组织保护活性多肽及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明公布了一系列用于治疗奶牛乳腺炎的多肽。本发明多肽可作为一种饲料添加剂。本发明多肽喂饲奶牛，对奶牛乳腺炎症，具有良好的治愈和预防作用。
【专利说明】组织保护活性多肽及其应用
【技术领域】
[0001]本发明属于生物【技术领域】，具体地说，本发明涉及一组织保护活性多肽。
【背景技术】
[0002]奶牛乳腺炎是当前危害奶牛业发展，制约奶牛生产的一种重要疾病，值得奶牛生产者及畜牧工作者的高度重视和关注。发病情况及发病率的发生已成为一个世界性的问题。我国奶牛的发生更高，中国农业科学院兰州中研究所对我国西北、华北、东北、中南、西南地区22个城市32个奶牛场的10371头成年泌乳牛进行了调查，临床型平均发病率为33.41% (9.7%~55.6% )，并对其中5个地区20个奶牛场的3384头泌乳期奶牛进行了隐性检查。结果表明隐性头平均阳性检出率73.91% (62.07%~93.95% )，乳区平均阳性检出率为44.74% (35.29%~72.81% )，两类的发病率均高于国外报道。
[0003]目前国内外对牛乳腺炎的治疗主要是抗生素和疫苗，但抗生素在治疗牛乳腺炎症中存在诸多不利的因素。
[0004]现有技术中，ZL201110235105.1提供了一种对牛乳腺炎具有治疗作用的蛋白，为了提高蛋白的活性，针对蛋白的活性位点进行特异性的突变和取代，从而寻找活性更高的变体是常规的做法。为了进一步提高该蛋白的生物活性， 申请人:通过大量的实验，针对该申请的蛋白氨基酸序列中特定的位点进行了点突变，从而获得了一系列比该多肽本身具有更高生物学活性的治疗牛乳腺炎的多肽。
[0005]发明详述
[0006]本发明涉及的多肽，具有下列结构:
[0007](SLl):Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Asp Asp Ala Leu Gly Val ；
[0008](SL2):Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Asp Asp Ala Leu Gly Val ；
[0009](SL3):Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Asp Asp Ala Leu Gly ValSer ；
[0010](SL4):Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Asp Asp Ala Leu Gly ValPro ；
[0011](SL5):Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Ser Asp Ala Leu Gly ValPro ；
[0012](SL6):Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Ser Asp Ala Leu Gly Val ；
[0013](SL7):Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Ser Asp Ala Leu Gly Val ；
[0014](SL8):Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Ser Asp Ala Leu Gly Val ；
[0015](SL9):Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro He Asp Ala Leu Gly ValSer ；
[0016](SLlO):Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys He Pro He Asp Ala Leu Gly ValSer ；
[0017] (SLll):Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys He Pro He Asp Ala Leu Gly Val ；
[0018](SL12):Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys He Pro Ser Asp Ala Leu Gly Val Ser ；
[0019](SL13):Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys He Pro Ser Asp Ala Leu Gly ValSer Ser ；
[0020](SL14):1le Glu Pro Ser Pro Gly Lys He Pro Ser Asp Ala Leu Gly Val SerSer ；
[0021]对照1:Leu Glu Pro Pro Pro Gly Lys Pro Ala Asp Asp Ala Leu Gly Val ；
[0022]对照2:Leu Glu Pro Pro Pro Gly Lys Pro Ser Asp Asp Ala Leu Gly Val。
[0023]本发明的多肽合成后，可以做成游离态形式，也可以做成阳离子盐，如:TFA盐(三氟乙酸盐)，HCl盐(盐酸盐)，醋酸盐形式。
[0024]采用本发明多肽配制奶牛饲料添加剂具有对于奶牛乳腺的保护作用和对乳腺炎的治疗，预防作用。
[0025]本发明的多肽，可以选择和一种或多种药物载体组合，制成多种药物剂型，用于治疗。这些药物剂型涵盖:注射溶液、片剂、霜剂、胶囊、软膏、洗剂、舌含片等剂型局部或全身给药。剂量优选在10-5~10-2mg/kg体重的范围内，以0.1% -0.5%的较高浓度全身或局部给药。对于具体治疗的最佳剂量的确定是本领域技术人员熟知的。
【具体实施方式】
[0026]实施例1:多肽的化学合成及稳定性和毒性试验:
[0027]采用本领域常用的Fmoc固相法化学合成SL1-SL14以及对照I和对照2所述的多肽。
[0028]将本发明多肽于40°C保温76天和120天测试其稳定性。稳定性试验采用HPLC方法进行测定。水溶液中多肽的浓度为0.2% (w/v):柱，Kromasil100，5u，250x4.6mm;流动相，0.1 %三氟乙酸的水/乙睛溶液(O至50vol.%)，在25分钟内梯度洗脱，流速lml/min ；检测:UV，218nm。通过检测可以表明，本发明多肽稳定性非常高。其溶液在40度，120天后依然具有98%以上的目标物质。对照肽I和2也在120天后分别具有96%和90%的目标物质
[0029]采用小鼠灌胃和注射方式测定本发明多肽的急性毒性。溶液配制:
[0030]米用本发明多肽25晕克,加灭菌水至20毫升，配置成浓度为1.25晕克/毫升的溶液，供口服灌胃。
[0031]米用本发明多肽25晕克,加灭菌水至10毫升,配置成浓度为2.5晕克/毫升的溶液，供腹腔注射用。给药剂量计算:
[0032]小鼠口服灌胃给药体积为40毫升/公斤体重，故给药剂量为:
[0033]1.25mg/ml*40mi/kg = 50m/kg。
[0034]小鼠腹腔注射给药体积为20毫升/公斤体重，故给药剂量为:
[0035]2.5mg/ml*20ml/kg = 50mg/kg。
[0036]取健康小鼠80只，分四组实验。给药后，在第7天和14天，观察，称重。并于实验结束后称重，处死，解剖观察内部器官。
[0037]结论:
[0038]1、小鼠一日一次口服灌胃给药，给药剂量50毫克/公斤体重，未见明显急性毒性反应。LD50 > 50mg/kg。
[0039]2、小鼠一日一次腹腔注射给药，给药剂量50毫克/公斤体重，未见明显急性毒性反应。LD50 > 50mg/kg。
[0040]由上所述，本发明多肽在50毫克每公斤体重剂量下未见明显急性毒性表现。对照肽同样也未见明显急性毒性表现。
[0041]实施例2
[0042]含本发明多肽的饲料添加剂的制备。
[0043]配方如下:
[0044]
【权利要求】
1.一种多肽，其特征是，该多肽的氨基酸序列如SEQ ID N0.1-15所示。
2.一种药物制剂，其特征是，权利要求1记载的多肽，选择与一种或多种药物载体组合，制成多种药物剂型，所述药物剂型涵盖:注射溶液、片剂、霜剂、胶囊、软膏、洗剂、舌含片等剂型局部或全身给药。
3.—种饲料，其特征是，权利要求1或2记载的多肽或药物制剂，添加入饲料或以饲料添加剂等各种方式制备的饲料。
4.权利要求1或2记载的多肽或药物制剂或饲料在制备用于组织炎症的治疗的药物中的应用。
5.权利要求1、2或3记载的多肽、药物制剂或饲料在制备用于治疗奶牛乳腺炎的药物中 的应用。
【文档编号】C07K7/08GK104072588SQ201410292482
【公开日】2014年10月1日 申请日期:2014年6月22日 优先权日:2014年6月22日
【发明者】马恒标 申请人:马恒标