] **.nd:没有测定。
[0117] 试验例2
[0118] 测试了化合物3对人结肠癌细胞HCT-116、胃癌细胞SGC-7901和顺铂耐药胃癌细胞 SGC-7901 /CCCP的体外抗肿瘤活性，顺铂作为阳性对照。观察化合物在不同浓度下对肿瘤细 胞生长的抑制情况，计算抑制率及其IC5Q值来评价药物的细胞毒活性，结果见表3。
[0119] 表3.化合物3的细胞毒活性
[0120]
[0121] *.RF:耐药因子=耐药癌细胞IC5Q值/正常癌细胞IC5〇值。
[0122] 试验例3
[0123] 测试了化合物4.6对人结肠癌细胞HCT-116、肺癌细胞A549、乳腺癌细胞MCF-7、肝 癌细胞HepG2、胃癌细胞SGC-7901和顺铂耐药胃癌细胞SGC-7901/CCCP的体外抗肿瘤活性， 顺铂作为阳性对照。观察化合物在不同浓度下对肿瘤细胞生长的抑制情况，计算抑制率及 其IC 5Q值来评价药物的细胞毒活性，结果见表4。
[0124] 表4.化合物4-6的细胞毒活性
[0125]
[0126] *.RF:耐药因子=耐药癌细胞IC5Q值/正常癌细胞IC5Q值。
[0127] **.nd:没有测定。
[0128] 试验例4
[0129] 测试了化合物7对人脑胶质瘤细胞U87和神经胶质细胞瘤细胞U251的体外抗肿瘤 活性，顺铂作为阳性对照。观察化合物在不同浓度下对肿瘤细胞生长的抑制情况，计算抑制 率及其IC 5Q值来评价药物的细胞毒活性，结果见表5。
[0130] 表5.化合物7的细胞毒活性
[0131]
[0132] 试验例5
[0133] 测试了化合物8对人乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7、结肠癌细胞HCT-116、胃癌细 胞SGC-7901和顺铂耐药胃癌细胞SGC-7901/CCCP的体外抗肿瘤活性，顺铂作为阳性对照。观 察化合物在不同浓度下对肿瘤细胞生长的抑制情况，计算抑制率及其IC 5Q值来评价药物的 细胞毒活性，结果见表6。
[0134] 表6.化合物8的细胞毒活性
[0135]
[0136] *. RF:耐药因子=耐药癌细胞IC5Q值/正常癌细胞IC5Q值。
[0137] (三）、化合物的体内抗肿瘤活性测试
[0138] 实验方法:采用裸鼠，评价受试样品对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠异种移植肿瘤生 长有无抑制作用及作用强度。
[0139] 受试动物:BALB/c裸小鼠，由上海灵畅生物科技有限公司提供。实验动物生产许可 证：SCXK(沪）2013-0018，合格证编号：2013001812710，实验动物使用许可证：SYXK(苏） 2011-0036。日龄:6w，体重：18-20g，性别:雌性，动物数:每组5只，共35只。
[0140] 药物及试剂:顺铂、化合物1和CX-OH，均用5 %葡萄糖注射液超声溶解。
[0141] 组别及给药方案如下：
[0142] 模型对照组:尾静脉注射5%葡萄糖水，0. lml/10g，每周一次，共给药3次；
[0143] 化合物1 (5mg/kg):尾静脉注射5mg/kg药物溶液，0 · lml/10g，每周一次，共给药3 次；
[0?44] 顺钼(5mg/kg):尾静脉注射5mg/kg的药物溶液，0 · lml/10g，每周一次，共给药3次； [0145] CX-〇H(5mg/kg):灌胃5mg/kg的药物溶液，0 · lml/10g，每周一次，共给药3次；
[0?46] CX-〇H(5mg/kg):灌胃5mg/kg的药物溶液，0 · lml/10g，隔天一次，共给药11次；
[0147] 顺铂+CX-OH(均为5mg/kg):尾静脉注射顺铂溶液，灌胃CX-OH溶液，0. lml/10g，均 为每周一次，共给药3次；
[0148] 顺铂+CX-OH(均为5mg/kg):尾静脉注射顺铂溶液，0.1ml/10g，每周一次，共给药3 次，灌胃CX-OH，0. lml/10g，隔天一次，共给药11次；
[0149] 试验例6
[0150]收集培养的人胃癌SGC-7901细胞悬液，浓度为1 X 107个/ml，以每只0.1ml接种于 裸小鼠右侧腋窝皮下。裸鼠移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，接种11天后，肿瘤生长至 100-150_3时将动物随机分组，每组5只。同时，各组裸鼠开始给药，给药方案见组别与给药 方案，使用测量瘤径的方法，动态观察受试样品的抗肿瘤效应。实验结束后，随即处死裸鼠， 手术剥取瘤块称重。
[0151 ] 肿瘤体积(tumor volume，TV)的计算公式为:TV=l/2ab2,其中a、b分别表示长宽。 [0152] 根据测量的结果计算出相对肿瘤体积(relative tumor volume，RTV)，计算公式 为：
[0153] RTV = Vt/Vo，其中Vo为分笼给药时（即do)测量所得肿瘤体积，Vt为每一次测量时的 肿瘤体积。抗肿瘤活性的评价指标:相对肿瘤增殖率T/C( % )，计算公式如下：
[0154]
[0155] 其中，TRTV:治疗组 RTV;Crtv:模型组 RTV。
[0156] 抗肿瘤活性的评价指标:肿瘤生长抑制率（％ )，计算公式如下：
[0157]
[0158] 均值用X土 SD表示，组间分析用t检验进行统计学处理，应用SPSS(Staff stical Package for the Social Science) 17.0对结果进行统计分析。
[0159] 表7.受试样品对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠异种移植瘤生长的抑制作用
[0160]
[0163] 与模型对照组比较，*Ρ<0·05，#Ρ<0·01。
【主权项】
1. 一类含有生物活性基团的四价铂配合物，其特征在于，所述的四价铂配合物即铂 (IV)配合物，其结构如式II所示：式II中，Y为0H或Cl;Bio代表生物活性基团。2. -种如权利要求1所述的一类含有生物活性基团的四价铂配合物的制备方法，其特 征在于，所述的铂（IV)配合物，按照式III所示的反应式进行，式III中，Y为0H或Cl;Bio-OH代表具有生物活性的化合物，TBTU代表偶联试剂0-苯并三 氮唑-N，N，Y，Y-四甲基脲四氟硼酸，TEA代表催化剂三乙胺，DMF代表溶剂N，N-二甲基甲酰 胺，DMS0代表溶剂二甲亚砜； 具体采用如下方法:将等摩尔的反应物Bio-OH和偶联试剂TBTU于无水DMF或DMS0混合， 在室温搅拌下，加入等摩尔的TEA，然后加入等摩尔的Pt(IV)反应物A或B，反应液于氮气保 护下在30-60°C度下搅拌12-48小时，然后减压除去溶剂，浓缩液经硅胶柱层析分离，洗脱液 为二氯甲烷与甲醇混合溶剂，得到黄色固体产物； Pt(IV)反应物A和B的结构如式IV表示，其中A代表顺，顺，反-[Pt(NH3)2Cl2(OH)2]，通过顺铂和双氧水在水中反应制备获得;B代 表顺，顺，反-[Pt(NH3)2Cl2(OH)Cl]，通过顺铂和氯代丁二酰亚胺在水中反应制备获得。3. 根据权利要求2所述的一类含有生物活性基团的四价铂配合物的制备方法，其特征 在于，所述的Bio-OH代表具有生物活性的化合物结构由式I(a-f)所示，其中，（a)为已知进入临床试验的革El向抗肿瘤药物silmitasertib，是一种蛋白激酶CK2 抑制剂，简称为CX_OH;(b)为已知上市药物苯丁酸氮芥，是一种靶点为DNA的抗肿瘤药物，简 称为CHL-OH; (c)为生物素，即维生素 Η，简称为BT-OH; (d)为具有抗氧化抗癌作用的天然产 物香豆素的羧酸衍生物，简称为CUA-OH;(e)为具有抗氧化抗癌作用的天然产物香豆素的三 氮唑羧酸衍生物，简称为⑶T-OH; (f)为已知抗肿瘤药物SAHA的羧酸衍生物，是一种PARP抑 制剂，简称为SAA-OH。4.根据权利要求2所述的一类含有生物活性基团的四价铂配合物的制备方法，其特征 在于，所述的CUT-OH的制备按式V所示的反应式进行，制备⑶T-OH采用如下制备方法： 1) 将等摩尔的2,4_二羟基苯甲醛和乙酰甘氨酸及三倍量的乙酸钠加入乙酸酐中，搅拌 回流4h，将反应液冷却至室温，倒入冰水中，得到黄色沉淀物，过滤，用冰水洗涤两次，干燥 固体得中间体Ml; 2) 将Ml加入浓盐酸：乙醇为2:1的混合溶液中，回流lh，将反应液冷却至室温，倒入冰水 中，然后在冰浴条件下，缓慢加入二倍量的亚硝酸钠，加完搅拌15min后，再缓慢加入三倍量 的叠氮化钠，继续搅拌15min，过滤出褐色沉淀，水洗，柱层析分离得中间体M2,洗脱液为石 油醚:乙酸乙酯为5:1混合溶剂； 3) 将M2悬浮于甲醇，加入等摩尔的丁-3-炔-1-醇和少量抗坏血酸钠，氮气保护下室温 搅拌lOmin，再将溶于水的二倍量的五水硫酸铜加入到反应液中，室温避光搅拌4h，然后旋 蒸除去反应液中的甲醇，加水析出黄色固体，过滤，所得固体用纯水洗涤两次，干燥得中间 体M3; 4)将M3溶于DMF，加入二倍量的丁二酸酐和催化量的DMAP，50 °C反应过夜，冷却至室温， 浓缩反应液，柱层析分离得浅黄色产物，洗脱液为石油醚:乙酸乙酯：甲醇为10:10:1混合溶 剂。
【专利摘要】本发明是一类含有生物活性基团的四价铂配合物及其制备方法，所述的四价铂配合物即铂(IV)配合物，其结构如式II所示：式II中，Y为OH或Cl；Bio代表生物活性基团。所述的铂(IV)配合物，按照式III所示的反应式进行，式III中，Y为OH或Cl；Bio-OH代表具有生物活性的化合物，TBTU代表偶联试剂O-苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲四氟硼酸，TEA代表催化剂三乙胺，DMF代表溶剂N，N-二甲基甲酰胺，DMSO代表溶剂二甲亚砜；采用顺铂为八面体底面，在一个轴向位置引入小分子靶向或药物活性基团，另一个轴向位置引入羟基或氯原子，提供具有克服顺铂耐药的抗肿瘤四价铂配合物，以期获得高效低毒的铂(IV)药物。
【IPC分类】C07F15/00, A61P35/00
【公开号】CN105622674
【申请号】CN201610112246
【发明人】苟少华
【申请人】东南大学
【公开日】2016年6月1日
【申请日】2016年2月29日