专利名称：三聚氰胺快速检测试纸的制作方法
技术领域：
本实用新型属于检测技术领域，具体涉及一种三聚氰胺快速检测 试纸，可应用于乳品或饲料中三聚氰胺的快速检测。
背景技术：
三聚氰胺是制造三聚氰胺-甲醛树脂(密胺塑料)的原料，三聚氰 胺-甲醛树脂也俗称三聚氰胺。三聚氰胺常应用于制造日用器皿、装饰 贴面板、织物整理剂等，例如，生活中常见的被称为"美耐皿(又称 密胺碗)"的塑料碗碟就是三聚氰胺-甲醛树脂(即密胺塑料)的一个典 型应用，这类器皿的物理性质非常类似陶瓷，坚硬不变形但又不像陶 瓷那样易碎，但因为三聚氰胺-甲醛树脂(即密胺塑料)受热后有可能 散发毒性，这些器皿常常标有"不可以在微波炉中使用"的警示。
三聚氰胺的应用非常广泛，例如还可以与乙醚配合作纸张处理剂， 在一些涂料中用作交联剂，以及阻燃化学处理剂等。
食品工业中常常需要测定食品的蛋白质含量，由于直接测量蛋白 质技术上比较复杂，所以常用一种叫做凯氏定氮法的方法，通过测定 氮原子的含量来间接推算食品中蛋白质的含量。由于三聚氰胺与蛋白 质相比含有更多的氮原子，被一些不法分子添加于食品、饲料中用于 蛋白质含量方面的造假，也因此造成重大食品安全事故，尤其是在婴 儿奶粉或其他食品的三聚氰胺的检测，目前尚未见类似产品，没有县 官检测产品为婴幼儿奶粉的安全提供快捷的检查保障。加强对日常使用的器皿、食品、词料中三聚氰胺的残留含量的检 测监控问题已经十分迫切地摆在我们的面前。
目前，我国相应的三聚氰胺检测技术并不很完备，对三聚氰胺残
留的检测目前主要采用高效液相色谱法(HPLC)。应用HPLC方法检
测三聚氰胺残留时，样品前处理步骤非常繁琐，测定方法相当复杂， 需受过专门训练的人员才能操作，并且检测通量很小，耗时，非常不 适应当前生产形势的需要，很有必要研制更加简单快捷方便的三聚氰 胺检测技术和产品。
实用新型内容
本实用新型的目的在于克服现有技术的不足，提供一种三聚氰胺 检测试纸，可以实现简便、快速地检测食品和饲料中的三聚氰胺残留。
本实用新型的技术方案是 提供一种三聚氰胺免疫检测试纸，包括底板、样品垫、金垫和检
测膜；所述样品垫、金垫、检测膜和吸水垫依次粘贴在底板上；所述 检测膜表面设置有包被有三聚氰胺抗体和抗三聚氰胺抗体的抗体区 域，所述区域为并列设置于检测膜上，分别形成检测线和质控线(参 考线)。所述抗三聚氰胺抗体的抗体为羊抗鼠IgG。
所述底板采用不吸水的塑料板， 一面涂有不干胶，底板起固定支 持试纸其他组成部分的作用。 样品垫采用滤纸或玻璃纤维纸，所述玻璃纤维纸浸入0. lmol/L 、 pH 7.4 8.0的Tris-HCl中2 5min，取出80。C烘干或真空干燥或其他 方式即得。所述金垫为浸入金标三聚氰胺抗体液中处理过的玻璃纤维纸或 滤纸。
作为优选，上述检测膜一面粘贴有金膜，另一面上可以粘贴有吸 水垫。所述吸水垫优选玻璃纤维纸、滤纸或吸水纸。
本实用新型的组装在底板上依次粘贴样品垫1、金垫2、检测
膜3和吸水垫6，即成三聚氰胺半定量检测试纸。
检测原理如果样品中含有三聚氰胺，样品溶液从样品垫1上移 到达金垫2，样品溶液中的三聚氰胺与胶体金标记的三聚氰胺抗体反应 形成结合物，结合物继续上移到检测线4;因胶体金标记的三聚氰胺抗 体只有一个结合位点，样品溶液中的三聚氰胺与之结合后，检测线上 的检测用抗原就不能再与胶体金标记的三聚氰胺抗体结合，于是检测 线无色；当样品中没有三聚氰胺时，胶体金标记的三聚氰胺抗体到达
检测线时被检测用抗原捕获，则形成肉眼可见红色。无论样品中是否 含有三聚氰胺，质控线都会出现红色。因此，如果样品中含有三聚氰
胺，检测膜上只有一条红线；当样品中没有三聚氰胺时，检测膜上有 两条红线。
本实用新型的积极效果
① 特异性强。本实用新型试纸特异性极强，与其它药物基本没有 交叉反应，避免了其它药物对检测的干扰；
② 灵敏度高。本实用新型试纸最低检测下限为lWg/kg;
③ 操作简单方便。对牛奶、样品简单处理后即可检测。本试纸不 需任何专业培训，不需任何仪器设备，普通非专业人员都可操作，只要将试纸插入检测液中，用肉眼即可判读；⑤速度快，通量大，颜色稳定。试纸插入样液中，3min以后便可 观察结果， 一个人可以同时、连续检测，检测通量远远高于HPLC法， 比三聚氰胺ELISA试剂盒检测速度则快40 160倍以上，并且其检测 显出的颜色可永久保存，而不会象ELISA底物那样很快就变色。
图1本实用新型的结构示意图具体实施方式
以下结合附图和具体实施例来进一步详细说明本实用新型。 实施例1本实用新型的制备和结构如附图l所示，本实用新型提供了一种三聚氰胺免疫检测试纸， 包括底板、样品垫l、金垫2和检测膜3;所述样品垫l、金垫2和检 测膜3依次粘贴在底板上；所述检测膜3上表面并列包被有检测线4 和质控线5。在检测膜3上还可以粘贴有吸水垫6。本实用新型所描述的试纸的各部分的功能与制备方法描述如下底板为一面涂有不干胶的不吸水的塑料板，起固定支持试纸其他组成部分的作用。样品垫1:将玻璃纤维纸浸入pH7.4 8.0的Tris-HCl中5min，取出，真空干燥，即得样品垫l。样品垫l在检测时起吸收样品溶液的作 用，样品溶液通过样品垫l形成向上移动。金垫2:起固定胶体金标记的抗体的作用。金垫2的制备和处理包括胶体金溶胶制备、胶体金标三聚氰胺抗 体和金垫处理三个步骤胶体金溶胶制备将氯金酸(HauCl4)用超纯水配置成1%的母液， 取lmL的母液，用超纯水定容到100mU配成0. 01%的溶液，加热至 沸腾，加入一定量的1%柠檬酸三钠水溶液，继续加热到出现透明的 橙红色为止，即得胶体金溶胶；胶体金标记三聚氰胺抗体将三聚氰胺抗体用 Tris-HCl (0. 001mol/L， pH7. 4 8. 5)溶解稀释至3mg/mL，每lOmL胶 体金溶胶加入O. lmL2mg/mL的三聚氰胺抗体，涡旋5min，加入10% PEG-20000 2mL ， 15000r/min离心 15min ， 除去上清，用 Tris-HCl (0. 001mol/L， pH7. 4)复溶，以10000 r/min离心15 min， 除去上清，将沉淀用Tris-HCl(0.01mol/L， pH7. 4)稀释1000倍，产 物作为金标三聚氰胺抗体；金垫处理将金标三聚氰胺抗体倒入一容器中(例如槽中)，将 玻璃纤维纸或滤纸浸入lmin，取出，室温干燥或真空冷冻干燥，即成 为金垫2。检测膜3:检测膜3上包被1条三聚氰胺检测用抗原作为检测线4， 包被1条抗三聚氰胺抗体的抗体线作为质控线5。吸水垫6:采用室温干燥后的玻璃纤维纸、滤纸或吸水纸作为吸水垫。吸水垫6主要作用在于吸收样品溶液加强其移动。如果样品中含有三聚氰胺，样品溶液从样品垫1上移到达金垫2， 样品溶液中的三聚氰胺与胶体金标记的三聚氰胺抗体反应形成结合物，结合物继续上移到检测线4;因胶体金标记的三聚氰胺抗体只有一 个结合位点，样品溶液中的三聚氰胺与之结合后，检测线上的检测用 抗原就不能再与胶体金标记的三聚氰胺抗体结合，于是检测线无色； 当样品中没有三聚氰胺时，胶体金标记的三聚氰胺抗体到达检测线时 被检测用抗原捕获，则形成肉眼可见红色。无论样品中是否含有三聚 氰胺，质控线都会出现红色。因此，如果样品中含有三聚氰胺，检测 膜上只有一条红线；当样品中没有三聚氰胺时，检测膜上有两条红线。 实施例2本实用新型的应用实验以牛奶样作为样品，其他样品以此类推。在本实用新型试纸检测膜上直接滴2滴牛奶，约100 u L， 2min后， 观察颜色。若检测线都呈现颜色，表明样品为阴性，否则为阳性。无 论样品中三聚氰胺含量如何，质控线应该显色，若质控线不显色，表 明试纸失效。最低检测下限为1 P g/kg。
权利要求1、一种三聚氰胺检测试纸，其特征在于包括底板、样品垫、金垫和检测膜；所述样品垫、金垫、检测膜和吸水垫依次粘贴在底板上；所述检测膜表面设置有包被有三聚氰胺抗体和羊抗鼠IgG区域。
2、 根据权利要求1所述三聚氰胺检测试纸，其特征在于所述包 被有三聚氰胺抗体和羊抗鼠IgG区域为并列设置于检测膜上的检测 线和质控线。
3、 根据权利要求1所述三聚氰胺检测试纸，其特征在于所述检 测膜上粘贴有吸水垫。
4、 根据权利要求1所述三聚氰胺检测试纸，其特征在于所述底 板为一面涂有不干胶的塑料板。
5、 根据权利要求1所述三聚氰胺检测试纸，其特征在于所述样 品垫为浸入0. lmol/L 、 pH 7. 4 8. 0的Tris-HC1中处理过的滤纸 或玻璃纤维纸。
6、 根据权利要求1所述三聚氰胺检测试纸，其特征在于所述金 垫为浸入金标三聚氰胺单克隆抗体液中处理过的玻璃纤维纸或滤 纸。
专利摘要本实用新型公开了一种三聚氰胺检测试纸，包括底板、样品垫、金垫、检测膜和吸水垫；所述样品垫、金垫、检测膜和吸水垫依次粘贴在底板上；所述检测膜上包被有三聚氰胺抗体，同时包被有抗三聚氰胺抗体的抗体作为参考。本实用新型可以快速检测样品溶液中三聚氰胺的含量，操作简单、快速，5分钟即可观察结果。本实用新型适合于质监、工商等单位对乳品、饲料中的三聚氰胺进行快速检测。
文档编号G01N33/558GK201392342SQ20092005283
公开日2010年1月27日 申请日期2009年3月17日 优先权日2009年3月17日
发明者孙远明, 宋利军, 挺 张, 徐晓艳, 杨金易, 沈玉栋, 弘 王, 雷红涛 申请人:华南农业大学