W例 1. 3. 1菌株的紫外诱变
[0050] 将待诱变菌株-产航假丝酵母培养至对数生长期，500化/min离屯、5min，去上清 液，菌体用无菌水再次离屯、洗涂，将菌体加入到含有玻璃珠的15mL无菌生理盐水中振荡 20min，然后用无菌生理盐水稀释至108c化/mU将2血稀释的菌液加至无菌平皿中，放入无 菌磁力揽拌子，再将平皿放在操作台紫外灯下照射20s、40s、60s，照射后吸取菌体进行逐级 稀释，并涂平板进行培养，挑取长得快、菌落大的进行斜面保存。
[0051]1.3. 2菌株的培养方法
[0052]采用上述种子培养基先将各试验菌株活化后接入液体发酵培养基培养，液体发酵 培养基中加入800μgAiL硫酸亚铁（W铁计），28°C摇床发酵2地，测定生物量及酵母细胞 中的铁含量。酵母细胞中铁含量的测定采用邻二氮菲比色法。 阳05引 2结果与讨论
[0054] 2. 1菌株筛选 阳化5] 产航假丝酵母经过紫外线诱变，再经过纯化和摇瓶发酵后，4株诱变菌株的生物 量都比出发菌株（编号CK)有所提高，但菌株间富铁能力有一定差异，结果见表1。其中，C-21菌株酵母细胞中的铁含量及铁转化率均较出发菌株有明显提高。根据高铁含量、高 富集率的原则，选择C-21号菌株为试验用菌株，命名为产航假丝酵母（Candidautilis) BLCC4-0021。
[0056] 表1菌种筛选结果
[0057]
[0058] 2. 2产航假丝酵母（Candidautilis)MXC4-0021的遗传稳定性
[0059] 将产航假丝酵母（Candidautilis化LCC4-0021连续斜面传代10次，并将每一代 分别接种一环于液体发酵培养基中，液体发酵培养基中加入800yg/mL硫酸亚铁铁 计），28°C摇床发酵2地，测定生物量及酵母细胞中的铁含量。同时W1代的产航假丝酵母 (Candidautilis)MXC4-0021 作对照，结果见表 2。
[0060] 表2产航假丝酵母（Candida utilis)BLCC4-00211~10代生物量及细胞中的铁 含量
[0061]
[0062] 由表2可W看出，产航假丝酵母（Candidautilis)I3LCC4-0021经过斜面传代10 次后，运10代的生物量和酵母细胞中铁含量均保持在较高水平，说明该菌株是一株非常理 想的富铁酵母产品生产用菌株。
[0063] 将上述获得的产航假丝酵母（Candidautilis)MXC4-0021于2015年10月16日 保藏于中国典型培养物保藏中屯、，其保藏编号为CCTCCN0:M2015611。
[0064] 实施例2:菌株发酵条件的优化 阳0化]1材料与方法
[0066] 1. 1材料
[0067] 菌种：经紫外诱变筛选得到的产航假丝酵母（Candidautilis)BLCC4-0021。
[0068] 试剂：硫酸亚铁、硝酸铁、Ξ氯化铁、硫酸铁、硫酸铁锭、盐酸径胺、邻二氮菲、醋酸 钢、硝酸、高氯酸，均是分析纯。
[0069] 液体发酵培养基：酵母膏5g，蛋白腺lOg，葡萄糖20g，KH2P〇42g，蒸馈水1000血。 阳070] 1. 2方法
[007U 比较不同铁源、接种量、培养时间、发酵初始抑值、不同加铁时间、通气量对富铁 酵母生物量及铁含量的影响，确定合适的发酵条件。
[0072] 1. 2. 1不同铁源对比试验
[0073] 在液体发酵培养基中分别添加5种不同的铁源，即硫酸亚铁、硝酸铁、Ξ氯化铁、 硫酸铁、硫酸铁锭，使其铁离子浓度为800μg/mU培养基初始抑值5. 0,121°C灭菌30min， 当溫度降至28°C接种，接种量为4%，每500血Ξ角瓶装液量为50血，于28°C、200巧m摇床 培养24h结束。
[0074] 1. 2. 2接种量的确定 阳0巧]选取溫度28°C，培养基中的化2+浓度800μg/mU摇床转速20化pm，培养时间2地， 做不同接种量的单因素试验。
[0076] 1. 2. 3不问抬养溫度试验 阳077] 在培养基中的化2+浓度800 μ g/mU其他培养条件相同的条件下，分别在23°C、 28°C、30°C、32°C下培养该酵母菌24h，测定酵母生物量和酵母细胞内铁含量。 阳078] 1.2. 4通气量（装液量）试验
[0079] 每500血Ξ角瓶装液量分别为25血、50血、75血、100血、125血，培养基中的Fe2+浓 度为800μg/mU初始抑值为5.0,接种量为2%，培养2地，测定酵母生物量及酵母细胞中 铁的含量。
[0080] 1.2. 5不同加铁时间的影响
[0081] 在其他条件相同的情况下，分别在发酵化、1化、24h往培养基中加入硫酸亚铁至 浓度为800μg/mU培养2化后测定酵母生物量及酵母细胞中铁的含量。
[0082] 1. 2. 6发酵培养基初始pH的确定
[0083] 采用上述液体发酵培养基，加入硫酸亚铁，化2+浓度为800μg/mU初始pH值分别 调为4. 0、4. 5、5. 0、5. 5、6. 0、6. 5、7. 0,每500血Ξ角瓶装液量在50血，接种量为2%，培养 2地，测定其生物量和酵母细胞内的铁含量。
[0084] 2结果与讨论
[00化]2.1产航假丝酵母对不同铁源的转化结果
[0086] 产航假丝酵母对不同铁源的转化结果见表3。
[0087] 表3产航假丝酵母对不同铁源的转化结果
[0088]
[0090] 由表3可见，产航假丝酵母对不同铁源的转化能力有很大的不同，而W硫酸亚铁 量最高，故试验确定硫酸亚铁作为酵母富铁用铁源。
[0091] 2. 2接种量对产航假丝酵母生物量和酵母细胞中铁含量的影响结果
[0092] 接种量对产航假丝酵母生物量和酵母细胞中铁含量的影响结果见表4.
[0093] 表4接种量对产航假丝酵母生物量和酵母细胞中铁含量的影响
[0094]
[0095] 从表4可见，接种量对铁酵母的生物量和酵母细胞中的铁含量有一定影响，生物 量W接种量6%最高，而酵母细胞内铁含量W接种量2%最高，经比较各组数值后确定其最 适接种量为2%。
[0096] 2. 3培养溫度对产航假丝酵母生物量和酵母细胞中铁含量的影响结果
[0097] 培养溫度对产航假丝酵母生物量和酵母细胞中铁含量的影响结果见表5。
[0098] 表5培养溫度对产航假丝酵母生物量和酵母细胞中铁含量的影响
[0099]
[0100] 由表5可见，发酵溫度对富铁酵母细胞内铁含量有较大影响。产航假丝酵母在 23°C发酵时，酵母细胞内铁含量最高，在28°C发酵时生物量最高，故可W将发酵溫度控制在 23Γ~28Γ。 阳101] 2. 4通气量对产航假丝酵母生物量和酵母细胞中铁含量的影响结果 阳102] 本试验利用不同的装液量模拟溶解氧条件的影响。通气量对产航假丝酵母生物量 和酵母细胞内铁含量的影响结果见表6。 阳103] 表6通气量对产航假丝酵母生物量和酵母细胞中铁含量的影响 阳104]
[0106] 由表6知，在500mLS角瓶中，装液量大（低溶氧）有利于菌株对铁的吸收，而装液 量小（高溶氧）对菌株生物量的提高比较明显。综上，在500血Ξ角瓶中，装液量在50~75mL时酵母细胞中铁含量较高。 阳107] 2. 5不同加铁时间对产航假丝酵母生物量和酵母细胞中铁含量的影响结果
[010引不同加铁时间对产航假丝酵母生物量和酵母细胞中铁含量的影响见表7。 阳109] 表7不同加铁时间对产航假丝酵母生物量和酵母细胞中铁含量的影响 阳110]
阳111] 由表7知，不同加铁时间对酵母细胞中的铁含量影响很大。产航假丝酵母的生物 量随加铁时间的延