骤1得到的水提取物利用XB-C1^进行反相柱色谱分离，以5v/v%~ 80v/v%的乙腈水溶液进行梯度洗脱，梯度洗脱的流速为5mL/min~100mL/min;收集15v/ V %~50v/v %有机溶剂水溶液分离得到的组分；
[0060] 步骤3，将步骤3得到的组分进行中低压制备色谱分离纯化，以8v/v %~30v/v %的 甲醇水溶液进行洗脱，得到式(I)所示化合物。
[0061 ] 实施例5
[0062] 植物源化合物的制备方法，包括以下步骤：
[0063] 步骤1，将红景天药材与水混合进行回流提取，得到水提取物。所述红景天药材与 水的重量比为1:25。
[0064] 步骤2,将步骤1得到的水提取物利用XB-Phenyl柱进行反相柱色谱分离，以5v/v% ~80v/v %的乙腈水溶液进行梯度洗脱，梯度洗脱的流速为5mL/min~100mL/min;收集15v/ V %~50v/v %有机溶剂水溶液分离得到的组分；
[0065] 步骤3,将步骤3得到的组分进行高效液相色谱分离纯化，以8v/v%~30v/v%的乙 腈水溶液进行洗脱，得到式(I)所示化合物。
[0066] 实施例6
[0067] 对上述实施例1得到的化合物进行了结构鉴定，结果参见图1~图7,其中，图1为本 发明提供的式（I)所示化合物的ESI-MS图，图2为本发明提供的式（I)所示化合物的核磁氢 谱图，图3为本发明提供的式（I)所示化合物的核磁碳谱图，图4为本发明提供的式（I)所示 化合物的HSQC图，图5为本发明提供的式（I)所示化合物的HMBC图，图6为本发明提供的式 (I)所示化合物的HSQC-TOCSY图，图7为本发明提供的式（I)所示化合物的 1H-1HCOSY图。 [0068]具体的，化合物为白色粉末，通过图1的质谱分析可以得知m/z为487.1455[M-H]_ (理论计算值为487.1457)，进而确定化合物分子式为C 21H28O13t3
[0069]根据图2核磁氢谱图中特征峰 1H M0^7.56(2H，d，J = 8.8Hz)，7.12(2H，d，J = 8.8泡），为一组1，4取代苯环上的氢质子信号47.62(1!1，(1，1=16.0泡），6.37(1!1，(1，了 = 16.0抱），为一组反式双键的氢质子信号45.04(1!1，(1，1 = 7.7他），4.61(1!1，(1，1 = 7.7抱）为 两个β吡喃型糖的端基质子信号。再结合图3核磁碳谱图中特征峰13C匪R显示有21个碳信 号，其中有9个为Sp 2杂化的碳信号，δ170.9,160.7,145.8,130.8( X2)，130.1，118.0( X2)， 117.8，提示该化合物母核为对香豆酸;其余12个为2个糖上的碳信号，其中有两个端基碳信 号δ1〇1.4、105.3。通过HSQC谱对部分碳信号进行归属观察到基质子δ5.04与δ1〇1.4相关，δ 4.61与51〇5.3相关。通过批〇(：、腿8(：、!11〇(：-1'(^5￥、1!1-1!1(：05￥确定为两个葡萄糖。腿8(：谱中， 其中δ5.04与Sl60.7(C-4)相关，δ4.61与387.6((:-30相关，所以确定本发明提供的化合物 为对羟基苯丙烯酸-4-〇-i3-D-吡喃葡萄糖-(l - 3)-〇-i3-D-吡喃葡萄糖苷，英文名称P-coumaric acid_4_O_0_D_glucopy;ranosyl_( 1-3)_O_0_D_glucopy;ran oside，表1 为本发 明提供的式(I)所示化合物的核磁数据。其结构如图8所示。
[0070]表1本发明提供的式(I)所示化合物的核磁数据
[0073]注:测试条件为氘代甲醇，1H NMR 400MHz，13C NMR IOOMHz。
[0074]实施例7抗氧化实验
[0075]米用DPPH自由基对本发明制备的p-coumaric acid-4-〇-0-D-glucopyranosyl_(l -3)-〇-0-D-glucopyranoside的体外抗氧化活性进行评价，在数个5mL离心管中加入2mL新 鲜配置的〇.〇5mmol/L DPPH乙醇溶液，加入以无水乙醇配制的不同浓度待测溶液各300yL的 溶液，摇匀，于室温下避光静置30min，分别测定各浓度待测溶液处理后所得溶液在517nm下 的吸光度(Ax)值；
[0076]以无水乙醇作为参比测定其在517nm下的吸光度(Ax)值；
[0077]以300yL无水乙醇代替待测溶液加入离心管（内有2mL新鲜配置的0.05mmol/L DPPH乙醇溶液)作为空白对照，测定吸光度(AO)值；
[0078]以待测溶液与2mL无水乙醇混合作为样品对照，依次配成I、0.5、0.4、0.2、0 . Img/ mL的溶液，测定其吸光度(Ax)值，以消除样品本身的颜色；
[0079]以维生素 C作为阳性对照。VC以水为溶剂，依次配成1、0.5、0.4、0.2、0· lmg/mL的溶 液，测定其抗氧化力，实验条件与样品相同。
[0080] DPPH清除率=[1 -(As-Ax)/Ao] X 100% ;
[0081 ]选择IC50值为提取物清除DPPH能力的测定指标，建立样品浓度与自由基清除率回 归方程，计算出当清除率为50 %时，样品浓度即为IC50。当加入一定质量浓度的提物后， DPPH自由基信号明显减弱，吸光度值随药物质量浓度的增加而减小，清除率随着质量浓度 的增加而提高，说明提取物对DPPH自由基有显著的清除作用，且呈明显的量-效关系。以清 除率对药物质量浓度拟合回归方程，化合物y = 0.8303x+0.1761，R2 = 0.99811C50 = 0.39mg · mL-S 对照药维生素 Cy = O. 395χ+0· 468,R2 = 0.9996，IC50 = 0.081mg · mL-1O
[0082] 结果表明，本发明制备的p-coumaric acid-4-〇-0-D-glucopyranosyl_( l-3)-〇-β-D-glucopyranoside的抗氧化活性类似于维生素 C。由上述实施例可知，本发明提供的化 合物具有良好的抗氧化活性。
[0083] 以上实施例仅为本发明的示例性实施例，不用于限制本发明，本发明的保护范围 由权利要求书限定。本领域技术人员可以在本发明的实质和保护范围内，对本发明做出各 种修改或等同替换，这种修改或等同替换也应视为落在本发明的保护范围内。
【主权项】
1. 一种植物源化合物，其特征在于，具有式(I)所示结构式；2. -种植物源化合物的制备方法，包括W下步骤： 步骤1，将红景天药材用水进行提取，得到水提取物； 步骤2,将步骤1得到的水提取物进行反相柱色谱分离，W5v/v%%~80v/v%的有机溶 剂水溶液进行梯度洗脱，收集15v/v% %~50v/v%有机溶剂水溶液分离得到的组分;所述 有机溶剂为甲醇、乙醇或乙腊； 步骤3,将步骤3得到的组分进行色谱分离纯化，W8v/v% %~30v/v%的有机溶剂水溶 液进行洗脱，得到式(I)所示化合物;所述有机溶剂为甲醇、乙醇或乙腊。3. 根据权利要求2所述的植物源化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤1具体为:将 红景天药材与水混合进行回流提取，得到水提取物。4. 根据权利要求3所述的植物源化合物的制备方法，其特征在于，所述红景天药材与水 的重量比为1:2~25。5. 根据权利要求2-4任一项所述的植物源化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤2 中，梯度洗脱的流速为5mL/min~lOOmL/min。6. 根据权利要求5所述的植物源化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤2中，所述分 离采用XB-Cis 柱、XB-Phen5d柱或 XB-Cs 柱。7. 根据权利要求2所述的植物源化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤3中，所述色 谱分离纯化为高效液相色谱分离、中低压制备色谱分离或常压柱色谱分离。8. -种权利要求1所述植物源化合物在制备抗氧化药物中的应用。9. 一种抗氧化药物，包含权利要求1所述植物源化合物。
【专利摘要】本发明公开一种植物源化合物、其制备方法及应用，植物源化合物，其特征在于，具有式(Ⅰ)所示结构式。植物源化合物的制备方法，包括以下步骤：步骤1，将红景天药材用水进行提取，得到水提取物；步骤2，将步骤1得到的水提取物进行反相柱色谱分离，以5v/v％％～80v/v％的有机溶剂水溶液进行梯度洗脱，收集15v/v％％～50v/v％有机溶剂水溶液分离得到的组分；步骤3，将步骤3得到的组分进行色谱分离纯化，以8v/v％％～30v/v％的有机溶剂水溶液进行洗脱，得到式(Ⅰ)所示化合物；所述有机溶剂为甲醇、乙醇或乙腈。本发明提供的化合物具有良好的抗氧化活性，可应用于制备抗氧化药物。
【IPC分类】C07H1/08, C07H15/203, A61P39/06, A61K31/7034
【公开号】CN105503971
【申请号】CN201510844554
【发明人】萧伟, 谢雪, 常秀娟, 王雪晶, 宋亚玲, 罗鑫, 赵祎武, 温建辉, 倪付勇, 黄文哲, 王振中
【申请人】江苏康缘药业股份有限公司
【公开日】2016年4月20日
【申请日】2015年11月26日