白色粉末。
[0049] 对得到的三种化合物测试HPLC分析图谱（2541111^?NMR图谱、13CNMR图谱。经 测试，三种化合物分别为：特女贞苷，约1. 3g;女贞苷G13,约1. 0g;油女贞苷，约0. 2g，纯度 均高达98 %，均可作为化学对照品。
[0050] 图Ι-a为实施例1得到的女贞子总苷的HPLC分析图谱（含1 %甲酸的50%甲醇 水溶液，254nm)。
[0051] 图Ι-b为实施例1的制备高效液相的制备色谱图（254nm)。
[0052] 图2a、2b、2c分别为实施例1得到的特女贞苷的HPLC分析图谱（2541111^?NMR图 谱、13CNMR图谱。
[0053] 图3a、3b、3c分别为实施例1得到的女贞苷G13的HPLC分析图谱（254nm)JHNMR 图谱、13CNMR图谱。
[0054] 图4a、4b、4c分别为实施例1得到的油女贞苷的HPLC分析图谱（254nm)、4NMR图 谱、13CNMR图谱。
[0055] 实施例2
[0056] -种从女贞子中同时提取三种环烯醚萜苷类化学对照品的方法，包括以下步骤：
[0057] 1)女贞子总浸膏提取
[0058] 取女贞子药材500g，粉碎后过50目筛，用1500mL的体积浓度为50 %的乙醇水溶 液加热回流提取2次，每次3小时，合并两次提取液，减压回收，得到女贞子总浸膏，约195g。
[0059] 2)提取女贞子总苷
[0060] 将女贞子总浸膏加入约200mL水分散，用Diaion大孔树脂柱（90cm*8cm)进行层 析分离，先用2倍柱体积的水洗脱，之后用3倍柱体积的体积浓度为40%的乙醇水溶液洗 脱，收集洗脱液，减压回收溶剂，得到女贞子总苷，约142g。
[0061] 3)反相高效制备液相色谱纯化
[0062] 将女贞子总苷用体积浓度为40%的甲醇水溶液溶解，配置成100mg/mL的供试品 溶液，经0. 45μm微孔滤膜过滤，得到供试品；
[0063] 采用反相高效制备液相色谱纯化分离，制备型高效液相柱填料品牌为 ChromatorexC18键合相填料；粒径为9μm，柱长20cm、直径7. 5cm;进样体积为5mL，以pH =3 (加入甲酸调节）、体积浓度为55 %的甲醇水溶液为流动相，流速控制在180mL/min， 紫外检测器254nm检测，分别收集收集三个主要色谱峰的流份（保留时间为4. 0-4. 7min， 9. 0-9. 6min，10. 0-10. 8min)，分别干燥，得到三种化合物，外观为白色粉末。
[0064] 对得到的三种化合物测试HPLC分析图谱（2541111^?NMR图谱、13CNMR图谱。经 测试，三种化合物分别为：特女贞苷，约12. 5g;女贞苷G13,约4. 8g;油女贞苷，约1. 2g，纯 度均高达98 %，均可作为化学对照品。
[0065] 图1-c为实施例2的制备高效液相的制备色谱图（254nm)。
[0066] 实施例3
[0067] -种从女贞子中同时提取三种环烯醚萜苷类化学对照品的方法，包括以下步骤：
[0068] 1)女贞子总浸膏提取
[0069] 取女贞子药材500g，粉碎后过50目筛，用1500mL体积浓度为60 %的乙醇水溶液 加热回流提取1次，提取时间3小时，减压回收，得到女贞子总浸膏，约130g。
[0070] 2)提取女贞子总苷
[0071] 将女贞子总浸膏加入约150mL水分散，用D101大孔树脂柱（90cm*8cm)层析分离， 先用2倍柱体积的水洗脱，之后用3倍柱体积的体积浓度为60 %的乙醇水溶液洗脱，收集洗 脱液，减压回收溶剂，得到女贞子总苷，约ll〇g。
[0072] 3)反相高效制备液相色谱纯化
[0073] 将女贞子总苷用体积浓度为60%的甲醇水溶液溶解，配置成200mg/mL的供试品 溶液，经0. 45μm微孔滤膜过滤，得到供试品；
[0074] 采用反相高效制备液相色谱纯化分离，制备型高效液相柱填料品牌为 ChromatorexC18键合相填料；粒径为9μm，柱长20cm、直径5cm;进样体积为5mL，以pH =3 (加入甲酸调节）、体积浓度为45 %的甲醇水溶液为流动相，流速控制在180mL/min， 紫外检测器254nm检测，分别收集三个主要色谱峰的流份（保留时间为6. 0-6. 5min， 12. 0-12. 8min，13. 0-14.Omin)，分别干燥，得到三种化合物，外观为白色粉末。
[0075] 对得到的三种化合物测试HPLC分析图谱NMR图谱、13CNMR图谱。经 测试，三种化合物分别为：特女贞苷，约11. 3g;女贞苷G13,约6. 2g;油女贞苷，约1. 5g，纯 度均高达98 %，均可作为化学对照品。
[0076] 对比例
[0077] 同实施例1，区别在于：不加入甲酸调节pH。
[0078] 结果发现：峰型拖尾，分离度很差。
[0079] 显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对 本发明的实施方式的限定，对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可 以做出其它不同形式的变化或变动，这里无法对所有的实施方式予以穷举，凡是属于本发 明的技术方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。
【主权项】
1. 一种从女贞子中同时提取三种环烯醚萜苷类化学对照品的方法，其特征在于，包括 以下步骤： 1) 提取女贞子总浸膏 将女贞子药材粉碎过筛，在体积浓度为40-60%的乙醇水溶液中加热回流提取，过滤， 减压浓缩干燥，得到女贞子总浸膏； 2) 大孔树脂柱层析分离 将步骤1)得到的女贞子总浸膏进行大孔树脂柱层析分离，以体积浓度为50-60%的乙 醇水溶液作为洗脱剂，洗脱液浓缩干燥，得到女贞子总苷； 3) 反相高效制备液相色谱纯化 将步骤2)得到的女贞子总苷用甲醇水溶液溶解，微孔滤膜过滤，得到供试品； 将供试品用反相高效制备液相色谱纯化分离，色谱柱的填充填料为C18,柱长 20-22cm、直径5-7. 5cm，以体积浓度为45-55%的甲醇水溶液为流动相，甲醇水溶液的pH用 甲酸调节为3,进样体积为l-5mL，流速为80-180mL/min，紫外检测器254nm监测，分别收集 三个主要色谱峰的流份，将三个流份分别浓缩干燥，得到纯度均大于98 %的三种环烯醚萜 苷类化学对照品特女贞苷、女贞苷G13和油女贞苷。2. 根据权利要求1所述的一种从女贞子中同时提取三种环烯醚萜苷类化学对照品的 方法，其特征在于，步骤1)中，药材粉碎过筛时，选择筛子的目数为30-50目。3. 根据权利要求1所述的一种从女贞子中同时提取三种环烯醚萜苷类化学对照品的 方法，其特征在于，步骤1)中，女贞子药材与乙醇水溶液的用量比为lg:30mL。4. 根据权利要求1所述的一种从女贞子中同时提取三种环烯醚萜苷类化学对照品 的方法，其特征在于，步骤2)的具体方法为：将步骤1)得到的女贞子总浸膏用水分散，经 HPD-100、Diaion或D101树脂柱层析分离，先用水作为洗脱剂，洗脱1-2个柱体积，之后以 体积浓度为50-60 %的乙醇水溶液作为洗脱剂，洗脱3-5个柱体积，将洗脱液浓缩干燥得女 贞子总苷。5. 根据权利要求4所述的一种从女贞子中同时提取三种环烯醚萜苷类化学对照品的 方法，其特征在于，步骤2)中，女贞子总浸膏与分散用水的用量比为lg:0. 9-1. 15mL。6. 根据权利要求1所述的一种从女贞子中同时提取三种环烯醚萜苷类化学对照品的 方法，其特征在于，步骤3)中，将步骤2)得到的女贞子总苷用体积浓度为40-60%的甲醇水 溶液溶解。7. 根据权利要求1所述的一种从女贞子中同时提取三种环烯醚萜苷类化学对照品的 方法，其特征在于，步骤3)中，微孔滤膜为0. 45μm微孔滤膜。8. 根据权利要求1所述的一种从女贞子中同时提取三种环烯醚萜苷类化学对照品的 方法，其特征在于，步骤3)中，将步骤2)得到的女贞子总苷用甲醇水溶液溶解后，女贞子总 苷在甲醇水溶液中的浓度为50-200mg/mL。
【专利摘要】本发明公开一种从女贞子中同时提取三种环烯醚萜苷类化学对照品的方法，该方法用乙醇水溶液提取得到女贞子总浸膏，用大孔树脂柱进行层析分离得到女贞子总苷，女贞子总苷用反相高效制备液相色谱纯化分离，得到纯度均大于98％的三种环烯醚萜苷类化学对照品特女贞苷、女贞苷Gl3和油女贞苷。本发明经过简单处理即可以同时得到三种、纯度高达98％的环烯醚萜苷类化学对照品，解决了现有技术中只能得到一种化合物、步骤繁琐且纯度不够的问题。
【IPC分类】C07H1/08, C07H17/04
【公开号】CN105330710
【申请号】CN201510696655
【发明人】刘艳秋, 洪志来, 张晓哲
【申请人】大连医科大学
【公开日】2016年2月17日
【申请日】2015年10月23日