一种LC‑MS/MS测定大鼠血浆中Ly‑7u浓度的方法与流程

文档序号:12657485阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种LC-MS/MS测定大鼠血浆中Ly-7u浓度的方法,其特征在于,包括如下步骤:

S1. 配制标准工作液:精密称取Ly-7u和内标Ly-7z粉末,分别用甲醇水溶液溶解,并稀释成标准工作液;

S2. 建立标准曲线:精密量取大鼠空白血浆,加入一系列Ly-7u标准工作液,加入内标Ly-7z标准工作液,采用液液萃取提取方法前处理,后利用LC-MS/MS进行分析,得到各样本色谱图,以待测物与内标峰面积比为横坐标,以待测物浓度为纵坐标建立标准曲线;

S3. 待测样本血浆处理:精密量取给药Ly-7u后大鼠血浆,加入内标,采用液液萃取提取方法前处理;

S4. 利用LC-MS/MS进行分析,得到各样品的色谱图,利用标准曲线计算出样本血浆的浓度。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤S1所述甲醇水溶液的体积比组成为甲醇:水=90:10。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤S1所述用甲醇水溶液溶解后还需经过超声5~15min进行溶解。

4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤S2中加入Ly-7u标准工作液和加入内标Ly-7z标准工作液后,都需要轻涡混匀。

5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤S2所述液液萃取选用乙酸乙酯。

6. 根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤S2或S3所述液液萃取提取方法前处理为:加入乙酸乙酯,涡旋2 min,静置10 min,15000 rpm离心10 min,吸取上清液,室温下真空挥干,加入复溶液溶解,涡旋1.5 min,15000 rpm离心5 min;所述复溶液的体积比组成为:甲醇:0.1%甲酸水=9:1,其中还含有5mM醋酸铵。

7. 根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤S2或S4所述LC-MS/MS的色谱条件设定如下:流动相为甲醇(A)/水(含0.1%甲酸和5 mM的乙酸铵)(B);梯度洗脱(0–1 min, 5%–90% A; 1–4 min, 90%–90% A; 4–4.1 min, 90%–5% A; 4.1–5 min, 90%–90% A);

流速0.3 mL·min-1;进样量2 μL;柱温25 ℃;MRM模式:Ly-7u:m/z 410→m/z 353;Ly-7z:m/z 457→m/z 368。

8. 根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤S2或S4所述LC-MS/MS中Ly-7u的定量子离子为353m/z,内标定量子离子为368 m/z。

9.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所有用到的水均为超纯水,所有有机试剂均为HPLC级。

10.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述LC-MS/MS为UHPLC-MS/MS。

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