一种他替瑞林及其中间体的制备方法

一种他替瑞林及其中间体的制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种多肽中间体和多肽的合成方法，尤其涉及他替瑞林中间体及他替瑞林的合成方法。主要解决现有合成过程中存在的多肽不易结晶以及晶型不易控制的技术问题。本发明合成步骤如下：1）3?甲基?L?4,5?二氢乳清酸的制备：由Boc?Asp?OBzl与甲胺反应得Boc?Asn(Me)?OBzl；其在乙醇钠中回流，得3?甲基?L?4,5?二氢乳清酸苄酯；其氢化得3?甲基?L?4,5?二氢乳清酸：2）H?His?Pro?NH2耦合：由Boc?His(Trt)?OH与H?Pro?NH2偶联得Boc?His(Trt)?Pro?NH2，Boc?His(Trt)?Pro?NH2脱保护基得H?His?Pro?NH2；3）3?甲基?L?4,5?二氢乳清酸与H?His?Pro?NH2耦合得他替瑞林粗肽；4）他替瑞林粗肽结晶得他替瑞林精肽。
【专利说明】
一种他替瑞林及其中间体的制备方法
技术领域
[0001 ]本发明涉及一种多肽中间体和多肽的合成方法，尤其涉及他替瑞林中间体及他替 瑞林的合成方法。
【背景技术】
[0002] 他替瑞林，英文名丨&1衍"1丨11分子式：(： 171123仏〇5，分子量：405.41，0八3: 103300-74-9(无水）201677-75-0(四水）；
他替瑞林是一种垂体激素释放兴奋药，由日本田边三菱制药株式会社研制成功，商品 名Taltirelin，属于化药新药3.1类，目前临床用于改善脊髓小脑变性患者的运动失调最为 有效的药物。他替瑞林(Taltirelin)是世界上第一个批准的口服促甲状腺素释放激素 (TRH)，除具有内分泌作用外，还可发挥一定的中枢神经系统（CNS)作用，包括提高运动活 性，拮抗利舍平诱导的体温降低，以及拮抗戊巴比妥诱导的睡眠。该品种由日本田边三菱制 药株式会社开发，2000年9月首次在日本上市，用于改善脊髓小脑变性病人的共济失调。脊 髓小脑共济失调（SCAs)旧称常染色体显性共济失调，是一组以共济失调、辨距不良为主要 临床表现的中枢神经系统慢性变性疾病。2000年9月前，促甲状腺素释放激素(TRH)注射液 是唯一用于治疗该类疾病的药物。他替瑞林是TRH的结构修饰改造药物，药理学研究显示本 品经由脑TRH受体对CNS产生强而持久的多重作用。本品对CNS的兴奋作用比TRH强10~100 倍，作用持续时间比TRH长约8倍。本品对TRH受体的亲和力约为TRH的1/11，因而本品的内分 泌作用比TRH弱，但本品在体内比TRH稳定。另外本品对促甲状腺素（TSH)释放的作用为TRH 的l/6-l/ll，TSH释放是由一个包括甲状腺激素的强负反馈系统调节的，对中枢神经系统具 有较强的作用，但同时其激素样作用较小，因此副作用较少。不良反应主要是消化系统反 应，包括呕吐、恶心和胃不适。所有的不良反应均为轻中度，在治疗期间及(或)停药后消失。
[0003] 在文献公开的技术中，一般以H-Asn-OH为起始原料，α位N用氯乙氧基乙酯保护，羧 基苄酯保护，环化，甲基化，脱氢得3-甲基-L-4,5-二氢乳清酸，接肽;在以往的过程中，多肽 不易结晶，晶型不易控制。

【发明内容】

[0004] 本发明的目的是提供他替瑞林中间体及他替瑞林的合成方法，主要解决现有合成 过程中存在的多肽不易结晶以及晶型不易控制的技术问题。
[0005] 本发明的技术方案如下:一种他替瑞林及其中间体的制备方法，其合成步骤如下： 1) 3-甲基-L-4，5-二氢乳清酸的制备： 由13〇(：-厶8口-01^1与甲胺反应得13〇(3-厶811(]\^)-01321;13〇(3-厶811(]\16)-01^1在乙醇钠中回 流，得3-甲基-L-4，5-二氢乳清酸苄酯;3-甲基-L-4，5-二氢乳清酸苄酯氢化得3-甲基-L-4， 5-二氢乳清酸； 2) H-His-Pr〇-NH2 耦合： 由13〇(：-]^8(1'1'1:)-0!1与!1-?1'〇-顯2偶联得13〇(3-]^8(1'1'1:)-?1'〇-順2，13〇(3-]^8(1'1'1:)-?1'〇-NH2 脱保护基得 H-His-Pro-NH2; 3) 3-甲基-L-4，5-二氢乳清酸与H-His-Pr〇-NH2耦合得他替瑞林粗肽； 4) 他替瑞林粗肽结晶得他替瑞林精肽。
[0006] 具体合成步骤为将Boc-Asp-OBzl溶于四氢呋喃中，加入1~2倍摩尔量（以Boc-Asp-Obzl摩尔量为基准，后同）的HOSu，滴加1~1.3倍摩尔量DCC，温度冷至0~5°C;将1~3 倍摩尔量甲胺四氢呋喃溶液滴入反应液;反应0.5~4小时;反应液加少量水，过滤DCU，旋蒸 四氢呋喃，乙酸乙酯溶解，过滤不溶物，稀酸洗涤，水洗，碳酸氢钠溶液洗涤，水洗，干燥，蒸 干得Boc _Asn(Me)_0Bzl; 将Boc-Asn(Me)-〇Bzl溶于乙醇中，加入乙醇钠，回流4~8小时，冷却加稀盐酸中和，减 压蒸馏乙醇，石油醚洗涤，水层由乙酸乙酯抽提，乙酸乙酯层饱和食盐水洗涤，乙酸乙酯无 水硫酸镁干燥，过滤，旋蒸得3-甲基-L-4，5-二氢乳清酸苄酯;将3-甲基-L-4，5-二氢乳清酸 苄酯溶于甲醇中，由5%钯碳(钯在钯碳中的重量百分含量为5%)催化氢解，温度室温，反应过 夜，过滤催化剂，蒸干甲醇，得3-甲基-L-4，5-二氢乳清酸固体；由Boc-Hi s (Trt)-OH和H-Pr〇-NH2在DCM中缩合得Boc-His(Trt)- Pr〇-NH2，Boc-His(Trt)- Pr〇-NH2于TFA/DCM溶液 中，得H-His- Pr〇-NH2; 3-甲基-L-4，5-二氢乳清酸与H-His- Pr〇-NH2偶联，乙醚洗，正丁醇 提取;饱和盐水洗涤，正丁醇蒸干，得产品他替瑞林； 其所述的结晶步骤为将他替瑞林溶于纯水，震荡搅拌器搅拌，滴加1~1.1倍体积甲醇， 冰浴冷却，晶体析出，得他替瑞林晶体； 其所述的震荡搅拌器是一种没有剪切力的搅拌器，它通过振动和伯努利原理混匀介 质，可在结晶过程中保持体系处处均匀，溶剂、反相溶剂、溶质均匀，有利于晶体均匀生长。
[0007] 本发明有益效果：传统合成工艺是由N-乙氧羰基-L-天门冬酰胺苄酯，环化，甲基 化制备3-甲基-L-4,5-二氢乳清酸，其中甲基化收率不高，甲基化试剂碘甲烷或硫酸二甲酯 是危险性试剂，对实验操作者有不好影响。本发明将甲基化改成羧酸和胺的缩合反应引入 甲基，更简单易操作，环化后即得到3-甲基-L-4,5-二氢乳清酸苄酯。起始原料为Boc-Asp-〇Bzl是常规的保护氨基酸，价格便宜，收率可达78%。本发明能够降低成本50%。在传统的结 晶工艺中，一般想饱和溶液中加反相溶剂，静置，这样反相溶剂和溶液的密度不同，结晶有 先后，结晶不均与不一致。本发明结晶体系始终均匀，结晶粒径均匀。
【附图说明】
[0008] 图1:为本发明产品色谱图。
[0009] 图2:为本发明产品质谱图。
【具体实施方式】
[0010] 下面给出实施例以对本发明进行具体描述，有必要在此指出的是以下实施例只用 于对本发明作进一步的说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，本领域的技术人员根 据本
【发明内容】
对本发明作出的一些分本质的改进和调整，仍属本发明保护范围； 说明书和权利要求书中所使用的缩写含义列于下表中：
实施例 1 :Boc-Asn(Me)-〇Bz]Jt^iJg: 将Boc-Asp-OBzl溶于四氢呋喃中，加入1倍摩尔量（以Boc-Asp-Obzl摩尔量为基准，后 同）的HOSu，滴加1倍摩尔量DCC，温度冷至0 °C ;将1倍摩尔量甲胺四氢呋喃溶液滴入反应 液;反应0.5小时;反应液加少量水，过滤DCU，旋蒸四氢呋喃，乙酸乙酯溶解，过滤不溶物，稀 酸洗涤，水洗，碳酸氢钠溶液洗涤，水洗，干燥，蒸干得Boc-Asn (Me) -〇bz 1。
[0011] 实施例 2:Boc-Asn(Me)-0Bzl 的制备： 将Boc-Asp-OBzl溶于四氢呋喃中，加入2倍摩尔量（以Boc-Asp-Obzl摩尔量为基准，后 同）的HOSu，滴加1.3倍摩尔量DCC，温度冷至5°C ;将3倍摩尔量甲胺四氢呋喃溶液滴入反应 液;反应4小时;反应液加少量水，过滤DCU，旋蒸四氢呋喃，乙酸乙酯溶解，过滤不溶物，稀酸 洗涤，水洗，碳酸氢钠溶液洗涤，水洗，干燥，蒸干得Boc-Asn (Me) -OBz 1。
[0012] 实施例 3:Boc-Asn(Me)-0Bzl 的制备： 将Boc-Asp-OBzl溶于四氢呋喃中，加入1.5倍摩尔量（以Boc-Asp-Obzl摩尔量为基准， 后同）的HOSu，滴加1.2倍摩尔量DCC，温度冷至2 °C ;将2倍摩尔量甲胺四氢呋喃溶液滴入反 应液;反应2小时;反应液加少量水，过滤DCU，旋蒸四氢呋喃，乙酸乙酯溶解，过滤不溶物，稀 酸洗涤，水洗，碳酸氢钠溶液洗涤，水洗，干燥，蒸干得Boc-Asn (Me) -OBz 1。
[0013] 实施例4:3-甲基-L-4，5-二氢乳清酸的制备： 将Boc-Asn(Me)-〇Bzl溶于乙醇中，加入乙醇钠，回流4小时，冷却加稀盐酸中和，减压蒸 馏乙醇，石油醚洗涤，水层由乙酸乙酯抽提，乙酸乙酯层饱和食盐水洗涤，乙酸乙酯无水硫 酸镁干燥，过滤，旋蒸得3-甲基-L-4，5-二氢乳清酸苄酯;将3-甲基-L-4，5-二氢乳清酸苄酯 溶于甲醇中，由5%含量Pb-C催化氢解，温度室温，反应过夜，过滤催化剂，蒸干甲醇，得3-甲 基 -L-4,5-二氢乳清酸固体。
[0014] 实施例5:3-甲基-L-4，5-二氢乳清酸的制备： 将Boc-Asn(Me)-〇Bzl溶于乙醇中，加入乙醇钠，回流8小时，冷却加稀盐酸中和，减压蒸 馏乙醇，石油醚洗涤，水层由乙酸乙酯抽提，乙酸乙酯层饱和食盐水洗涤，乙酸乙酯无水硫 酸镁干燥，过滤，旋蒸得3-甲基-L-4，5-二氢乳清酸苄酯;将3-甲基-L-4，5-二氢乳清酸苄酯 溶于甲醇中，由5%含量Pb-C催化氢解，温度室温，反应过夜，过滤催化剂，蒸干甲醇，得3-甲 基 -L-4,5-二氢乳清酸固体。
[0015] 实施例6:3-甲基-L-4，5-二氢乳清酸的制备： 将Boc-Asn(Me)-〇Bzl溶于乙醇中，加入乙醇钠，回流6小时，冷却加稀盐酸中和，减压蒸 馏乙醇，石油醚洗涤，水层由乙酸乙酯抽提，乙酸乙酯层饱和食盐水洗涤，乙酸乙酯无水硫 酸镁干燥，过滤，旋蒸得3-甲基-L-4，5-二氢乳清酸苄酯;将3-甲基-L-4，5-二氢乳清酸苄酯 溶于甲醇中，由5%含量Pb-C催化氢解，温度室温，反应过夜，过滤催化剂，蒸干甲醇，得3-甲 基 -L-4,5-二氢乳清酸固体。
[0016] 实施例7:他替瑞林的制备： 将Boc-His(Trt)-OH溶于DCM中，冰浴，加1倍摩尔量（以Boc-His(Trt)-OH摩尔量为基 准，后同）H0Su，加1倍摩尔量DCC，温度0°C，搅拌，活化0.1小时，将1倍摩尔量H-Pr〇-NH2溶 于DCM，滴入反应锅，缩合得Boc-His(Trt)- Pr〇-NH2，加少量水反应掉过量DCC，过滤DCU，水 洗，碳酸氢钠洗，水洗，干燥蒸干得Boc-Hi s (Trt)- Pro-Mfc;干燥Boc-Hi s (Trt) - Pro-Mfc用 TFA/DCM脱保护，TFA: DCM=1:1 (v/v)，得H-Hi s- Pr〇-NH2;同样方法，3-甲基-L-4，5-二氢乳 清酸溶于DCM中，冰浴，加1倍摩尔量（以3-甲基-L-4,5-二氢乳清酸摩尔量为基准，后同） HOSu，加1倍摩尔量DCC，温度0~5°C，搅拌，活化0.1小时，将1倍摩尔量H-His-Pr〇-NH2溶于 DCM，滴入反应锅，缩合得他替瑞林，过滤，蒸干，正丁醇提取;饱和盐水洗涤，正丁醇蒸干，得 产品他替瑞林。产品图谱见图1、2。
[0017] 实施例8:他替瑞林的制备： 将Boc-His(Trt)-OH溶于DCM中，冰浴，加1.5倍摩尔量（以Boc-His(Trt)-OH摩尔量为基 准，后同）H0Su，加1.3倍摩尔量DCC，温度5 °C，搅拌，活化1小时，将1.3倍摩尔量H-Pr〇-NH2 溶于DCM，滴入反应锅，缩合得Boc-His(Trt)- Pr〇-NH2，加少量水反应掉过量DCC，过滤DCU， 水洗，碳酸氢钠洗，水洗，干燥蒸干得Boc-Hi s (Trt) - Pro-Mfc;干燥Boc-Hi s (Trt) - Pro-Mfc 用TFA/DCM脱保护，TFA: DCM=1:1 (v/v)，得H-His- Pr〇-NH2;同样方法，3-甲基-L-4，5-二氢 乳清酸溶于DCM中，冰浴，加1.5倍摩尔量（以3-甲基-L-4，5-二氢乳清酸摩尔量为基准，后 同）HOSu，加1.3倍摩尔量DCC，温度0~5°C，搅拌，活化1小时，将1.3倍摩尔量H-His-Pro-NH 2溶于DCM，滴入反应锅，缩合得他替瑞林，过滤，蒸干，正丁醇提取;饱和盐水洗涤，正丁醇 蒸干，得产品他替瑞林。产品图谱见图1、2。
[0018] 实施例9:他替瑞林的制备： 将Boc-His(Trt)-OH溶于DCM中，冰浴，加1.2倍摩尔量（以Boc-His(Trt)-OH摩尔量为基 准，后同）HOSu，加1.1倍摩尔量DCC，温度2°C，搅拌，活化Ο . 5小时，将1.1倍摩尔量H-Pro-NH2溶于DCM，滴入反应锅，缩合得Boc-His(Trt)- Pr〇-NH2，加少量水反应掉过量DCC，过滤 001，水洗，碳酸氢钠洗，水洗，干燥蒸干得13〇〇-!1丨8(1'1'1:)-?1'〇-冊2;干燥13〇〇-财8(1'1'1:)-Pr0-NH2用TFA/DCM脱保护，TFA: DCM= 1:1 (v/v)，得H-Hi s- Pr0-NH2;同样方法，3-甲基-L-4， 5_二氢乳清酸溶于DCM中，冰浴，加1.3倍摩尔量（以3-甲基-L-4,5-二氢乳清酸摩尔量为基 准，后同）H0Su，加1.2倍摩尔量DCC，温度2°C，搅拌，活化0.5小时，将1.2倍摩尔量H-His-Pr〇-NH 2溶于DCM，滴入反应锅，缩合得他替瑞林，过滤，蒸干，正丁醇提取;饱和盐水洗涤，正 丁醇蒸干，得产品他替瑞林。产品图谱见图1、2。
[0019]实施例10:结晶； 将他替瑞林粗肽溶于30 °C纯水，缓缓加水，水尽量少，过滤，溶液移入震荡搅拌器，震荡 均质，冷却至〇°C，加入甲醇，水：甲醇=l:l(v/v)，震动搅拌器维持震动，温度维持0°C，维持 冷却3小时，结晶析出，过滤，冻干，得他替瑞林产品，收率82%，纯度99.2%。
[0020] 实施例11:结晶； 将他替瑞林粗肽溶于35 °C纯水，缓缓加水，水尽量少，过滤，溶液移入震荡搅拌器，震荡 均质，冷却至5°C，加入甲醇，水：甲醇=l:l.l(v/v)，震动搅拌器维持震动，温度维持5°C，维 持冷却5小时，结晶析出，过滤，冻干，得他替瑞林产品，收率83%，纯度99.1。
[0021] 以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定 本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在 不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为本发明的保护 范围。
【主权项】
1. 一种他替瑞林及其中间体的制备方法，其特征在于其合成步骤如下： 1 )3-甲基-L-4，5-二氢乳清酸的制备： 由Boc-Asp-OBzl与甲胺反应得BoC-Asn(Me)-OBzI;Boc-Asn(Me)-OBzl在乙醇钠中回 流，得3-甲基-L-4，5-二氢乳清酸苄酯;3-甲基-L-4，5-二氢乳清酸苄酯氢化得3-甲基-L-4， 5-二氢乳清酸； 2 H-His-Pro-NH2 耦合： 由 Boc-Hi s (Trt)-OH 与 H-Pr〇-NH2 偶联得 Boc-Hi s (Trt)-Pr〇-NH2，Boc-Hi s (Trt)-Pro-NH2 脱保护基得 H-Hi S-Pro-Mfe; 3)3-甲基-L-4，5-二氢乳清酸与H-His-Pro-NH2耦合得他替瑞林粗肽； 4 )他替瑞林粗肽结晶得他替瑞林精肽。2. 根据权利要求1所述的一种他替瑞林及其中间体的制备方法，其特征在于其具体合 成步骤为： 1)将Boc-Asp-OBz 1溶于四氢呋喃中，加入HOSu，滴加 DCC，温度冷至0~5°C ;将甲胺四 氢呋喃溶液滴入反应液;加水反应〇. 5~4小时;过滤DCU，旋蒸四氢呋喃，乙酸乙酯溶解，过 滤不溶物，稀酸洗涤，水洗，碳酸氢钠溶液洗涤，水洗，干燥，蒸干得Boc-Asn (Me) -OBz 1;将 Boc-Asn(Me)-OBzl溶于乙醇中，加入乙醇钠，回流4~8小时，冷却加稀盐酸中和，减压蒸馏 乙醇，石油醚洗涤，水层由乙酸乙酯抽提，乙酸乙酯层饱和食盐水洗涤，乙酸乙酯无水硫酸 镁干燥，过滤，旋蒸得3-甲基-L-4，5-二氢乳清酸苄酯;将3-甲基-L-4，5-二氢乳清酸苄酯溶 于甲醇中，由5%钯碳催化氢解，温度室温，反应过夜，过滤催化剂，蒸干甲醇，得3-甲基-L-4， 5-二氢乳清酸固体； 2 )由 Boc-Hi s (Tr t) -OH 和 H-Pro-NH2 二氯甲烷中缩合得8〇。-汜8(1^〇-?『〇-冊2,8〇。-His(Trt)- Pro-NH2于三氟乙酸/二氯甲烷溶液中，得H-Hi S- Pro-NH2; 3)3-甲基-L-4，5-二氢乳清酸与H-His- Pro-NH2偶联，乙醚洗，正丁醇提取;饱和盐水洗 涤，正丁醇蒸干，得产品他替瑞林。3. 根据权利要求2所述的一种他替瑞林及其中间体的制备方法，其特征在于HOSu加入 量为Boc-Asp-Obz 1的1~2倍摩尔量，DCC的滴加量为Boc-Asp-Obz 1的1~1 · 3倍摩尔量，甲胺 四氢呋喃溶液滴加量为Boc-Asp-Obz 1的1~3倍摩尔量。4. 根据权利要求1所述的一种他替瑞林及其中间体的制备方法，其特征在于其所述的 结晶步骤为将他替瑞林溶于纯水，震荡搅拌器搅拌，滴加1~1.1倍体积甲醇，冰浴冷却，晶 体析出，得他替瑞林晶体。5. 根据权利要求4所述的一种他替瑞林及其中间体的制备方法，其特征在于其所述的 震荡搅拌器是一种利用伯努利原理往复震荡混匀介质的搅拌器。
【文档编号】C07K5/097GK105949280SQ201610354643
【公开日】2016年9月21日
【申请日】2016年5月26日
【发明人】徐红岩, 冯庆贺
【申请人】吉尔生化（上海）有限公司, 滨海吉尔多肽有限公司