专利名称：Cathepsin D抗原多肽、应用及含有该多肽的检测试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及 一 种Cath印sin D抗原多肽，更具体地说是 一 种肿瘤标记物 Cath印sinD抗原多肽，自身抗体在制备检测肿瘤试剂盒中的应用及含有该多肽的检测试剂 盒，属于生物工程领域。
背景技术：
在我国，肺癌是第一大癌症，无论是发病率还是死亡率都位居肿瘤之首。近年来肺 癌的诊断和治疗技术有了很大进步，但是肺癌的五年生存率仍低于15%。目前人类对肿瘤 的诊断主要还是依靠影像学和病理学技术手段，患者大多在有明显占位病变和临床症状后 才得以诊断，多数患者已经到中晚期，很难得到有效的治疗。而且，现在临床上缺少对肿瘤 发展过程有效的监测指标，从而导致早期诊断困难。因此，寻找并建立肺癌早期及癌前病变 的生物标记物，并用其制备诊断试剂盒， 一直是肺癌预防和早期诊断的重要研究课题。
随着分子细胞生物学研究和生物信息学的发展，一些新的技术手段不断涌现，越 来越多组的概念的提出，肿瘤研究也进入了一个新的纪元。人们开始系统肿瘤生物学的研 究，希望实现基因、蛋白和生物代谢研究的统一，获得的大量实验研究数据将有助于人类认 识肿瘤生物学本质，并转化为肿瘤防治的有效技术手段。 蛋白质组学就是以生物的蛋白质组为研究对象，通过大规模，高通量的分析，企图 从根本上破解生命之谜。近年来，蛋白质组学技术的快速发展与应用，为肿瘤标志物的筛选 及早期诊断奠定了坚实的基础。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种特异性肿瘤标志物Cath印sin D抗原多肽及其衍生 物。 本发明的第二目的在于提供一种特异性肿瘤标志物Cath印sin D抗原多肽制备的 抗体。 本发明的再一个目的是提供该在Cath印sin D抗原多肽在制备检测肿瘤试剂盒中 的应用。 为了实现上述目的，本发明发明思路为 本发明利用蛋白质组学技术鉴定并筛选出了与肺癌发生相关的蛋白质Cath印sin D，并且根据基因序列对其进行了克隆表达，制备了抗体，进一步研究可应用于临床诊断和 研发药物的靶标。 通过双向电泳和质谱鉴定的方法，发明人在三个不同代龄的M-BE细胞条件培养 基的分泌蛋白中，发现蛋白质Cath印sin D随着代龄的增加，其在条件培养基中的含量亦增 加。M-BE细胞是正常人支气管上皮细胞转染SV40的LT抗原而得到的用生化的细胞系。其 随代龄的增加正趋于恶化，其所表现出的分泌特性可能与肺癌细胞的分泌特性相一致，即， Cath印sin D可能为肺癌细胞大量分泌。Cath印sin D已经被报道参与肿瘤的发展和转移。
3因此该蛋白在肿瘤细胞条件培养基中的分泌量的差异为进一步揭示肿瘤发展规律提供了 新的肿瘤标志物，为今后应用于临床诊断提供了重要的试验依据。 为了进一步研究Cath印sin D蛋白在肿瘤发生过程中的功能和作用，我们根 据其基因序列，克隆表达了全长Cath印sin D蛋白及其多种多肽片段，分别经镍柱纯 化。Cath印sin D全长蛋白及其各种多肽的疏水性较强，我们利用不同浓度的Sarkosyl 对Cath印sin D全长蛋白及其多肽进行变性及复性的纯化，最终获得了纯度较高的可溶 性Cath印sin D抗原蛋白采用高纯度的抗原免疫兔子，获得了高效价的多抗，经ELISA和 Western Blotting检测，证实其特异性和灵敏性。
本发明的具体技术方案 —种Cath印sin D抗原多肽，其具有序列表中SEQ ID No. 1所示氨基酸序列。 首先无血清培养基培养M-BE细胞，从该无血清培养基中提取蛋白质，提取的蛋白质经过 Bradford法定量后，采用双向电泳进行了分离。胶图分析和质谱鉴定发现了 78个代龄相关 的差异蛋白质斑点，其中的44个蛋白质斑点随着代龄的增加着色加深，34个蛋白点表现为 随代龄增加着色减弱。将这78个蛋白点切下，进行酶切消化，经MALDI-T0F和LC-MS/MS质 谱鉴定其中的一个为Cath印sin D。提取培养细胞的总mRNA，以之为模板逆转录合成cDNA 第一链。根据Cath印sin D全长序列设计引物，引物两端连入EcoR I和Xho I酶切位点
Forward :5' CCGGAATTCATGCAGCCCTCCAGCCTTCTG 3'
Reverse :5' CCGCTCGAGGAGGCGGGCAGCCTCGGCGAA 3' 以cDNA第一链为模板进行PCR反应，反应条件为95度变性，56度退火，72度延伸， MgC12浓度为2mM。 PCR产物经电泳检测后，胶内回收，EcoR I和Xho I双酶切后，与同样双 酶切的pET30a连接，化学转化感受态细胞DH5 a ，涂Kana平板筛选转化阳性菌，挑单克隆过 夜摇菌，提取质粒进行测序，验证序列无误。 上述的一种Cath印sin D抗原多肽的衍生序列，其是由SEQ ID No. 1所示氨基酸 序列经氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的氨基酸衍生序列，其氨基酸序列如SEQ ID No. 2所示。 为了进一步研究Cath印sin D在肿瘤发生发展过程中的功能，发明人克隆表达 了 Cath印sin D全长蛋白，经镍柱纯化后，获得了纯度很高(> 95% )的Cath印sinD抗 原蛋白。采用高纯度的抗原免疫兔子和小鼠，获得了高效价的多抗，经ELISA和Western Blotting检测，证实了其特异性和灵敏性。 —种能与上述Cath印sin D抗原多肽特异性结合的抗体。
Cath印sin D抗原多肽在制备检测肿瘤试剂盒中的应用。 —种检测肿瘤的试剂盒，其含有所述Cath印sin D抗原多肽特异性结合的抗体。该 试剂盒还包括(l)已包被抗原或抗体的固相载体(聚苯乙烯)；(2)酶的底物四甲基联苯 胺(3， 3， 5， 5， -TMB) ;(3)阴性对照品和阳性对照品，参考标准品和控制血清；(4)结合物及 标本的稀释液Tween-20，牛血清蛋白，磷酸盐缓冲液，pH7. 2±0. 2 ; (5)洗涤液含0. 05% 吐温20磷酸缓冲盐水；(6)酶反应终止液2mol/L硫酸。
本发明的优点及有益效果 (1)本发明Cath印sin D抗原多肽具有极强的特异性，可以作为肿瘤标志物制备 检测试剂盒，具有很好的应用前景和市场前景。
4
(2)本发明克隆了其全长并且制备了对应的抗体，兼具免疫反应的高特异性和高 敏感性；其可以制备检测肿瘤尤其是肺癌的试剂盒，检测效率高，使用方便，该试剂盒具有 较高的应用价值。 (3)在肿瘤生物学研究中，本发明表达的抗原可应用于研究蛋白质的相互作用等， 产生的抗体可应用于Western blotting,免疫荧光和免疫组化等。 (4)此外，本发明还可以作为新药研发的靶标，为抗肿瘤药物研发提供新的研究素 材。 下面结合附图和具体实施方式
对本发明做进一步说明，以使本领域技术人员可以 更清楚的得知本发明的技术方案，并非对本发明的限制。
图1为随细胞代龄的增加下调和上调的代表性差异蛋白质斑点。 图2免疫组化方法检测不同肺部组织标本中Cath印sin D的表达量。a :肺磷癌，
b :淋巴结转移的肺磷癌，C :正常支气管，d :正常肺泡。
具体实施例方式材料及试剂来源 本试验所用的M-BE细胞系是由中国医学科学院肿瘤研究所程书钧院士实验室构 建的。它是中国成人非肿瘤患者的支气管上皮细胞经原代培养后，转染病毒SV40的LT抗 原而获得的永生化的细胞系。使用添加生长因子和垂体提取物的MCDB 151培养基(无血 清)，于371:，4% (A培养箱培养。
具体步骤 实施例1Cath印sin D蛋白的制备
1. M-BE细胞的无血清培养 三个代龄(P40、 P140和P200)的M-BE细胞，用添加有生长因子和垂体提取物的 MCDB 151培养基(无血清)，于37。C，4X 0)2培养箱培养。细胞密度达到80 %时，用PBS 清洗细胞三次后，更换无生长因子和垂体提取物的MCDB 151条件培养基，继续在371:，4% (A培养箱培养。48h后，收集条件培养基，并于4t:，1000g离心10min，去除细胞碎片；细胞 经PBS洗涤三次后，进行蛋白质的提取。
2.无血清培养基中的蛋白质提取 收集的条件培养基利用3500Da的透析膜，于NaCl浓度梯度溶液中进行透析，透析 液浓度和时间分别为100mM 2h ;50mM 4h ;25mM 8h ;10mM 10h ;OmM 24h。透析后的培养基 于-8(TC冰箱冷冻后，用Maxi-dry Lyo浓縮系统真空冻干。干粉随后用裂解液(8M urea， 4% CHAPS，O. 5% Ampholyte (pH 3. 5-9. 5) ， 2mM EDTA， lmMPMSF， 10mM DTT)溶解。
3.蛋白质的分离 提取的蛋白质经过Bradford法定量后，采用双向电泳(2-DE)进行了分离。 一相 采用的是18cm PH 3-10NL胶条，聚焦设置为无电压泡涨4小时，50伏8小时，之后依次500 伏、1000伏和8000伏各一个小时，最后保持8000伏直至总伏小时数达56， 000伏小时。聚 焦好的一相胶条经分别含有二硫苏糖醇(DTT)和碘代乙酰胺(IAA)的平衡液平衡15分钟后，转移至二相13% SDS-PAGE进行分离。电泳结束后采用银染显色。 为了得到可靠的2-DE结果用于胶图的进一步分析，我们对每个代龄的M-BE细胞 的条件培养基分两次收集，分别进行蛋白质的提取；对于每次提取的蛋白质用两块平行胶 进行2-DE分离。这样，每个代龄M-BE细胞条件培养基中的蛋白质就有四块相对应的胶图。
4.胶图分析和质谱鉴定 银染的胶图经扫描仪扫描后，采用ImageMaster 2D Platinum分析软件进行了分 析，设定3倍以上的光密度差异为阈值。为了得到可信的差异分析结果，首先比较P40与 P200胶图，找到具有显著差异的点，然后检查P140胶图上对应的位置上是否有该点的存 在。图l显示了随细胞代龄的增加下调和上调的代表性差异蛋白质斑点。如图IA所示，在 P40胶图上的有着色很深的斑点a，而P200胶图没有该斑点，P140图上存在该点，说明a点 的蛋白随细胞代龄的增加而分泌量下降；而图lB中的b点在三个代龄的胶图上的着色逐渐 加深，表明其随细胞代龄的增加分泌量增加。 共发现了 78个代龄相关的差异蛋白质斑点，其中的44个蛋白质斑点随着代龄的 增加着色加深，34个蛋白点表现为随代龄增加着色减弱。将这78个蛋白点切下，进行酶切消化，经MALDI-TOF/TOF和LC-MS/MS质谱鉴定其
中的一个为Cath印sin D。 5、Cath印sin D全长蛋白的克隆 提取培养细胞的总mRNA，以之为模板逆转录合成cDNA第一链。根据Cath印sin D 全长序列设计引物，引物两端连入EcoR I和Xho I酶切位点
Forward :5' CCGGAATTCATGCAGCCCTCCAGCCTTCTG 3'
Reverse :5' CCGCTCGAGGAGGCGGGCAGCCTCGGCGAA 3' 以cDNA第一链为模板进行PCR反应，反应条件为95度变性，56度退火，72度延伸， MgC12浓度为2mM。 PCR产物经电泳检测后，胶内回收，EcoR I和Xho I双酶切后，与同样双 酶切的pET30a连接，化学转化感受态细胞DH5 a ，涂Kana平板筛选转化阳性菌，挑单克隆过 夜摇菌，提取质粒进行测序，验证序列无误。
6. Cath印sin D蛋白诱导表达及纯化 从测序正确的阳性菌中提取pET30a-Cath印sin D质粒，转化BL21感受态细胞， 涂Kana平板筛选转化阳性菌，挑单克隆过夜摇菌，次日扩大培养至0D读数为0. 6_0. 8时， lmmol/L IPTG诱导表达。诱导以后的菌株经超声后离心，上清和沉淀分别进行SDS-PAGE电 泳，结果显示表达的产物为不溶性蛋白。 大量摇菌后进行诱导表达，Cath印sin D全长蛋白及其各种多肽的疏水性较强，我 们利用不同浓度的Sarkosyl对Cath印sin D全长蛋白及其多肽进行变性及复性的纯化， 最终获得了纯度较高的可溶性Cath印sin D抗原蛋白。提取可溶的蛋白过镍柱进行纯化， lOOmM咪唑洗脱，SDS-PAGE电泳，切取条带进行MALDI-TOF鉴定，证实表达产物为Cath印sin D。 实施例2Cath印sin D抗原多肽多克隆抗体制备 经镍柱纯化的全长Cath印sin D抗原由PBS充分透析后，浓縮至浓度为1. Omg/ml 。 l.Omg抗原浓縮液和等体积的完全福氏佐剂混和均匀，充分乳化后于新西兰白兔背部皮下 多点注射。初次免疫前从兔腿静脉取血分离血清，作为免疫前血清对照；两周后进行首次加强免疫，将500 g的抗原浓縮液和等体积的不完全福氏佐剂混和均匀，充分乳化后于新
西兰白兔背部皮下多点注射。之后，每隔2周加强免疫一次，并于第二次加强免疫后7天从
兔腿静脉取血，用ELISA法测定抗体效价。第四次加强免疫后第7天颈动脉放血，室温放置
4-5小时后，4t: 3000rpm离心5分钟，收集上清，分装后于-8(TC冻存待用。 免疫后血清使用protein A进行Ig G的纯化，获得了抗Cath印sin D的抗体。我
们采用ELISA和Western blotting两种方法来验证抗体的特异性和灵敏度。 ELISA实验证明，该抗体的滴度为1 : 10000，背景值很低。Western blotting结
果显示，该抗体能特异的和抗原反应，交叉反应很弱。 实施例3Cath印sin D特异性抗体制备试剂盒成分 抗体试剂盒的制备基本步骤如下 (1)选择合适的聚苯乙烯ELISA板，保证单孔的吸光值和96孔吸光值的平均值之 间的差值在10%以内； (2)用微量点样仪在每孔中包被标记了辣根过氧化物酶的抗Cath印sin D的抗体
(100ng/ml);抗体(100ng/ml); (3)用0. 5%的牛血清白蛋白进行封闭； (4)对板材和包被的抗体进行干燥处理和真空包装。 实施例4Cath印sin D特异性抗体用于肺癌生物学行为的判断 我们采用Tissue micro-array (TMA)的方法，分析了 346例石蜡包埋的组织样本，
包括178例淋巴结转移(LNM)的肺鳞癌(SCC)标本、128例没有LNM的SCC标本、40例正常
的肺泡和支气管标本。如图2所示，利用免疫组化方法检测不同肺部组织标本中Cath印sin
D的表达量。A :肺磷癌，B :淋巴结转移的肺磷癌，C :正常支气管，D :正常肺泡。经过统计
学计算，发现Cath印sin D在306例SCC标本中的阳性着色率为87. 9% ，显著的高于正常 支气管和肺泡的阳性着色率(分别为42. 1%和14. 3%， p < 0. 001)。而且，Cath印sin D 在肺鳞癌标本中的着色率与肺鳞癌的分期正相关，I期、II期、III期和IV期肿瘤组织中 Cath印sin D着色率分别为80. 4%、89. 7%、90. 6%和100%。 我们选用Cath印sin D的单克隆和多克隆抗体，对155例血桨样本进行了 sandwich ELISA检测。在104例SCC血桨中，Cath印sin D的中位浓度为93. 12ng/ml，而 36例正常人、15例非肿瘤的肺部疾患血浆中Cath印sin D的中位浓度分别为63. 87ng/ml 和79. 46ng/ml。通过Kruskal-Walls test统计学分析，SCC血桨中Cath印sin D的浓度显 著高于其他两类(P《0. 015)。然而，Cath印sin D在正常人与非肿瘤的肺部疾患人血浆 中的浓度是可比的，没有显著差异(p = 0.812)。如果将肺癌患者的血浆根据有无LNM转 移非为两类，发现65例LNM患者的血浆中Cath印sin D的浓度亦显著高于无LNM的患者 (p《0. 038)。 通过此筛查表明Cath印sin D在肺癌组织及患者血清中的高含量均表明其可以 作为肺癌的生物标志物，可以用于指示肺癌的发生；更重要的是Cath印sin D在淋巴结转 移的肺鳞癌中的高表达，表明其可以用来指示肺癌的淋巴结转移。因此，利用Cath印sin D 抗原多肽在制备的检测肿瘤试剂盒，具有很好的特异性。
序列表 〈110〉中国科学院北京基因组研究所
〈120〉Cath印sin D抗原多肽、自身抗体在制备检测肿瘤试剂盒中的应用及含有该 多肽的检测试剂盒
0070]〈130〉
0071]〈160>2
0072]〈170>PatentIn version 3.5
0073]〈210>1
0074]〈211>412
0075]〈212>PRT
0076]〈213〉人工序列
0077]〈400>1
0078]MetGinProSerSerLeuLeuProLeuAlaLeuCysLeuLeuAlaAla
0079]151015
0080]ProAlaSerAlaLeuValArglieProLeuHisLysPheThrSerlie
0081]202530
0082]ArgArgThrMetSerGluValGlyGlySerValGluAspLeulieAla
0083]354045
0084]LysGlyProValSerLysTyrSerGinAlaValProAlaValThrGlu
0085]505560
0086]GlyProlieProGluValLeuLysAsnTyrMetAspAlaGinTyrTyr
0087]65707580
0088]GlyGlulieGlylieGlyThrProProGinCysPheThrValValPhe
0089]859095
0090]AspThrGlySerSerAsnLeuTrpValProSerlieHisCysLysLeu
0091]100105110
0092]LeuAsplieAlaCysTrplieHisHisLysTyrAsnSerAspLysSer
0093]115120125
0094]SerThrTyrValLysAsnGlyThrSerPheAsplieHisTyrGlySer
0095]130135140
0096]GlySerLeuSerGlyTyrLeuSerGinAspThrValSerValProCys
0097]145150155160
0098]GinSerAlaSerSerAlaSerAlaLeuGlyGlyValLysValGluArg
0099]165170175
0100]GinValPheGlyGluAlaThrLysGinProGlylieThrPhelieAla
0101]180185190
0102]AlaLysPheAspGlylieLeuGlyMetAlaTyrProArglieSerVal
0103]195200205
0104]AsnAsnValLeuProValPheAspAsnLeuMetGinGinLysLeuVal
0105]210215220
0106]AspGinAsnliePheSerPheTyrLeuSerArgAspProAspAlaGin
8
225230235240ProGlyGly GluLeuMetLeuGlyGlyThrAspSerLysTyr TyrLys245250255 [o川]GlySerLeuSer 260TyrLeuAsnValThr 265ArgLysAlaTyrTrp Gin 270ValHisLeuAsp GinValGluValAlaSerGlyLeuThrLeuCys LysGlu275280285GlyCysGluAlalieValAspThrGlyThrSerLeuMetVal GlyPro290295300ValAspGluValArgGluLeuGinLysAlalieGlyAlaVal ProLeu305310315320lieGinGly GluTyrMetlieProCysGluLysValSerThr LeuPro325330335AlalieThrLeuLysLeuGlyGlyLysGlyTyrLysLeuSer ProGlu340345350AspTyrThrLeuLysValSerGinAlaGlyLysThrLeuCys LeuSer355360365GlyPheMet GlyMetAsplieProProProSerGlyProLeu Trplie370375380LeuGlyAsp ValPhelieGlyArgTyrTyrThrValPheAsp ArgAsp385390395400AsnAsnArgValGlyPheAlaGluAlaAlaArgLeu405410〈210>2〈211>348〈212>PRT〈213〉人工序列〈400>2GlyProlieProGluValLeuLysAsnTyrMetAspAlaGin TyrTyr151015GlyGlulieGlylieGlyThrProProGinCysPheThrVal ValPhe202530AspThrGlySerSerAsnLeuTrpValProSerlieHisCys LysLeu354045LeuAsplieAlaCysTrplieHisHisLysTyrAsnSerAsp LysSer505560SerThrTyrValLysAsnGlyThrSerPheAsplieHisTyr GlySer65707580GlySerLeuSerGlyTyrLeuSerGinAspThrValSerVal ProCys
90146]859095
0147]GinSerAlaSerSerAlaSerAlaLeu GlyGlyValLysVal GluArg
0148]100105110
0149]GinValPheGlyGluAlaThrLysGinProGlylieThrPhe lieAla
0150]115120125
0151]AlaLysPheAspGlylieLeuGlyMetAlaTyrProArglie SerVal
0152]130135140
0153]AsnAsnValLeuProValPheAspAsnLeuMetGinGinLys LeuVal
0154]145150155160
0155]AspGinAsnliePheSerPheTyrLeuSerArgAspProAsp AlaGin
0156]165170175
0157]ProGlyGlyGluLeuMetLeuGlyGlyThrAspSerLysTyr TyrLys
0158]180185190
0159]GlySerLeuSerTyrLeuAsnValThrArgLysAlaTyrTrp GinVal
0160]195200205
0161]HisLeuAspGinValGluValAlaSerGlyLeuThrLeuCys LysGlu
0162]210215220
0163]GlyCysGluAlalieValAspThrGlyThrSerLeuMetVal GlyPro
0164]225230235240
0165]ValAspGluValArgGluLeuGinLysAlalieGlyAlaVal ProLeu
0166]245250255
0167]lieGinGlyGluTyrMetlieProCysGluLysValSerThr LeuPro
0168]260265270
0169]AlalieThrLeuLysLeuGlyGlyLysGlyTyrLysLeuSer ProGlu
0170]275280285
0171]AspTyrThrLeuLysValSerGinAlaGlyLysThrLeuCys LeuSer
0172]290295300
0173]GlyPheMetGlyMetAsplieProProProSerGlyProLeu Trplie
0174]305310315320
0175]LeuGlyAspValPhelieGlyArgTyrTyrThrValPheAsp ArgAsp
0176]325330335
0177]AsnAsnArgValGlyPheAlaGluAlaAlaArgLeu
0178]34034权利要求
一种Cathepsin D抗原多肽，其特征在于，其具有序列表中SEQ ID No.1所示的氨基酸序列。
2. 根据权利要求l所述的一种Cath印sin D抗原多肽，其特征在于，其是由SEQID No. 1 所示氨基酸序列经氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的氨基酸衍生序列。
3. 根据权利要求2所述的一种Cath印sin D抗原多肽，其特征在于，Cath印sin D抗原 多肽衍生序列的氨基酸序列为SEQ ID No. 2。
4. 一种能与权利要求l至3中任意一项所述的Cath印sin D抗原多肽特异性结合的抗体。
5. Cath印sin D抗原多肽在制备检测肿瘤试剂盒中的应用。
6. —种检测肿瘤的试剂盒，其特征在于，其含有权利要求4所述的Cath印sin D抗原多肽特异性结合的抗体。
7. 根据权利要求6所述的一种检测肿瘤的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括(1)已 包被Cath印sin D抗原或抗体的固相载体；(2)酶的底物四甲基联苯胺(3， 3， 5， 5，-TMB);(3)阴性对照品和阳性对照品，参考标准品和控制血清；(4)结合物及标本的稀释液Tween-20，牛血清蛋白，磷酸盐缓冲液，pH 7. 2±0. 2 ; (5)洗涤液含0. 05%吐温20磷酸缓 冲盐水；(6)酶反应终止液2mol/L硫酸。
8. 根据权利要求5、6或7所述的检测肿瘤试剂盒，其特征在于，所述肿瘤为肺癌。
9. 一种含有Cath印sin D抗体的试剂盒作为检测肺癌淋巴结转移的用途。
10. Cath印sin D抗原多肽作为治疗肿瘤药物的靶标的应用。
全文摘要
本发明提供了一种肿瘤标志物Cathepsin D抗原多肽，其具有序列表中SEQ IDNo.1所示氨基酸序列。本发明还公开了用其基因克隆表达该蛋白，制备该蛋白的特异性抗体，并且进行胃癌生物学行为判断的方法。由本方法制备的Cathepsin D抗原多肽及其抗体可用于制备检测肿瘤试剂盒的应用以及药物靶标的研发。
文档编号G01N33/574GK101735317SQ20081022725
公开日2010年6月16日 申请日期2008年11月25日 优先权日2008年11月25日
发明者刘斯奇, 吕有勇, 娄晓敏, 张军, 张聚, 徐宁志 申请人:中国科学院北京基因组研究所