肠道病毒71型的vp2抗原的中和表位多肽及其用图
【专利说明】
[0001] 本发明是申请号为201310291205. 5的母案的分案申请，该母案的申请日为2013 年7月12日，公开号为CN103539839A，优先权日为2012年7月13日，发明名称为"肠道病 毒71型的VP2抗原的中和表位多肽及其用途"。
技术领域
[0002] 本发明属于免疫生物学领域，涉及一种肠道病毒71型的VP2抗原的中和表位多肽 及其用途。
【背景技术】
[0003] 手足口病是全球性传染病，世界大部分地区均有此病流行的报道。早期发现的手 足口病的病原体主要为柯萨奇病毒A16型（以下简称CA16)，肠道病毒71型（以下简称 EV71)最早是在1969年首次从美国加利福尼亚患有中枢神经系统疾病的婴儿粪便标本中 分离获得，但一直到1974年EV71才被鉴定并命名。此后EV71与CA16交替出现，成为手足 口病的主要病原体。
[0004] EV71传染性强，易引起暴发或流行。自病毒发现以来在全世界已至少造成十多次 爆发流行，波及到美洲、欧洲、澳洲和亚洲的四十多个国家和地区。20世纪70年代中期，保 加利亚、匈牙利相继暴发以中枢神经系统为主要临床特征的EV71流行，1975年保加利亚报 告病例750例，其中149人致瘫，44人死亡。20世纪90年代后期，EV71开始东亚地区流行。 1997年马来西亚发生了主要由EV71引起的手足口病流行，4 一 8月共有2628人发病，4 一 6月有29例病人死亡。1998年，我国台湾地区发生EV71感染引起的手足口病和疱瘆性咽 峡炎流行，监测哨点共报告129 106例病例，80%有手足口病和中枢神经症状。其中重症病 人405例，死亡78例。
[0005] 我国大陆地区自1995年武汉病毒研宄所首次从手足口病人中分尚出EV71病毒以 来，全国很多地区均有报道。2008年3月在安徽阜阳地区流行的也是EV71。由于疫情的严 重性和社会的广泛关注，卫生部已经将手足口病列入传染病防治法规定的丙类传染病，并 紧急成立了防控组。
[0006] EV71病毒颗粒大致呈球形，为正二十面体结构，无包膜和突起，直径约27nm，其蛋 白外壳由结构蛋白VP1、VP2、VP3和VP4构成，抗原决定因子基本上位于暴露在病毒颗粒表 面的VP1、VP2、VP3上，VP4序列高度保守，包裹在衣壳内部。
[0007] 近年来，EV71引起的手足口病，发病率和死亡率呈逐年上升趋势，因此，开发针对 手足口病的快速诊断试剂与安全有效的预防和治疗性药物（例如疫苗）具有重大意义。
【发明内容】
[0008] 本发明人经过了深入的研宄和创造性的劳动，例如利用不同时间、不同地点分离 到的EV71不同的代表株免疫小鼠，进行单克隆抗体的制备，已制备出790株杂交瘤细胞 株，其均能够产生对EV71有特异性反应的单抗（单克隆抗体）。本发明人进一步利用基于 ELISPOT的EV71高通量中和实验方法对上述单抗的中和活性进行鉴定，发现有2株单抗对 部分目前所用的EV71各代表株均有中和活性，说明EV71病毒可能存在高保守性的中和位 点，这为EV71的中和表位鉴定提供了突破口，具有制备抗EV71抗体或疫苗的潜力。由此提 供了下述发明：
[0009] 本发明的一个方面涉及一种多肽，其氨基酸序列如下面的SEQIDNO:1 - 8中任 一序列所示：
【主权项】
1. 一种杂交瘤细胞株BB1A5,其保藏编号为CCTCCNO:C201228,保藏日期为2012年2 月20日，保藏单位为中国典型培养物保藏中心（CCTCC)。
2. 权利要求1所述的杂交瘤细胞株产生的抗体。
3. -种抗体偶联物，包括抗体部分和偶联部分，其中，所述抗体部分为权利要求2所述 的抗体，所述偶联部分为选自放射性核素、药物、毒素、细胞因子、酶、荧光素、载体蛋白、月旨 类、和生物素中的一种或多种。
4. 一种药物组合物，其包含权利要求2所述的抗体或者权利要求3所述的抗体偶联物； 可选地，所述药物组合物还包含药学上可接受的载体或辅料。
5. -种试剂盒，其包含权利要求2所述的抗体或者权利要求3所述的抗体偶联物。
6. 权利要求2所述的抗体或者权利要求3所述的抗体偶联物或者权利要求4所述的药 物组合物在制备治疗和/或预防和/或诊断EV71所致疾病特别是手足口病的药物或者抗 EV71病毒的药物中的用途。
7. -种在体内或体外抗EV71病毒的方法，包括使用有效量的权利要求2所述的抗体或 者权利要求3所述的抗体偶联物或者权利要求4所述的药物组合物的步骤。
【专利摘要】本发明属于免疫生物学领域，涉及一种肠道病毒71型的VP2抗原的中和表位多肽及其用途。具体地，涉及一种抗原表位多肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1－7中任一序列所示。本发明还涉及所述中和表位多肽在制备治疗和/或预防和/或诊断手足口病的药物中的用途。本发明的中和表位多肽具有良好的中和活性和免疫原性，具有应用于治疗和/或预防和/或诊断手足口病的药物的潜力。CCTCC NO:C20122620120220 CCTCC NO:C20122820120220
【IPC分类】A61P31-14, A61K39-42, G01N33-569, C07K16-10, C12N5-20, A61K39-44, G01N33-577
【公开号】CN104694479
【申请号】CN201510106427
【发明人】程通, 徐龙发, 杨立生, 陈毅歆, 杜海莲, 张军, 夏宁邵
【申请人】厦门大学, 厦门万泰沧海生物技术有限公司
【公开日】2015年6月10日
【申请日】2013年7月12日
【公告号】CN103539839A