沙门氏菌Southern印记杂交检测方法
【专利摘要】沙门氏菌Southern印记杂交检测方法，其特征在于：包括以下步骤：沙门氏菌DNA获取，探针引物的制备，基因组DNA酶切，酶切产物的电泳，转膜，杂交和洗膜、信号检测。本发明的应用能有效的避免沙门氏菌检测过程中假阳性的出现，能准确判断样本的阴阳性，避免了传统方法中的耗时长，成功率低，设备要求高程序复杂等弊端。可广泛用于口岸中食品、公共卫生、牲畜沙门氏菌样品检测。
【专利说明】
沙口氏菌Southern印巧杂交检测方法
技术领域
[0001] 本发明设及一种生物病原体的检测技术手段，特别是一种应用Southern印记杂交 法快速检测沙口氏菌的方法。
【背景技术】
[0002] 目前，沙口氏菌的检测方法主要为W下几种：
[0003] 1.传统标准检测方法
[0004] 运种培养方法总体可分为W下几个不同阶段:第一步是预增菌，将样品加到一种 高营养、无选择性的培养基中，溫度37°C，使那些"致伤"的细菌复苏及使所有微生物生长。 第二步是选择性增菌，它使沙口氏菌生长而使肉汤中同时存在的微生物数量减少。第=步 是分离步骤，即选择性培养物在含一种或多种抑制非沙口氏菌生长制剂的琼脂平板上划线 培养，然后对平板上肉眼可见的特征性菌落进行确认并对该菌落分离物进行一系列生化和 血清学检测，做出鉴定。该方法是迄今为止最确实的方法，但是由于胆存、切割等原因，有时 需要重复分离并采集大量样品进行培养，耗时约4-7d，程序繁琐耗时耗力。
[0005] 2.聚合酶链反应技术(PCR)
[0006] 作为分子生物学检测的一种重要手段，PCR法具有快速、简便、灵敏的特点，是检测 沙口氏菌的一种方式，常用的方式有常规PCR，RT-PCR(Rea^Time PCR)，巧光RT-PCR，随机 扩增多态性DNA技术等。运些技术手段虽然在一些领域中被使用，但是PCR检测方法受到设 备、实验条件及人员技术的限制，并且会有假阳性和假阴性结果的存在，使得该方法还存在 一定的弊端。
[0007] 3.免疫学方法
[0008] 免疫学的检测放在在沙口氏菌的检测中也常被用到，采用抗原抗体预先结合的原 理进行检测，但是运种方法也存在假阳性的现象，对检测造成了一定程度的影响。
[0009] Southern印记杂交技术是分子生物学领域中最常用的具体方法之一。其基本原理 是:具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件下，可按碱基互补的原则形成双链，此杂 交过程是高度特异的。Southern印记杂交技术十分灵敏，在理想的条件下，用放射性同位素 标记的特异性探针和放射自显影技术，即便每条电泳带仅含化神NA也能被清晰地检测出 来。采用Southern印记杂交技术建立一种边境口岸沙口氏菌检测的新方法，此方法可广泛 用于口岸中食品、公共卫生、牲畜样品检测，该方法的应用能有效的避免沙口氏菌检测过程 中假阳性的出现，将准确判断样本的阴阳性，避免了传统方法中的耗时长，成功率低，设备 要求高、程序复杂等弊端。
[0010] 在1978年，简悦威等医学家在镶状细胞贫血症的基因诊断中就采用过Southern杂 交的方法，取得了基因诊断的突破。2005年，杨娥等人采用Southern印记杂交技术检测 HPV1抓NA在宫颈癌组织中的物理状态;2007年，郭新梅等人采用Southern印记杂交技术检 测木糖异构酶基因是否整合入转基因植株中；2014年，张伟溪等人采用Southern印记杂交 检测证实外源基因 W单拷贝方式整合到5个转基因株系体内，并取得了较好的实验结果。多 年来，Southern印记杂交技术因其特异性强，灵敏性高的特点，多用在检测遗传病诊断、外 源基因检测、DNA图谱分析、PCR产物分析等方面。但在沙口氏菌检测方面并未找到相关的文 献及技术操作。
【发明内容】
[0011] 发明的目的在于提供一种采用Southern印记杂交技术建立一种沙口氏菌检测的 新方法，可广泛用于口岸中食品、公共卫生、牲畜样品检测。本发明的应用能有效的避免沙 口氏菌检测过程中假阳性的出现，能准确判断样本的阴阳性，避免了传统方法中的耗时长， 成功率低，设备要求高程序复杂等弊端。
[0012] 本发明的目的是运样实现的：沙口氏菌Southern印记杂交检测方法，其特征在于： 包括W下步骤:沙口氏菌DNA获取，探针引物的制备，基因组DNA酶切，酶切产物的电泳，转 膜，杂交和洗膜、信号检测。
[0013] 本发明的目的还可W运样实现：
[0014] 所述的探针引物的制备为:实验通过NCBI查阅沙口氏菌特异基因 invA的序列，设 计引物，通过聚合酶链反应(PCR反应)从去毒的沙口氏菌基因组片段质粒上扩增基因 invA 的部分序列并测序;采用Dig-加 TP在Klenow酶的作用下，经随机引物引物PCR扩增可渗入到 新合成的DNA分子中，从而完成DNA探针的标记。
[001引所述的探针引物的具体制备方法为：
[0016] 1)探针序列：
[0017] ggtg过gggtctg过gcg过t过过C过gc过ttgt过ttgttg过tt过过tg过g过tccgtgttg过过C过过ttt过cggtct过ctttg过 tttg过tgcgcgtggt过过过tt过ttcgg过tg过过gtcgc过tt过过tcc过过eg过cct过tc过tc过过ggt过gt过gtc过gt过ttt ctgggtaacgcatgaagaaggagaaaaacttcgggaacttggttacgtgctgcaaaatgcgcttgacgagctttatc 过ttgtctggcggtg过c过ctcgcgcgc过过tgtc过过tg过过t过tttcggt过ttc过gg过过过c过过过过c过t过tgctgg过tc过过 ctgg过ggcg过过过tttcctg过ttt过ett过过过g过过gtgctc过g过C过egee过cggtgc过过cgt过tetetg过过gttttgc过 gcgtttgtt过过gcg过过cgtgtttccgtgcgt过过t过tg过过过tt过过tt过tgg过过gcgctcgc过ttgtgggc过CC过过g过g 过过过过过g过cgtt过tt过过ccttgtgg过过C过t过ttcgtgg过gc过过tggcgcgtt过t过tetgee过t过过过ttegee过过tgge ggtg过过tt过eg过gc过gt过过tggt过tc过getg过过gttg过gg过tgtt过ttege过过过ggg过teegte过g过cctctggc过g taccttcctcagtcttgaaccggaggcctccgctaatttgatggatctcattacgcttaagctggatgatttattga tcgcacataaagatcttgtcctccttacgtctgttgatgtccgcc
[001引 2)探针的标记：
[0019] 本探针用的是地高辛标记技术，用化学方法把类固醇类半抗原地高辛分子连接在 加 TP上化ig-加 TP);用随机引物及DNA多聚酶，W探针DNA为模板，合成互补DNA，化学修饰过 的加 TP同时渗入到标记的DNA探针中；杂交后用碱性憐酸酶标记的抗地高辛单抗与标记探 针DNA中的Dig-加 TP结合，加入显色底物，在碱性憐酸酶作用下，转变成蓝色的化合物；
[0020] 3)探针的制备方法：
[0021] 随机引物标记的DNA带有地高辛-11-加 TP，运一标记采用的是地高辛高效引物试 剂，运是一种含有随机六碳糖，dNTP混合物的5 X浓度标记混合物，其中dNTP混合物包括碱 性标记的地高辛-11-加 TP，标记级的Klenow酶和适合的反应缓冲液;利用PCR技术扩增沙口 氏菌PLA基因的特异性片段，进行纯化并用roche试剂盒标记探针;具体步骤如下：
[0022] a)向一个反应管仲中加入化g模板DNA和高压灭菌的双蒸水，终体积达l&iL
[0023] b)沸水浴10分钟W变性DNA，然后迅速插入冰水混合物中；
[0024] C)充分混合DIG-High Prime,并取化L加入到变性DNA中，混合并简单离屯、；37°C解 育1小时或者过夜；
[0025] d)65°C加热10分钟终止反应。
[00%] 所述的基因组DNA酶切条件为37°C，1小时，酶切体系如下： 组份 加量 lOXbun'cr 4.5 yl
[0027] 甜nd皿时切酶 6.5片1 掉辭 DNA 25 Wg dd取0 补足水至45 y 1，于37°C水洛中酶切20h
[0028] 所述的转膜为:将酶切好的样本基因组进行电泳，利用真空累将胶内DM片段转印 到带有正电荷的尼龙膜上。
[0029] 所述的杂交为:对已标记的探针进行变性并将其混入杂交液中，将转印膜放入杂 交液中浸泡地。
[0030] 所述的洗膜为:用足够的2 X SSC 0.5%SDS连续振荡洗涂两次，每次5分钟。
[0031] 所述的信号检测为:对杂交膜进行显色处理，采用图像仪曝光后观察结果。
[0032] 本发明的技术效果是:沙口氏菌具有较强的传染性，获得其样品比较困难，也导致 了其鉴定比较困难。将Southern印记杂交技术应用于沙口氏菌检测的研究，在该菌种的研 究应用中为首次。依据沙口氏菌本身的菌种特点，在本发明中设计了特异性较强的探针引 物，回避掉在W往PCR研究中采用两个基因同时检测确定阳性的问题。同时依据菌种特点在 Southern印记杂交检测实验步骤中对所设及到的时间、溫度等条件作出了明确的限制。
[0033] 本发明的应用能有效的避免沙口氏菌检测过程中假阳性的出现，能准确判断样本 的阴阳性，避免了传统方法中的耗时长，成功率低，设备要求高程序复杂等弊端，可广泛用 于口岸中食品、公共卫生、牲畜沙口氏菌样品检测。
【附图说明】
[0034] 图1本发明检测方法技术路线图
[0035] 图2利用特异性引物PCR方法检测样本的电泳图
[0036] 图3对杂交膜进行显色处理后采用图像仪曝光后显示出的invA杂交片段图
【具体实施方式】
[0037] 本发明沙口氏菌Southern印记杂交检测方法，具体操作步骤如下：
[0038] 一、采用宝生物DNA提取试剂盒(No. 9765)提取沙口氏菌总DNA。
[0039] 二、探针引物的制备
[0040] 沙口氏菌引物探针序列为自行设计，通过R0C肥的DIG High Prime DNA Labeling and Detection starter Kit II试剂盒进行探针标记。采用紫外交联仪固定DNA探针，用杂 交检测方法进行信号检测，确定探针浓度。
[0041] 沙口氏菌具有较强的传染性，获得其样品比较困难，也导致了其鉴定比较困难。将 Southern印记杂交技术应用于沙口氏菌检测的研究，在该菌种的研究应用中为首次。依据 沙口氏菌本身的菌种特点，在本发明中设计了特异性较强的探针引物，回避掉在1^往?〇?研 究中采用两个基因同时检测确定阳性的问题。同时依据菌种特点在Southern印记杂交检测 实验步骤中对所涉及到的时间、温度等条件作出了明确的限制。
[0042] 1)探针序列：
[0043] ggtg过gggtctg过gcg过t过过C过gc过ttgt过ttgttg过tt过过tg过g过tccgtgttg过过C过过ttt过cggtct过ctttg过 tttg过tgcgcgtggt过过过tt过ttcgg过tg过过gtcgc过tt过过tcc过过eg过cct过tc过tc过过ggt过gt过gtc过gt过ttt ctgggtaacgcatgaagaaggagaaaaacttcgggaacttggttacgtgctgcaaaatgcgcttgacgagctttatc 过ttgtctggcggtg过c过ctcgcgcgc过过tgtc过过tg过过t过tttcggt过ttc过gg过过过c过过过过c过t过tgctgg过tc过过 ctgg过ggcg过过过tttcctg过ttt过ett过过过g过过gtgctc过g过C过egee过cggtgc过过cgt过tetetg过过gttttgc过 gcgtttgtt过过gcg过过cgtgtttccgtgcgt过过t过tg过过过tt过过tt过tgg过过gcgctcgc过ttgtgggc过CC过过g过g 过过过过过g过cgtt过tt过过ccttgtgg过过C过t过ttcgtgg过gc过过tggcgcgtt过t过tetgee过t过过过ttegee过过tgge ggtg过过tt过eg过gc过gt过过tggt过tc过getg过过gttg过gg过tgtt过ttege过过过ggg过teegte过g过cctctggc过g taccttcctcagtcttgaaccggaggcctccgctaatttgatggatctcattacgcttaagctggatgatttattga tcgcacataaagatcttgtcctccttacgtctgttgatgtccgcc
[0044] 2)探针的标记：
[0045] 本探针用的是地高辛标记技术，用化学方法把类固醇类半抗原地高辛分子连接在 加 TP上化ig-加 TP);用随机引物及DNA多聚酶，W探针DNA为模板，合成互补DNA，化学修饰过 的加 TP同时渗入到标记的DNA探针中；杂交后用碱性憐酸酶标记的抗地高辛单抗与标记探 针DNA中的Dig-加 TP结合，加入显色底物，在碱性憐酸酶作用下，转变成蓝色的化合物；
[0046] 3)探针的制备方法：
[0047] 随机引物标记的DNA带有地高辛-11-加 TP，运一标记采用的是地高辛高效引物试 剂，运是一种含有随机六碳糖，dNTP混合物的5 X浓度标记混合物，其中dNTP混合物包括碱 性标记的地高辛-11-加 TP，标记级的Klenow酶和适合的反应缓冲液。利用PCR技术扩增沙口 氏菌PLA基因的特异性片段，进行纯化并用roche试剂盒标记探针。
[004引具体步骤操作如下：
[0049]
[(K)加 ]S、基因组DNA酶切
[0051 ] 对DM进行酶切，酶切条件为37 r，化，酶切体系如下：
[0化2] L W 一 J [/ ^、i~t~*' Y/J、
[0054] 对酶切DNA进行电泳：1%浓度琼脂糖凝胶，100ml T邸buffer中加入lOiil lOmg/ ml漠化乙锭化B)，将凝胶放置其中染色30分钟，照相。
[00对五、转膜
[0056] 1.将胶裁成9.8cm X 8.0cm大小，于平皿中用蒸馈水冲洗一次；
[0化7] 2.加入100ml 0.25mol/L的盐酸脱嚷岭，室溫振荡15min，至漠酪蓝完全变成黄色。
[005引 3.用蒸馈水冲洗2次。加入变性液（1.5mol/L化Cl、0.5mol/L NaOH)室溫振荡 30min;至漠酪蓝完全恢复到原来的蓝色。
[0059] 4.用蒸馈水冲洗2次。加入中和液（1.5111〇1/1化(：1、1.〇111〇1/1化13-(：1，抑7.4)室 溫振荡2次，每次15min;
[0060] 5.用蒸馈水冲洗2次。加入2 X SSC平衡凝胶和尼龙膜5min;
[0061 ] 6、虹吸印记法转膜26小时：
[0062] 1)在方盘上放置平板，其上放置滤纸，滤纸两端搭入盘内浸入2XSSC中，用玻璃棒 赶走滤纸和平板之间的气泡。
[0063] 2)将凝胶倒置于平台上，正面朝下，切掉右下角，并用保鲜膜封闭四周W防止吸水 纸接触凝胶的边缘从而接触平板造成液流的短路。
[0064] 3)将尼龙膜放于胶上，赶走气泡。
[0065] 4)膜上放两张滤纸，其上再放20层吸水纸。
[0066] 5)吸水纸上放一平板，其上放500g左右的重物，目的是建立液体从液池经凝胶向 尼龙膜的上行通路，W洗脱凝胶中的DNA并使其聚集到尼龙膜上。
[0067] 6)室溫下过夜转膜，持续16小时W上，期间换纸2-3次。
[0068] 7)完成转膜后，胶染色，观察转膜效果。并标记好序号、加样孔位置和对应分子量 标准的位置，尼龙膜和凝胶直接接触的一面为正面。
[0069] 8)用2XSSC漂洗尼龙膜一次，滤纸吸干，紫外交联仪下照射固定DNA(500化J/cm2) 5min〇
[0070] 六、杂交
[0071] 1)预杂交:取8.0ml 65°C预热的Hyb高效杂交液化yb-100)，加入杂交管中，排尽气 泡，65 °C杂交炉中预杂交化(8-15转/分）。
[0072] 2)探针变性:将已标记好的探针沸水浴中变性10分钟，立即放冰水浴冷却1 Omin。
[0073] 3)杂交:排尽预杂交液，在8.0ml新Hyb高效杂交液化yb-100)加入4.化1新变性好 的探针，混匀。65 °C杂交仪中杂交过夜。
[0074] 屯、洗膜、信号检测
[0075] l)杂交后室溫下，20mL2XSSC/0.1%SDS洗膜2X5min。
[0076] 2)50°C，20mL0.1 XSSC/0.1 %SDS洗涂2X 15min。（洗液需要先预热到50°C)
[0077] 3)再将膜置于20mL洗涂缓冲液中平衡2-5min。
[0078] 4)将膜在lOmL阻断液中阻断30min(在摇床上轻轻摇动）。
[0079] 5)封闭完成后倒出阻断液，加入稀释好的lOmL抗体溶液，浸膜至少30min。
[0080] 6)去除抗体溶液，用20mL洗涂缓冲液缓慢洗膜2次，每次15min。
[0081] 7)去除洗涂缓冲液，在20mL检测液中平衡膜2次，每次2min。
[0082] 8)用检测缓冲液稀释30化L NBT/BCIP化学显色底物，在约15mL新鲜制备的显色液 中反应显色，在显色过程中勿摇动。
[0083] 9)当达到所需的点或带强度后，用50ml双蒸水或TE缓冲液洗涂5min终止反应，照 相记录结果。
[0084] 本发明应用Southern印记杂交技术对沙口氏菌的检测方法进行了如下实验研究 并取得意想不到的效果。
[0085] 1.沙口氏菌特异性基因 invA的引物设计及鉴定，实验通过NCBI查阅沙口氏菌特异 基因 invA的序列，设计引物，通过聚合酶链反应(PCR反应)从去毒的沙口氏菌基因组片段质 粒(中国检验检疫科学研究院赠送)上扩增基因 invA的部分序列并测序。
[0086] invA引物序列表格 r00871
[0088] 2.初步鉴定样本的有效性，利用上述引物PCR方法检测实际样本，观察是否有特异 性条带的出现，初步对所得样本的有效性进行判断。验证结果电泳图片结果显示如图2所 /J、- 〇
[0089] 3. Southern印记实验的简单过程和图片结果，利用上述特异性引物从去毒的沙口 氏菌基因组片段质粒（中国检验检疫科学研究院赠送)上扩增沙口氏菌特异基因 invA的部 分序列，纯化产物，并用地高辛标记此片段制备杂交探针，利用DNA杂交技术使探针与所收 集样本中的特异性序列结合并显色，从而对所得样本做有效性判断。实验步骤及结果如下：
[0090] (1)测定样本模板浓度:DNA浓度用紫外分光光度计测定，核酸的光吸收值位于波 长260nm处，蛋白质则位于280nm，分别测定后，其0D260/0D280的比值应大于1.8.低于此值， 说明DNA中仍残留较多的蛋白质，此时可用酪、氯仿继续抽提纯化。若比值大于1.9表明DNA 链破坏，断裂严重，已成为小分子，因此操作应轻柔。
[0091] (2)基因组DNA酶切：限制性内切酶(RE)可裂解双链DNA，每种酶的特点是具有高度 特异性的DNA裂解点和不同电离子强度的特殊反应条件。单位(U)RE活性是在37°C1小时内 能将化g DNA所有特异性位点切断的酶用量。若用两种W上不同的内切酶，要注意RE的最适 盐浓度，要由低向高逐级添加适量盐逐个进行DNA切割。
[0092] (3)探针的制备:采用Dig-加 TP在Klenow酶的作用下，经随机引物引物PCR扩增可 渗入到新合成的DNA分子中，从而完成DNA探针的标记。
[0093] (4)转膜，将酶切好的样本基因组进行电泳，利用真空累将胶内DNA片段转印到带 有正电荷的尼龙膜上。
[0094] (5)杂交，对已标记的探针进行变性并将其混入杂交液中，将转印膜放入杂交液中 浸泡地。
[0095] (6)洗膜，用足够的2XSSC 0.5%SDS连续振荡洗涂两次，每次5分钟。
[0096] (7)信号检测，对杂交膜进行显色处理，采用图像仪曝光后观察结果。所得实验结 果见图3。
[0097] 从Southern印记杂交实验结果可见，目前的实验基础初步确定了本方法在沙口氏 菌Southern印记杂交检测中的方法具有可行性和有效性。
【主权项】
1. 沙门氏菌Southern印记杂交检测方法，其特征在于：包括以下步骤:沙门氏菌DNA获 取，探针引物的制备，基因组DNA酶切，酶切产物的电泳，转膜，杂交和洗膜、信号检测。2. 根据权利要求1所述的沙门氏菌Southern印记杂交检测方法，其特征在于:所述的探 针引物的制备为:实验通过NCBI查阅沙门氏菌特异基因 invA的序列，设计引物，通过聚合酶 链反应(PCR反应)从去毒的沙门氏菌基因组片段质粒上扩增基因 invA的部分序列并测序； 采用Dig-dUTP在Klenow酶的作用下，经随机引物引物PCR扩增可掺入到新合成的DNA分子 中，从而完成DNA探针的标记。3. 根据权利要求1或2所述的沙门氏菌Southern印记杂交检测方法，其特征在于:所述 的探针引物的具体制备方法为： 1) 探针序列：2) 探针的标记： 本探针用的是地高辛标记技术，用化学方法把类固醇类半抗原地高辛分子连接在dUTP 上(Dig-dUTP);用随机引物及DNA多聚酶，以探针DNA为模板，合成互补DNA，化学修饰过的 dUTP同时掺入到标记的DNA探针中；杂交后用碱性磷酸酶标记的抗地高辛单抗与标记探针 DNA中的Dig-dUTP结合，加入显色底物，在碱性磷酸酶作用下，转变成蓝色的化合物； 3) 探针的制备方法： 随机引物标记的DNA带有地高辛-11 -dUTP，这一标记采用的是地高辛高效引物试剂，这 是一种含有随机六碳糖，dNTP混合物的5 X浓度标记混合物，其中dNTP混合物包括碱性标记 的地高辛-11-dUTP，标记级的Klenow酶和适合的反应缓冲液;利用PCR技术扩增沙门氏菌 PLA基因的特异性片段，进行纯化并用roche试剂盒标记探针;具体步骤如下： a) 向一个反应管仲中加入lyg模板DNA和高压灭菌的双蒸水，终体积达16yL; b) 沸水浴10分钟以变性DNA，然后迅速插入冰水混合物中； c) 充分混合DIG-High Prime，并取4yL加入到变性DNA中，混合并简单离心；37°C孵育1 小时或者过夜； d) 65°C加热10分钟终止反应。4. 根据权利要求1所述的沙门氏菌Southern印记杂交检测方法，其特征在于:所述的基 因组DNA酶切条件为37°C，1小时，酶切体系如下： 组份 加量 IQxbuiTcr 4.5 jll HindU-I 内切酶 6,5 Pi 样品 DNA 25 H g ddH20 补足水至45ul，于37°C水浴中酶切20h。5. 根据权利要求1所述的沙门氏菌Southern印记杂交检测方法，其特征在于:所述的转 膜为:将酶切好的样本基因组进行电泳，利用真空栗将胶内DNA片段转印到带有正电荷的尼 龙膜上。6. 根据权利要求1所述的沙门氏菌Southern印记杂交检测方法，其特征在于:所述的杂 交为:对已标记的探针进行变性并将其混入杂交液中，将转印膜放入杂交液中浸泡4h。7. 根据权利要求1所述的沙门氏菌Southern印记杂交检测方法，其特征在于:所述的洗 膜为:用足够的2 X SSC 0.5%SDS连续振荡洗涤两次，每次5分钟。8. 根据权利要求1所述的沙门氏菌Southern印记杂交检测方法，其特征在于:所述的信 号检测为:对杂交膜进行显色处理，采用图像仪曝光后观察结果。9. 根据权利要求3所述的沙门氏菌Southern印记杂交检测方法，其特征在于:所述的基 因组DNA酶切条件为37°C，1小时，酶切体系如下： 组份 加量 l〇xbuffer 4,5jj.1 HindUI 内切酶 6.5 ￥ 1 。 样品 DNA 25 ng ddH20 补足水至45 PL，于37°C水浴中酶切20h10. 根据权利要求9所述的沙门氏菌Southern印记杂交检测方法，其特征在于:所述的 转膜为:将酶切好的样本基因组进行电泳，利用真空栗将胶内DNA片段转印到带有正电荷的 尼龙膜上。
【文档编号】C12Q1/68GK106047994SQ201610331103
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年5月18日
【发明人】靳木子, 邰大鹏, 崔强, 云华, 韩丹, 许睿星
【申请人】靳木子