约50, 000道尔顿至约1，000, 000道尔 顿，或者从约100, 000道尔顿至约1，200, 000道尔顿，或者从约90, 000道尔顿至约300, 000 道尔顿。透明质酸的分子量通常为分子质量的平均值，例如，可W通过多角度激光散射排阻 色谱法（MA化S-SEC)进行确定。根据其来源，透明质酸具有的多分散度（MyM。）可高达3左 右，或者在优选情况下高达2左右。一般情况下，透明质酸具有相当窄的分子量分布，其值 低于约2. 5,更优选为低于约2。透明质酸聚合物的示例性多分散度的范围为约1. 02至约 2. 5,其中初始透明质酸具有的多分散度可W约为1. 02, 1. 05, 1. 1，1. 2, 1. 3, 1. 3, 1. 5, 1. 6， 1.7, 1.8, 1.9, 2, 0,2. 1,2. 2,2. 3,2. 4或2. 5,或者甚至更高。可选地，透明质酸聚合物在特 定浓度的水中的粘度通常W厘泊为单位，运相当于上述平均分子量范围中的任意一种或多 种。
[0047] 如上所述，透明质酸组分可W包含透明质酸水溶液中的基于交联HA的水凝胶颗 粒。实施例31描述了一种所述组合物。优选的水溶液为透明质酸的生理盐水溶液，其中， 被加入至水凝胶的示例性透明质酸的水溶液具有的浓度范围为按照重量计从约0. 3%至 约4%，或者约0. 5%至约2%。一种代表性剂型包含W下相对量的组分：含有2血浓度为 2〇111旨/1]11^透明质酸的4血凝胶浆料（(2-(乙締基）乙氧基）1-10%透明质酸/阳6-二硫醇）。 特别优选的剂型包括含有2mL浓度为20mg/mL透明质酸的4mL凝胶浆料（(2-(乙締基）乙 氧基）4%透明质酸/PEG-二硫醇）。一般情况下，在所得的膨胀凝胶中透明质酸的最终含 量的范围为约0. 05%至5% (0. 5mg/mL至50mg/mL)。优选地，在所得的膨胀凝胶中透明质 酸的最终含量的范围为约0. 1%至3%，或者约0. 1%至1%，或者约0. 5-0. 8%。在所得的 膨胀凝胶中透明质酸的示例性最终浓度，例如可W相当于W下任意百分数：〇. 1，0. 2, 0. 3, 0 .4, 0. 5, 0. 6, 0. 7, 0. 8, 0. 9, 1. 0, 2. 0, 3. 0, 4. 0,和5. 0。例如，透明质酸相对于所得的组合物 中交联的（如（2-(乙締基）乙氧基透明质酸/阳G-二硫醇）水凝胶颗粒的代表性 相对量（重量比）通常在约10:1，或约5:1，或约3:1，或约1:1范围内。
[0048] 其它的示例性基于HA的组合物包括那些被称为SYNVISC⑩（一种含有hylanA 流体，h5danB凝胶，和生理盐水的凝胶样混合物），HYLASTAN?，MONOVISC?,iGEL-ON&'咬 (请参阅美国专利公开号2012/01426229)或DUROLANE瑕，进一步还包含皮质类固 醇的组合物。本发明提供的结合皮质类固醇和稳定化助剂使用的其它基于透明质酸的组 合物包括那些如美国专利号4, 713, 448,美国专利号5, 143, 724,美国专利号5, 827, 937， 美国专利号6, 013, 679,美国专利号5, 356, 883,美国专利号5, 502, 081，及美国专利号 6, 884, 788,6, 548, 081，6, 620, 927 所述的组合物。
[0049] 在一种或多种实施方式中，本发明提供的透明质酸聚合物组分是无菌的。灭菌的 常规方法包括加热，高压灭菌，化学处理或过滤。
[0050] 巧质类固醇
[0051] 本发明所述的基于HA聚合物的组合物包含皮质类固醇。如前述所讨论的，申请人 认为含有皮质类固醇如曲安奈德或其它的水性透明质酸聚合物的组合物表现出的粘度随 时间的损失大于不含有皮质类固醇的相同组合物所观察到的结果。因此，认为有必要提供 对粘度随时间的降化具有强大耐受性的透明质酸聚合物-皮质类固醇组合物。
[0052] 一般而言，皮质类固醇选自下的一种或多种：氨化可的松化y化ocortisone)、 醋酸氨化可的松（hydrocortisoneacetate)、醋酸可的松（cortisoneacetate)、 錦氨可的松（tixocortolpivalate)、泼尼松龙（prednisolone)、甲泼尼龙 (methylprednisolone)、泼尼松（prednisone)、曲安西龙（triamcinolone)、曲安奈德 (triamcinoloneacetonide)、苯曲安奈德（triamcinolonebenetonide)、口夫曲安奈德 (triamcinolonefuretonide)、己曲安奈德（triamcinolonehexacetonide)、双乙酉堇口夫 曲安奈德（triamcinolonediacetate)、曲安西龙醇（triamcinolonealcohol)、莫米松 (mometasone)、安西奈德（amcinonide)、布地奈德化udesonide)、地奈德（desonide)、氣轻 松醋酸醋（fluocinonide)、氣轻松（fluocinoloneacetonide)、哈西奈德化alcinonide)、 倍他米松化etamethasone)、倍他米松麟酸钢化etamethasonesodiumphosphate)、地 塞米松（dexamethasone)、地塞米松麟酸钢（dexamethasonesodiumphosphate)、氣可 龙（fluocortolone)、氨化可的松-17- 了酸醋 〇iydrocortisone-17-butyrate)、氨化可 的松-17-戊酸醋Oiydrocortisone-17-valerate)、阿氯米松双丙酸醋（aclometasone dipropionate)、倍他米松戊酸醋化etamethasonevalerate)、倍他米松二丙酸醋 化etamethasonedipropionate)、泼尼卡醋（prednicarbate)、氯倍他松-17-下酸醋 (clobetasone-17-butyrate)、氯倍他松-17-丙酸醋（clobetasol-17-propionate)、氣 可龙己酸醋（fluocortolonecaproate)、氣可龙新戊酸醋（fluocortolonepivalate)、 醋酸氣泼尼定（fluprednideneacetate)、倍他米松二丙酸醋一水合物化eclome化asone dipropionatemonohydrate)、氣尼缩松（flunisolide)、丙酸氣替卡松（fluticasone propionate)、磯酸莫米松一水合物（mometasonefuroatemonohydrate)和磯酸氣替卡松 (fluticasonefuroate)〇
[0053]在一个优选的实施方式中，该组合物包含曲安奈德。本发明提供的在水凝胶剂 型中使用的一种优选的化合物为曲安西龙（110，16a)-9-氣11，16, 17, 21四鞋基孕 酱-1，4-二締-3, 20-二酬），或者为其衍生物如曲安奈德，或者为其药学上可接受的盐，醋 或溶剂化物。曲安奈德的结构如下所示。
[0054]
[00巧]本发明提供的皮质类固醇通常被混合，悬浮于，或者包封于基于HA聚合物的组合 物中。可选地，所述皮质类固醇可WW聚合物偶联的形式，或者W可释放的形式共价连接于 一种组分W用于制备基于HA的水凝胶。
[0056] -般情况下，所述组合物中含有的皮质类固醇的量在约0. 5-80mg/mL范围内。可 选地，W每单位重量为基础，根据其药效的不同，本发明提供的水性组合物包含约0. 01重 量％至约20重量％的皮质类固醇。示例性皮质类固醇的量（基于整体湿凝胶重量），例如 对于药效较低的皮质类固醇而言，从约10重量％至约20重量％;W及例如对于药效更强的 生物活性剂如曲安奈德而言，从约0. 01重量％至约10重量％，或者从约0. 01重量％至5 重量％，或者从约0. 01重量％至约3重量％，或者从约0. 1重量％至约2重量％皮质类固 醇，或者甚至从约0. 1重量％至约1重量％的皮质类固醇。
[0057] 稳定化巧剂
[0058] 为了尝试使本发明提供的透明质酸聚合物-皮质类固醇组合物稳定，申请人探索 了大量不同类型的助剂，其中多数对防止或最小化观察到的粘度的降低无作用。然而，申 请人发现本发明所述的助剂如糖、糖醇、多元醇和衍生的多元醇特别有效。因此，被引入本 发明提供的基于HA的聚合物-皮质类固醇组合物的稳定化助剂包括某些糖（单糖、二糖、 多糖）、糖醇、多元醇和含有多元醇的表面活性剂。虽然该类材料通常在处理过程中已经被 用于稳定蛋白W防止其失活，但是该类材料似乎尚未被报道或者被认为与皮质类固醇合用 时可用于稳定基于HA-聚合物的材料W防止其粘度或其它流变学特性的损失。在一个实施 方式中，如本发明所述的水性的基于HA的聚合物的组合物不含有治疗蛋白或多肤。一般 而言，在未受理论束缚的情况下，所述稳定化助剂倾向于具有一个或多个径烷基基团，如径 基-低级烷基径甲基（-CH2-0H)或径乙基（-C&C&OH)。本文提供的被发现适合作为含有皮 质类固醇的组合物中的稳定化助剂的材料包括多糖如薦糖和葡聚糖-40和衍生化多糖，簇 甲基纤维素；糖醇如甘露醇和山梨醇；单糖如N-乙酷氨基葡糖和葡萄糖；二糖如海藻糖、麦 芽糖和乳糖；多元醇如聚乙二醇（阳G)和衍生的多元醇，TR口0N?-X-100(含有芳香族控部 分和一个阳G链，4-(1，1，3, 3-四甲基下基）苯基聚乙二醇的非离子表面活性剂），和甘油 (一种简单的多元醇），如支持性实施例所示。适合使用的多元醇如PEG和衍生的多元醇具 有约4至约500个环氧乙烧重复单位，或者优选为约6至约100个。
[0059] 实施例 1，2, 3,4, 5,6, 7,8,9,10,11，12,17,18,19, 20, 21，22, 23, 24, 25, 26, 27 均 表明薦糖作为含有透明质酸聚合物溶液W及额外还含有基于透明质酸聚合物的凝胶的透 明质酸聚合物溶液中的稳定化助剂具有良好的性能。因此，优选的稳定化助剂为薦糖。运 些实施例表明薦糖的加入可W有效赋予在进行测定的实施例条件下防止粘度降低1. 2倍 至至少11.3倍的稳定化作用。其它的优选助剂包括甘露醇、山梨醇和N-乙酷葡糖胺（请 参阅，例如，实施例5，6，13);乳糖，葡聚糖-40，阳G4000，簇甲基纤维素，TRIT0N?-x-100和 甘油（请参阅，例如，实施例16);海藻糖和葡萄糖（请参阅，例如，实施例17)。
[0060] 为了达到明显的稳定化作用通常不需要大量的稳定化助剂。例如，在稳定化助剂 的量低至1%Wt/wt时可W观察到有益的效果。一般情况下，W上提供的稳定化助剂的量 的范围为从约0. 25%至约20%。W重量百分数为基础，稳定化助剂的示例量的范围为从 约0. 5重量％至约10重量％，或者更多，优选为从约1重量％至约5%，所述稳定化助剂选 自薦糖、葡聚糖-40、簇甲基纤维素、甘露醇、山梨醇、n-乙酷氨基葡萄糖、葡萄糖、海藻糖、 麦芽糖、乳糖、聚乙二醇、TR口0N?-X-100和甘油。本发明提供的上述组合物的示例量包括 0. 5% (所有均为重量％ )，1.0%，1. 5% ,2% ,2. 5% ,3% ,3. 5% ,4% ,4. 5%，5%，7%，8%， 和10%。请参阅，例如，实施例22，其中1 %薦糖在6个月（40°C)时所达到的稳定比为7. 47。
[0061] 粘麼巧其它测量
[0062] 虽然粘度可W被用作基于透明质酸聚合物的组合物的稳定性的指标，但是其它流 变学测定也是适用的，如弹性模量，W及通过凝胶渗透色谱法（GPC)测定的分子量的变化 W反映稳定性。一般情况下，在本发明的实施例中，使用流变仪在实施例设定的条件下测定 粘度。粘度的测定在多种溫度（作为热稳定性的指标），湿度和时间条件下进行，例如，用于 提供保质期的指标。通过实施例可W看出，本发明所述的稳定化助剂在多种条件下可W有 效地明显防止实施例中使用的基于透明质酸的皮质类固醇组合物的粘度随时间的损失。
[0063] 示例忡紀合物巧方法
[0064] -般而言，本发明提供的组合物和方法可W有效地使含有皮质类固醇的基于透明 质酸的聚合物的组合物稳定，W防止其粘度随时间降低。所述稳定化可W通过多种不同方 式中的任意一种进行测定，例如，通过提供一种组合物，当该组合物于60°C下储存6天时， 其粘度的降低与初始值相比不超过约50%。可选地，该组合物于60°C下储存6天时，其粘 度的降低与初始值相比不超过45%。优选地，该组合物于60°C下储存6天时表现出的粘度 的降低与初始值相比不超过40%。可W采用任何适用于评价优势稳定化作用的合适阔值， 可W参阅相应的实施例。于60°C下储存6天的选择（如在加速储存条件下）为常规测定方 式，因为其可W在相对较短的持续时间内提供剂型的稳定性。然而，从实施例可W看出，增 强稳定性的测定可W在多个溫度中的任意溫度下进行，例如，60°C，55°C，40°C，45°C，80°C， 等等，W及经过任意代表性时间段，例如，1天，3天，5天，6天，7天，10天，14天，21天，1个 月，2个月，3个月，或6个月，或者相对湿度下，例如，通常在约30 %至75%的相对湿度范围 内进行。
[0065] 在用于说明本发明所述的引入稳定化助剂的稳定化作用优势的一种可选的实施 方式中，本发明提供的组合物中通常具有的稳定比大于1. 2。如前所述，稳定比是在特定时 间点和规定的储存条件下测量时，含有稳定化助剂的透明质酸聚合物-皮质类固醇组合物 的粘度保留百分数与不含有稳定化助剂的透明质酸聚合物-皮质类固醇组合物的粘度保 留百分数的比值。因此，具有稳定比为1. 0的组合物与不含有稳定化助剂的组合物一样均 表现出粘度降低，也就是说，该助剂未能提供可测量程度的保护作用W防止粘度随时间降 低。优选地，本发明提供的组合物具有的稳定比至少为1.3,或者至少为1.5。特别优选的 组合物具有的稳定比大于约1. 8。在相应的实施例中提供的示例性稳定比包括W下值：约 1.5,约1.6,约1.7,约3.0,约4,约5.0,约7,约7. 5,或者甚至更大。因此，本发明提供的组 合物和方法适用于提供一种水性透明质酸聚合物的组合物，该组合物具有的稳定比相当于 上述各值中的任意一个或多个，或者落在上述任意两个稳定比值之间的范围内。稳定比的 确定可W在任意合适的时间点，例如，在第1天，第3天，第5天，第6天，第7天，第10天，第 14天，第21天，1个月，2个月，3个月，或6个月，W及任意合适的储存溫度下，例如，25°C， 40°C，45°C，55°C，6(rC，或80°C，通常在相对湿度为约30%至75%范围内（例如，W下各值 的任意一个：30%RT，35%RT，40%RT，45%RT，50%RT，55%RT，60%RT，65%RT，70% RT，和75%RT)进行。例如，在一个实施方式中，该组合物于60°C下储存6天时测定稳定 比。
[0066] 还提供一种减少基于透明质酸聚合物的组合物的粘度随时间的降低的方法，该方 法包括引入含有透明质酸聚合物和皮质类固醇的水性组合物，稳定量的稳定化助剂，所述 稳定化助剂可W选自包含糖、糖醇、多元醇和含有多元醇的表面活性剂，从而提供一种稳定 比大于1. 2的组合物，或者可选地，该组合物于60°C下储存6天时表现出粘度的降低相比 于其初始值不超过约50%。在该方法中，例如，该组合物可W为透明质酸组合物的水性溶 液，其可W为透明质酸本身，或者基于透明质酸的聚合物，或者该组合物可W包含基于透明 质酸的聚合物的水溶液，其可W为透明质酸，结合基于透明质酸聚合物的水凝胶。该水性聚 合物可W包含多种盐如氯化钢，多种缓冲物，等等。一般情况下，将包含透明质酸聚合物，稳 定化助剂，和皮质类固醇的水性组合物进行混合，例如，混合时间为数分钟至数小时。然后， 通常将所得的组合物样本转移至容器中，如无菌玻璃瓶中，密封，并将其放置于如上所述W 及实施例中选择的储存条件下。在储存之前，测定水溶液的粘度（例如，相当于零时间点）， W提供用作比较基础的初始值。
[0067] 本发明提供的特别有效的水性组合物为那些含有薦糖作为稳定化助剂的组合物。 水性组合物中薦糖的示例量为 1%wt/wt，2%wt/wt，3%wt/wt，4%wt/wt，5%wt/wt， 6%wt/wt，7%wt/wt，8%wt/wt，9%wt/wt，和 10%wt/wt。确实，发现薦糖在稳定化方 面特别有效，即使在低浓度如1%，1.25%，和1.75% (wt/wt)时。因此，根据本发明，组合 物可W包含任一示例量的稳定化助剂，薦糖，或者其量落在任意两个上述重量百分数之间。
[0068]另外，发现甘露醇在防止粘度的降低方面特别有效，即使其浓度为如1%wt/ w1:, 2%wt/wt, 3%wt/wt, 4%wt/wt，或更高，如 5%wt/wt, 6%wt/wt, 7%wt/wt, 8% wt/wt, 9%wt/wt,和10%wt/wt。因此，根据本发明，组合物可W包含任一示例量的稳定 化助剂，甘露醇，或者其量落在任意两个上述重量百分数之间。
[0069] 还发现其它的稳定化助剂在防止粘度降低方面特别有效，例如，山梨醇（例如，浓 度wt/wt表示，为2%wt/wt, 3%wt/wt, 4%wt/wt，或甚至更高，例如，5%wt/wt, 6% wt/wt, 7%wt/wt, 8%wt/wt, 9%wt/wt,和 10%wt/wt)，N-乙酷氨基葡糖（例如，浓度 wt/wt表示，为 2%wt/wt, 3%wt/wt, 4%wt/wt，或甚至更高，例如，5%wt/wt, 6%wt/wt, 7%wt/wt, 8%wt/wt, 9%wt/wt,和 10%wt/wt)，乳糖（例如，浓度wt/wt 表示，为 2%wt/wt, 3%wt/wt, 4%wt/wt，或甚至更高，例如，5%wt/wt, 6%wt/wt, 7% wt/wt,8%wt/wt,9%wt/wt,和 10%wt/wt)，葡聚糖-40(例如，浓度W%wt/wt表示， 为 2%wt/wt, 3%wt/wt, 4%wt/wt，或甚至更高，例如，5%wt/wt, 6%wt/wt, 7%wt/ wt, 8%wt/wt, 9%wt/wt,和 10%wt/wt)，PEG4000(例如，浓度W%wt/wt表示，为 2% wt/wt,3%wt/wt,4%wt/wt，或甚至更高，例如,5%wt/wt,6%wt/wt,7%wt/wt,8% wt/wt, 9%wt/wt,和10%wt/wt)，簇甲基纤维素（例如，浓度w%Wt/wt表示，为2%wt/wt, 3%wt/wt, 4%wt/wt，或甚至更高，例如，5%wt/wt, 6%wt/wt, 7%wt/wt, 8%wt/ wt,9%wt/wt,和10%wt/wt)，TR口0N-x-