产品成本低等优点，既适用于实验室小规模制备， 也适用于大规模工业生产。
[0029] 经测定，本发明方法的莫诺苷转移率达80 %以上，例如实施例1的转移率达 82. 7%。术语"转移率"是中药领域技术人员公知的，其表示药材中的目标物总量转移到方 法最终提取物中的目标物总量的转移百分率，即方法最终提取物中目标物含量相对于药材 中目标物总量的百分数。
[0030] 本发明具有以下优点：（1)采用体积比为30%以上的含水甲醇提取，莫诺苷提 取转移率得到了提高，从而有利于莫诺苷产率的提高；（2)由于本方法采用的是体积比为 30%以上的含水甲醇提取，减少了醇