专利名称：一种高效液相色谱法测定西多福韦有关物质的方法
技术领域：
本发明涉及西多福韦有关物质的分析方法，特别是一种西多福韦有关物质的高效液相色谱法测定方法。
背景技术：
西多福韦是喷啶类抗病毒药，用于治疗艾滋病。分子式为C8H14N306P*2H20，化学名为1-[(^)-3-羟基-2-(膦酰基甲氧基)丙基]-胞嘧啶二水合物，其化学结构式如下
西多福韦的主要中间体杂质有4个，其在西多福韦的合成过程中生成，对于最终产品的质量控制是非常重要的。
西多福韦酸性强，通常对于极性强的化合物，可采用特殊色谱柱，例如季铵盐柱；也可采用常用普通色谱柱，加入相应的离子对试剂。本法采用普通的色谱柱(C18色谱柱)快速准确的实现了西多福韦有关物质的测定，从而实现了西多福韦中间体杂质的控制，保证了西多福韦及其制剂的质量可控,具有现实意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种用高效液相色谱法分析测定西多福韦有关物质的方法，可用于西多福韦的制备过程和最终产品的质量控制。
本发明提供一种用高效液相色谱测定西多福韦有关物质的方法，采用了普遍常用的十八垸基硅烷键和硅胶为填料的色谱柱，以甲醇为有机相与水相的混合溶剂作为流动相。
本发明提供一种高效液相色谱测定西多福韦有关物质的方法，流动相中的有机相为甲醇，甲醇与水相的比例为30 10 : 70 90
本发明提供一种高效液相色谱测定西多福韦有关物质的方法，流动相中的有机相为甲醇，甲醇与水相的比例为15 : 85。
本发明提供一种高效液相色谱测定西多福韦有关物质的方法，所述水相为磷酸盐缓冲液，其pH范围为3 6。
本发明提供一种高效液相色谱测定西多福韦有关物质的方法，所述磷酸盐选自磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、磷酸二氢铵的一种或其混合物。
本发明提供一种高效液相色谱测定西多福韦有关物质的方法，所述水相中的阳离子对试剂为0.5% 1%四丁基氢氧化铵。
本发明提供一种高效液相色谱测定西多福韦有关物质的方法，所述磷酸盐为磷酸二氢钠。
本发明提供一种高效液相色谱测定西多福韦有关物质的方法，可按以下方法实现取西多福韦适量，用10%甲醇水溶液溶解，配制成每lml含西多福韦lmg的样品溶液，
流速为lml/min,检测波长260nm,选用C18色谱柱，柱温25'C，取样品溶液10ul，注入高
效液相色谱仪，完成西多福韦有关物质的测定。
1) 取西多福韦或含西多福韦的制剂样品适量用10%甲醇水溶液溶解或稀释样品，并配制成每lml约含西多福韦lmg的样品溶液。
2) 设置流动相流速为0.5 1.5ml/min,流动相的流速优选为lml/min;检测波长220 280nm，最佳检测波长为260nm;选用C18色谱柱；色谱柱柱温20 30°C,柱温最佳为25°C。
3) 取l)的样品溶液10 30ul,优选10ul，注入高效液相色谱仪，完成西多福韦有关物质的测定。
本发明能够有效测定西多福韦的有关物质，方法简单快捷，分析灵敏度高，结果准确可靠。可用于西多福韦及含有西多福韦的药物的质量控制。
图1西多福韦及其中间体杂质的液相色谱图
图2西多福韦原料的高效液相色谱图
图3西多福韦注射液的高效液相色谱图(辅料空白)
图4西多福韦注射液的高效液相色谱图
具体实施例方式
以下实施例用于进一步理解本发明，但不限于本实施的范围。实施例l
仪器与条件
日本岛津LC-10ATVP泵，岛津SPD-10AVP紫外可见光多波长检测器，RHEODYNE7725i进样器及TL9900色谱数据工作站，色谱柱C18 250X4.6mm， 5pm，紫外检测波长260nm，流动相磷酸盐缓冲液(0.1 mol/L磷酸二氢钠，1%四丁基氢氧化铵，用10%稀磷酸调pH为4.50) /甲醇-(80-20)
实验步骤
取西多福韦样品及其中间体杂质各约10mg，置于100ml量瓶中，加10%甲醇水溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。分别取试剂空白溶液和供试品溶液，按上述条件进行高效液相分析，记录色谱图，结果见图l。
图1中保留时间为8.250分钟的色谱峰为西多福韦的色谱峰，其余的色谱峰为西多福韦中间体杂质的色谱峰。在上述条件下西多福韦及其中间体杂质的色谱峰分离度良好，可以满足中国药典的要求。
实施例2
仪器与条件
日本岛津LC-OATVP泵，岛津SPD-10AVP紫外可见光多波长检测器，RHEODYNE7725i进样器及TL9900色谱数据工作站，色谱柱C18 250X4.6mm， 5pm，紫外检测波长260nm,流动相磷酸盐缓冲液(0.1 mol/L磷酸二氢钠，1%四丁基氢氧化铵，用10%稀磷酸调pH为4.50) /甲醇-(80-20)
实验步骤
取西多福韦约Omg，置于10ml量瓶中，加10%甲醇水溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
取供试品溶液，照上述条件进行高效液相分析，记录色谱图，结果见图2。
图2中保留时间为7.683分钟的色谱峰为西多福韦的色谱峰，其有关物质单一杂质小于0.5%，总杂质小于1.0%，结果表明西多福韦原料的有关物质达到原料药要求，本法可以用于西多福韦的质量监测。实施例3
仪器与条件
日本岛津LC-10ATVP泵，岛津SPD-10AVP紫外可见光多波长检测器，RHEODYNE7725i进样器及TL9900色谱数据工作站，色谱柱C18 250X4.6mm， 5pm，紫外检测波长260nm，流动相磷酸盐缓冲液(0.1 mol/L磷酸二氢钠，1%四丁基氢氧化铵，用10%稀磷酸调pH为4.50) /甲醇-(80-20)
实验步骤
取西多福韦注射液lml (5ml西多福韦注射液含西多福韦375mg)，置于100ml量瓶中，加10%甲醇水溶液稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取供试品溶液，照上述的条件进行高效液相分析，并同法进行辅料空白试验，结果见图3，图4。
图3证明，辅料空白不干扰测定，图4中保留时间为7.780分钟的色谱峰为西多福韦的色谱峰，其有关物质单一杂质小于0.5%，总杂质小于1.0%，结果表明西多福韦制剂的有关物质达到制剂的要求，本法可以用于西多福韦制剂的质量监测。
权利要求
1、一种用高效液相色谱分析西多福韦有关物质的方法，其特征在于以十八烷基硅烷键和硅胶为填料的色谱柱，以甲醇为有机相与水相的混合溶剂作为流动相，水相中含有阳离子对试剂。
2、 根据权利要求1所述的方法，其特征是流动相中的有机相为甲醇，甲醇与水相的比例为30 10 : 70 90
3、 根据权利要求1所述的方法，其特征是流动相中的有机相为甲醇，甲醇与水相的比例为15 : 85。
4、 根据权利要求1 3任一项所述的方法，其特征是所述水相为磷酸盐缓冲液，其pH范围为3 6。
5、 根据权利要求1所述的方法，其特征是所述水相中的阳离子对试剂为0.5%~1%的四丁基氢氧化铵。
6、 根据权利要求4所述的方法，其特征是所述磷酸盐选自磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、磷酸二氢铵的一种或其混合物。
7、 根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述磷酸盐为磷酸二氢钠。
8、 根据权利要求1 7任一项所述的方法，其特征在于取西多福韦适量，用10%甲醇水溶液溶解，配制成每lml约含西多福韦lmg的样品溶液，流速为lml/min，检测波长260nm,选用C18色谱柱，柱温25'C，取样品溶液10ul，注入高效液相色谱仪，完成西多福韦有关物质的测定。
全文摘要
本发明公开了一种西多福韦的高效液相色谱法测定方法，选用十八烷基硅烷键和硅胶为填料的色谱柱，以甲醇为有机相与水相的混合溶剂作为流动相，可用于西多福韦和含有西多福韦的药物的质量控制。
文档编号G01N30/00GK101464432SQ20071017982
公开日2009年6月24日 申请日期2007年12月19日 优先权日2007年12月19日
发明者琳 崔 申请人:北京德众万全药物技术开发有限公司