一种新的三萜化合物及其制备方法和医药用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体涉及从补骨脂干燥成熟果实中分离得到的一种具 有治疗白血病作用的三萜化合物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 补骨脂为豆科植物补骨脂Psoralea corylifolia L的干燥成熟果实，始载于《雷 公炮灸论》，具有补肾助阳、纳气、止泻的功效。历代中医用于肾虚、冷泻、遗滑精、小便频数、 腰膝冷痛；外治用于皮肤病、白癜风等。补骨脂临床应用广泛，2010年版《中华人民共和国 药典》收录含补骨脂的中成药有20余种。
[0003] 补骨脂化学化成分的研究最早见于1910年。自1933年从补骨脂中分离得到第一 个纯品补骨脂（Psoralen)，至今已分离鉴定了四十余种成分。近年来，又从中分得许多新的 香豆素、黄酮及其他成分。目前，国内外学者对其化学成分研究较多，主要成分为香豆素类， 黄酮类和二萜类化合物。
[0004] (1)香豆素类：有呋喃香豆素如补骨脂素（Psoralen)和异补骨脂素 (Isopsoralen)。拟雌内酯类如补骨脂定（Psoralidin)和双轻异补骨脂定（Eorylidin)0
[0005] (2)黄酮类化合物，如查尔酮类：补骨脂甲素（Ocrylioflni)和补骨脂乙 素（Eorylioflinin)。二氢黄酮类：补骨脂二氢黄酮（Bavaehin)、补骨脂二氢甲醚 (Bavaehinin)和异补骨脂二氢黄酮（Isobavaehin)。异黄酮类：补骨脂异黄酮（Eorylin) 和补骨脂醇黄酮体化合物。
[0006] (3)单砲酸类：补骨脂酸（Bakuehiol)。
[0007] (4)三萜类。
[0008] (5)其它类成分有豆留醇、β-谷留醇葡萄糖苷、三十烷、葡萄糖、棉子糖、对羟基 苯甲酸、树酯、结构未定的补骨脂醛、两种葡萄糖苷等三十余种物质。
【发明内容】
[0009] 本发明的目的是提供一种从补骨脂干燥成熟果实中分离得到的一种具有肝脏保 护作用的三萜化合物及其制备方法。
[0010] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0011] 具有下述结构式的化合物（I )，
[0012]
[0013] 所述的化合物（I )的制备方法，包含以下操作步骤：(a)补骨脂干燥的成熟果实 粉碎，用85%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱 和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步骤（a) 中乙酸乙酯萃取物用大孔树脂除杂，依次用15%乙醇和75%乙醇洗脱，收集75%乙醇洗脱 液，减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏；（c)步骤（b)中75%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离， 依次用体积比为80:1、50:1、30:1、15:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分； (d)步骤（c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为20:1、12:1和5:1的二氯甲 烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；(e)步骤（d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶 分离，用体积百分浓度为70 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8-10个柱体积洗脱液，洗脱液 减压浓缩得到纯的化合物（I )。
[0014] 进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0015] 药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的化合物（I )和药学上可接受的载体。
[0016] 所述的化合物（I )在制备治疗白血病的药物中的应用。
[0017] 所述的药物组合物在制备治疗白血病的药物中的应用。
[0018] 本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。
[0019] 该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I )，其余为药物学上可接受的、 对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0020] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
[0021] 说明书附图
[0022] 图1为化合物（I )结构式；
[0023] 图2为化合物（I )理论E⑶值与实验E⑶值比较；
[0024] 图3为化合物（I )二维ROESY谱。
【具体实施方式】
[0025] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0026] 实施例1 :化合物（I )分离制备及结构确证
[0027] 试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0028] 制备方法：（a)补骨脂干燥的成熟果实（8kg)粉碎，用85%乙醇热回流提取 (25LX3次），合并提取液，浓缩至无醇味（6L)，依次用石油醚（6LX3次）、乙酸乙酯（6LX3 次）和水饱和的正丁醇（6LX3次）萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物（355g) 和正丁醇萃取物；(b)步骤（a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，依次用15%乙 醇（8L)和75 % (12L)乙醇洗脱，收集75 %乙醇洗脱液，减压浓缩得75 %乙醇洗脱物浸膏 (136g) ;(c)步骤（b)中75%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1(8个柱 体积）、50:1 (8个柱体积）、30: U6个柱体积）、15:1 (8个柱体积）和1:1 (5个柱体积）的 二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤（c)中组分4 (31g)用正相硅胶进一步分 离，依次用体积比为20:1 (8个柱体积）、12:1 (10个柱体积）和5: U6个柱体积）的二氯甲 烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤（d)中组分2 (Ilg)用十八烷基硅烷键合的反相 硅胶分离，用体积百分浓度为70%的甲醇水溶液等度洗脱，收集8-10个柱体积洗脱液，洗 脱液减压浓缩得到纯的化合物（I ) (23mg)。
[0029] 结构确证：白色无定形粉末；HR-ES頂S显示[M+Na]+为m/z 479. 2812,结合核磁 特征可得分子式为C28H4qO5，不饱和度为9。核磁共振氢谱数据δ H(ppm，DMS0-d6,600MHz): Η-1(1·87, d)，H-I (1.82, d)，H-3 (2.77, d)，H-3 (2.45, d)，H-5 (1.32, m)，H-6 (I. 51， overlap)，H_6 (I.51，overlap)，H_7 (I.89，m)，H_7(0·98，m)，H_8 (2.73，overlap)， H-ll (5.82，s)，H-15 (2.01，overlap)，H-15 (2.01，overlap)，H-16(2.68，overlap)， H-16(2.68, overlap)，H-19(1.22, s)，H-20(2.67, overlap)，H-21(l. 11，d，J = 7.0)， H-22 (I. 98, m)，H-22 (I. 54, m)，H-23 (2. 82, m)，H-23 (2. 73, overlap)，H-24 (5. 93, t，J = 7.6)，H-27(2. 11，s)，H-28(1.08, s)，H-29(1.03, s)，H-30(l. 15, s);核磁共振碳谱数据 δ c(ppm，DMS0-d6,125Hz) :35. 8(CH2,1-C)，214· 6(C，2-C)，35· 0(CH2,3-C)，48· 6(C，4-C)， 53. 6 (CH，5-C)，22. 7 (CH2, 6-C)，30. 9 (CH2, 7-C)，48. 4 (CH，8-C)，189. 8 (C，9-C)，39. 9 (C， 10-C)，121. 8 (CH，11-C)，213. 3 (C，12-C)，49. 0 (C，14-C)，34. I (CH2,15-C)，37. 0 (CH2,16-C)， 214. 0 (C，17-C)，19. 3 (CH3, 19-C)，46. 5 (CH，20-C)，17. I (CH3, 21-C)，33. 4 (CH2, 22-C)， 28. 2 (CH2, 23-C)，141. 7 (CH，24-C)，130.1 (C，25-C)，171. I (C，26-C)，22. 0 (CH3, 27-C)， 19.0(CH3,28-C)，22.3(CH3,29-C)，26.3(CH3,30-C);碳原子标记参见图 1。13C-NMR 和 DEPT 谱显示有28个碳共振：三个酮羰基，一个酯羰基，二个三取代双键，三个脂族组季碳以及三 个脂族组次甲基，八个脂肪族亚甲基和六个甲基。NMR谱表明，该化合物的结构为六元A、B 环结构的三萜。通过腿8(：谱中!1-11〇5.82)与（：-9，(：-12和(：-14以及!13-28(5 1.08)与 C-8, C-12和C-14的相关性，可知它们组成了环C。此外，HMBC谱中H3-28与C-15的相关 性表明环C和侧链通过C-14和C-15键相连。结合文献三萜类化合物的核磁数据，可基本 确定该化合物如图1所示，并进一步通过ECD试验确定，理论值与实验值基本一致（图2)。 因此，最终确定该化合物结构如图1所示。
[0030] 实施例2 :化合物（I )药理作用试验
[0031] -、材料和仪器
[0032] 人急性单核细胞白血病细胞株U937和急性髓系白血病部分分化型（M2)细胞株 HL60由河北医科大学第二医院血液病研究所提供。化合物⑴为自制，HPLC归一化纯度大 于98%。RPMI 1640购于北京赛默飞世尔公司。胎牛血清、新生牛血清购于杭州四季青公 司。二甲基亚砜购于天津永大化学试剂。Cell Counting Kit-8 (CCK-8)试剂盒购于日本同 仁D0JIND0。DAPI染色液购于美国PROMEGA。Tris碱、甘氨酸、过硫酸胺、丙烯酰胺购于北 京赛百盛。
[0033] 紫外可见分光光度计（TU-1800)(北京普析通用仪器公司产品），全自动制冰机 (日