剂的样本的 HA粘度的保留百分数的比值。
[0187]表 17 [018引
[0189] 如上表所示粘度降低，运些结果表明TA的存在导致HA的降解增加。运些结果表 明乳糖、葡聚糖40、PEG40000、CMC、tritonxlOO和甘油的加入导致粘度的降低与无助剂 的HA/TA样本相比有所减少。
[0190] 实施例17
[0191] 60°C下助剂对HA粘度的影响
[019引将 3.92gHA(Shiseido,IV=2mVkg)溶解于500血0. 9%的化C1 中，过夜。溶解 的HA经0. 2ym滤器（Millipore，Opticap4")过滤除菌。将2. 16血抑值为6. 71的IM憐酸钢加入至HA溶液中。然后，将344. 3mgUSP等级的曲安奈德灯A)与206. 6mL已溶解 的HA在无菌的250mL化Igene瓶中进行混合。将约0.48g海藻糖、薦糖、葡萄糖、麦芽糖、 甘露醇、山梨醇和N-乙酷葡糖胺分别与每份24± 1血HA/TA混合1小时，W提供含有约2% (w/w)助剂的样本。对照样本中未添加助剂。对于每个大样本，将2 + 0. 2mL的分装样本放 置于无菌的4mL玻璃瓶中，然后使用隔膜和侣盖将其密封。所有运些分装样本，除了 0小时 的样本W外，均被放置在60°C的烘箱中。除了第0天的样本W外，每个时间点（第1天，第3 天和第6天）从烘箱中取出3个样本并使其冷却至室溫。使用配有40mm2°钢锥的AR550 流变仪（TA仪器）于22°C下扫描3minW测定每个样本的粘度。通过特定天数与第0天的 粘度（3个样本的平均值）的比值确定HA粘度的保留百分数。第6天的稳定比为含有特定 助剂的HA粘度的保留百分数与不含有助剂的样本的HA粘度的保留百分数的比值。
[0193]表 18
[0194]
[0195] 如上表所示粘度降低，运些结果表明TA的存在导致HA的降解增加。运些结果表 明海藻糖、薦糖、葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、山梨醇和N-乙酷葡糖胺的加入导致粘度的降低 与无助剂的HA/TA样本相比有所减少。
[0196] 实施例18
[0197] 60°C下助剂对HA粘度的影响
[019引 将19. 6gHA(Shiseido，IV= 2mVkg)溶解于2.化0. 9%的化C1中，过夜。溶解的HA经0. 2ym滤器（Millipore，Opticap4")过滤除菌。将1. 15血抑值为6. 71的1M憐 酸钢加入至228. 9mLHA溶液中。然后，将334. 9mgUSP等级的曲安奈德灯A)与200. 95mL 已溶解的HA在无菌的250mL化Igene瓶中进行混合。将约0.48g甘露醇、山梨醇、麦芽糖、 薦糖、甘油、葡聚糖40和乳糖分别加入至24+ImL的HA/TH浆料的独立样本中，W提供含有 约2% (w/w)助剂的样本。每份混合物混合1小时。对照样本中未添加助剂。对于每个大 样本，将2 ± 0. 2mL的分装样本放置于无菌的4mL玻璃瓶中，然后使用隔膜和侣盖将其密封。 所有运些分装样本，除了第0天的样本W外，均被放置在6(TC的烘箱中。除了第0天的样 本W外，每个时间点从烘箱中取出3个样本并使其冷却至室溫。使用配有40mm2°钢锥的 AR550流变仪（TA仪器）于22°C下扫描3minW测定每个样本的粘度。通过特定天数与第 0天的粘度（3个样本的平均值）的比值确定HA粘度的保留百分数。第6天的稳定比为含 有特定助剂的HA粘度的保留百分数与不含有助剂的样本的HA粘度的保留百分数的比值。
[0199]表 19
[0200]
[0201] 运些结果表明曲安奈德的存在导致HA的粘度与无曲安奈德的HA相比有所降低。 运些结果表明将甘露醇、山梨醇、薦糖和甘油加入HA/TH样本中导致HA粘度的保留比仅含 有HA/TH的样本更高。
[0202] 实施例19
[020引 60°C下助剂对HA粘度的影响
[0204]将 15. 66gHA(Shiseido,IV= 1. 9m3/kg)溶解于 2L0. 9%的化C1 中，过夜。溶 解的HA经0. 2ym滤器（Millipore，Opticap4")过滤除菌。将9. 4mL抑值为6. 71的1M 憐酸钢加入至1. 87LHA溶液中。然后，将333. 3mg甲基强的松龙乙酸醋（MPA)与200血已 溶解的HA在无菌的250mL化Igene瓶中进行混合。将约0. 48g甘露醇、山梨醇、麦芽糖、薦 糖、甘油、葡聚糖40和乳糖分别加入至24+ImL的HA/MPA浆料的独立样本中，W提供含有 约2% (w/w)助剂的样本。每份混合物混合1小时。对照样本中未添加助剂。对于每个大 样本，将2 ± 0. 2mL的分装样本放置于无菌的4mL玻璃瓶中，然后使用隔膜和侣盖将其密封。 所有运些分装样本，除了第0天的样本W外，均被放置在6(TC的烘箱中。除了第0天的样 本W外，每个时间点从烘箱中取出3个样本并使其冷却至室溫。使用配有40mm2°钢锥的AR550流变仪（TA仪器）于22°C下扫描3minW测定每个样本的粘度。通过特定天数与第 0天的粘度（3个样本的平均值）的比值确定HA粘度的保留百分数。第6天的稳定比为含 有特定助剂的HA粘度的保留百分数与不含有助剂的样本的HA粘度的保留百分数的比值。
[0205]表 20
[0206]
[0207] 将甘露醇、山梨醇、麦芽糖、薦糖、甘油、葡聚糖40和乳糖加入HA/MAP样本所得的 结果为其HA粘度的保留高于仅含有HA/MP的样本。加入助剂的所有样本的第6天稳定率 均大于1。
[020引 实施例20
[0209] 60°C下助剂对HA粘度的影响
[0210] 将 15. 66gHA(Shiseido,IV= 1. 9m3/kg)溶解于 2L0. 9%的化C1 中，过夜。溶 解的HA经0. 2ym滤器（Millipore，Opticap4")过滤除菌。将9. 4mL抑值为6. 71的1M 憐酸钢加入至1. 87LHA溶液中。然后，将338. 9mg倍他米松憐酸钢度MS巧与203. 4mL已 溶解的HA在无菌的250mL化Igene瓶中进行混合。将约0. 48g甘露醇、山梨醇、麦芽糖、薦 糖、甘油、葡聚糖40和乳糖分别加入至24+ImL的HA/BMSP浆料的独立样本中，W提供含有 约2% (w/w)助剂的样本。每份混合物混合1小时。对照样本中未添加助剂。对于每个大 样本，将2 ± 0. 2mL的分装样本放置于无菌的4mL玻璃瓶中，然后使用隔膜和侣盖将其密封。 所有运些分装样本，除了第0天的样本W外，均被放置在6(TC的烘箱中。除了第0天的样 本W外，每个时间点从烘箱中取出3个样本并使其冷却至室溫。使用配有40mm2°钢锥的 AR550流变仪（TA仪器）于22°C下扫描3minW测定每个样本的粘度。通过特定天数与第 0天的粘度（3个样本的平均值）的比值确定HA粘度的保留百分数。第6天的稳定比为含 有特定助剂的HA粘度的保留百分数与不含有助剂的样本的HA粘度的保留百分数的比值。
[0211] 表 21
[0212]
[0213] 将甘露醇、山梨醇、麦芽糖、薦糖、甘油、葡聚糖40和乳糖加入HA/BMSP样本所得的 结果为其HA粘度的保留高于仅含有HA/BMSP的样本。加入助剂的所有样本的第6天稳定 率均大于1。
[0214] 实施例21
[0引引 60°C下助剂对HA粘度的影响
[0216]将 15. 66gHA(Shiseido，IV= 1.9mVkg)溶解于化 0. 9%的化C1 中，过夜。溶解 的HA经0. 2ym滤器（Millipore，Opticap4")过滤除菌。将9. 4mL抑值为6. 71的1M憐 酸钢加入至1. 87LHA溶液中。然后，将356. 7mg醋酸泼尼松龙（PA)与210. 4mL已溶解的 HA在无菌的250mL化Igene瓶中进行混合。将约0.48g甘露醇、山梨醇、麦芽糖、薦糖、甘 油、葡聚糖40和乳糖分别加入至24 ± 1血的HA/BMSP浆料的独立样本中，W提供含有约2 % (w/w)助剂的样本。每份混合物混合1小时。对照样本中未添加助剂。对于每个大样本，将 2 + 0. 2mL的分装样本放置于无菌的4mL玻璃瓶中，然后使用隔膜和侣盖将其密封。所有运 些分装样本，除了第0天的样本W外，均被放置在6(TC的烘箱中。除了第0天的样本W外， 每个时间点从烘箱中取出3个样本并使其冷却至室溫。使用配有40mm2°钢锥的AR550流 变仪（TA仪器）于22°C下扫描3minW测定每个样本的粘度。通过特定天数与第0天的粘 度（3个样本的平均值）的比值确定HA粘度的保留百分数。第6天的稳定比为含有特定助 剂的HA粘度的保留百分数与不含有助剂的样本的HA粘度的保留百分数的比值。
[0217]表 22 [021 引
[0219] 将甘露醇、山梨醇、麦芽糖、薦糖、甘油、葡聚糖40和乳糖加入HA/PA样本所得的结 果为其HA粘度的保留高于仅含有HA/PA的样本。加入助剂的所有样本的第6天稳定率均 大于1。
[0220] 实施例22
[022。 40°C下薦糖对HA粘度的影响
[0222] 将3. 5gHA化ifecore，730邸a)溶解于450mL0. 9%的化C1中，过夜。溶解的HA 经0. 2ym滤器（Millipore，Opticap4")过滤除菌。将1. 77血抑值为6. 71的1M憐酸钢 加入至354mLHA溶液中。然后，将590mgUSP等级的曲安奈德灯A)与354mL已溶解的HA 在无菌的化Igene瓶中进行混合。将约0. 587g薦糖分别加入58. 7± 1血HA/TA浆料的独 立样本中，W提供含有约1% (w/w)薦糖的样本。每个混合物均混合1小时。对照样本中未 添加助剂。对于每个大样本，将2 + 0. 2mL的分装样本防止于无菌的4血玻璃瓶中，然后使 用隔膜和侣盖将其密封。所有运些分装样本，除了第0天的样本W外，均被放置在4(TC的烘 箱中。除了第0天的样本W外，每个时间点（15天，30天，45天和6个月）从烘箱中取出3 个样本并使其冷却至室溫。使用配有40mm2°钢锥的AR550流变仪（TA仪器）于22°C下 扫描3minW测定每个样本的粘度。通过特定天数与第0天的粘度（3个样本的平均值）的 比值确定HA粘度的保留百分数。6个月时的稳定比为含有特定助剂的HA粘度的保留百分 数与不含有助剂的样本的HA粘度的保留百分数的比值。
[0223]表 23
[0224]
[0225] 实施例23
[0226] 薦糖对水凝胶/HA溶液的HA粘度的影响
[0227] 剂型B:将29. 19g经乙締基讽修饰的透明质酸（HAV巧，（Mw苗^30KDa,平均取 代=3. 9% )溶解于1837. 6血注射用水（WFI)中。将807. 6g该HAVS溶液在无菌条件下 转移至已经过0. 2ym滤器进行了两次除菌过滤的无菌化反应器中。22. 7g无菌的已过滤 的憐酸盐（憐酸二氨钢一水合物扣SP]，12. 4g溶于161gWFI，使用6N化0H和6N肥L调 节抑值至7. 4)。然后，将9. 19g无菌的曲安奈德加入至溶液中。将该混合物在50巧m下揽 拌10分钟并在15化pm下揽拌2个小时。将28. 4g无菌的已过滤的二硫酪聚乙二醇3350 溶液（50mg/血溶于W印加入至混合物中。该混合物在15化pm下揽拌3分钟，然后，将循 环水浴（45°C)中的水在反应器的水套中进行循环。然后，混合物在50巧m下揽拌15分 钟，之后关闭揽拌器。约17小时后，停止水循环并且通过打开揽拌器在50rpm下揽拌5分 钟将已形成的凝胶破碎成小块。将4. 5621g无菌的已过滤的HA/0. 9%化C1溶液（7. 8mg/ mL，Mw兰730KDa)加入至已破碎的凝胶。2小时后，在无菌条件下将所得的混合物通过 2X840ym筛网并将其累入填充罐中。经过筛网的混合物在20巧m下揽拌3小时，之后使用 Baxa中继累将混合物填充至无菌的10血玻璃注射器中（约6. 2血每个注射器）。然后将注 射器塞住。部分注射器在40°C/75%RH条件下储存3个月，另一部分注射器在25°C/60% RH条件下储存3个月。
[022引剂型B+薦糖：使用与所述方法相似的方法制备剂型，除了使用的HA/0. 9%化C1 溶液含有1.7%或2%(*/*)薦糖扣5口）。
[0229] 使用Cannon-Ubbelohde半微量玻璃粘度计在溫度设定为25°C的水浴中测定W上 制备的样本的上清液的比粘度。通过吸取ImL样本上清液并使用7mL0. 1M憐酸盐缓冲液 (憐酸二氨钢一水合物，pH7)将其稀释W制备用于粘度测定的样本。使用憐酸盐缓冲液测 定溶剂流动时间。通过3个月时的比粘度（3个样本的平均）与0个月的比粘度的比值确 定HA粘度的保留百分数。
[0230] 表24在40°C/75%RH条件下储存
[0231]
[0234] 运些数据表明将薦糖加入剂型导致HA组分在25°C和40°C下的粘度保留大于未加 入薦糖的剂型。
[0235] 实施例24
[0236] 80°C下薦糖对水凝胶/HA溶液的HA粘度的影响
[0237]将 4. 92gHAVS(Mw730-950邸a;平均取代=3. 9% )溶解于 351 血WFI中。然后， 使用0. 2ym的滤器将该溶液进行除菌过滤。将约13. 5 + 0. 5血的HAVS溶液分装至100血 塑料瓶中。共分装成4瓶。将曲安奈德扣SPKTA]加入每份分装溶液中使得TA含量约为 1.67mg/mL。将内容物混合均匀。将约0. 38血1M憐酸盐缓冲液（pH7. 4)加入至每个混合 瓶中并且使内容物混合均匀。将约0. 47血的50mg/mL二硫酪聚乙二醇3350溶液加入至每 瓶。将内容物混合均匀。关闭瓶子的旋帽并且将每份溶液于45°C下放置过夜。制备7. 83mg/ 血HA溶液（0. 9 %生理盐水）并且经过0. 2ym滤器进行过滤。加入3. 4mL1M憐酸盐缓冲 液（pH6. 7)至678血的HA溶液中。将瓶子从烘箱中取出并且每瓶加入约77±2血HA溶 液（MW= 730邸a;7. 83mg/mL溶于0. 9%生理盐水）。向其中一瓶加入薦糖W产生约为2% (w/w)薦糖的制剂。向第二瓶加入薦糖W产生约为3% (w/w)薦糖的制剂。混合1小时后， 使用60mL注射器及含有筛网的注射器过滤器将每瓶的内容物从840ym的筛网挤出。将每 份挤出的混合物分装（约6. 2mL)至20mL的玻璃闪烁瓶中。使用旋帽盖将瓶子封闭，除了 0 小时样本，将运些样本放置于溫度设定为80°C的烘箱中。除了 0小时样本W外，每个时间点 (10小时，20小时和30小时），从烘箱中取出3个样本并将其冷却至室溫。使用配有40mm 2°钢锥的AR550流变仪UA仪器）于22°C下扫描3minW测定每个样本的粘度。通过特定 天数与0小时的粘度（3个样本的平均值）的比值确定HA粘度的保留百分数。30个小时的 稳定比为含有特定助剂的HA粘度的保留百分数与不含有助剂的样本的HA粘度的保留百分 数的比值。
[023引表26
[0239]
[0240] 运些结果表明薦糖的加入导致HA粘度的保留大于未加入薦糖的样本。
[0241] 实施例25
[024引80°C下薦糖对水凝胶/HA溶液的HA粘度的影响
[024引将4. 92gHAVS(Mw730-950邸a;平均取代=3. 9% )溶解于351血WFI中。然后， 使用0. 2ym的滤器将该溶液进行除菌过滤。将约14. 2 + 0. 5血的HAVS溶液分装至100血 塑料瓶中。共分装成4瓶。将曲安奈德扣SPKTA]加入每份分装溶液中使得TA含量约为 1. 67mg/mL。将内容物混合均匀。将约0. 4mL1M憐酸盐缓冲液（pH7. 4)加入至每个混合瓶 中并且使内容物混合均匀。将约0. 5血的50mg/mL二硫酪聚乙二醇3350溶液加入至每瓶。 将内容物混合均匀。关闭瓶子的旋帽并且将每份溶液于45°C下放置过夜。制备7.83mg/mL HA溶液（0. 9 %生理盐水）并且经过0. 2ym滤器进行过滤。加入3. 97mL1M憐酸盐缓冲液 (pH6. 7)至794. 7血的HA溶液中。将瓶子从烘箱中取出并且每瓶加入约82±2血HA溶 液（MW= 880邸a;7. 83mg/mL溶于0. 9%生理盐水）。向其中一瓶加入薦糖W产生约为2% (w/w)薦糖的制剂。向第二瓶加入薦糖W产生约为3% (w/w)薦糖的制剂。混合1小时后， 使用60mL注射器及含有筛网的注射器过滤器将每瓶的内容物从840ym的筛网挤出。将每 份挤出的混合物分装（约6. 2mL)至20mL的玻璃闪烁瓶中。使用旋帽盖将瓶子封闭，除了 0 小时样本，将运些样本放置于溫度设定为8(TC的烘箱中。除了 0小时样本W外，每个时间点 (10小时，20小时和30小时），从烘箱中取出3个样本并将其冷却至室溫。使用配有40mm 2°钢锥的AR550流变仪UA仪器）于22°C下扫描3minW测定每个样本的粘度。通过特定 天数与0小时的粘度（3个样本的平均值）的比值确定HA粘度的保留百分数。30个小时的 稳定比为含有特定助剂的HA粘度的保留百分数与不含有助剂的样本的HA粘度的保留百分 数的比值。
[0244]表 27
[0245]
[0246] 运些结果表明薦糖的加入导致HA粘度的保留大于未加入薦糖的样本。
[0247] 实施例26
[024引60°C下薦糖对水凝胶/HA溶液的HA粘度的影响
[0249]将 4. 92gHAVS(Mw730-950邸a;平均取代=3. 9% )溶解于 351 血WFI中。然后， 使用0. 2ym的滤器将该溶液进行除菌过滤。将约13. 5 + 0. 5血的HAVS溶液分装至100血 塑料瓶中。共分装成4瓶。将曲安奈德扣SPKTA]加入每份分装溶液中使得TA含量约为 1. 67mg/mL。将内容物混合均匀。将约0. 38血1M憐酸盐缓冲液（pH7. 4)加入至每个混合瓶 中并且使内容物混合均匀。将约0. 47血的50mg/mL二硫酪聚乙二醇3350溶液加入至每瓶。 将内容物混合均匀。关闭瓶子的旋帽并且将每份溶液于45°C下放置过夜。制备7.83mg/mL HA溶液（0. 9 %生理盐水）并且经过0. 2ym滤器进行过滤。加入3. 97mL1M憐酸盐缓冲液 (pH6. 7)至794. 7血的HA溶液中。将瓶子从烘箱中取出并且每瓶加入约77 + 2血HA溶 液（MW= 730邸a;7. 83mg/mL溶于0. 9%生理盐水）。向其中一瓶加入薦糖W产生约为2% (w/w)薦糖的制剂。向第二瓶加入薦糖W产生约为3% (w/w)薦糖的制剂。混合1小时后， 使用60mL注射器及含有