1.一种检测牛血清淀粉样蛋白A的酶联免疫吸附分析试剂盒,其特征在于,该试剂盒包括:
用牛血清淀粉样蛋白A(SAA)抗体包被的酶标板
牛血清淀粉样蛋白A(SAA)标准品
标准品稀释液
牛血清淀粉样蛋白A(SAA)抗体
酶标记的羊抗鼠IgG抗体
洗涤液
底物
显色剂
终止液。
2.根据权利要求1所述的酶标板,其特点在于酶标板的材质为聚苯乙烯微孔板。
3.根据权利要求1所描述的酶标板,其特征在于酶标板制备方法包括以下步骤
包被:将牛血清淀粉样蛋白A(SAA)抗体用PH6-8的0.01-0.05M PBS缓冲液稀释,终浓度为1-50ug/ml,按照每孔100-300ul的量加入到酶标板的微孔中
在37℃孵育1-4小时或者4℃孵育过夜
洗涤:用0.01-0.05M的PBS缓冲液,加入0.1%的Tween20洗涤酶标板3-5次
封闭:在上述酶标板中每孔加入300ul封闭液(10%小牛血清或者3%脱脂奶粉)室温封闭1-3小时
洗涤:用0.01-0.05M,PH6-8的PBS缓冲液加入0.1%Tween20缓冲液洗涤酶标板3-5次
干燥:在20-37℃干燥5-10小时,使酶标板干燥。
4.根据权利要求3所描述的酶标板制备方法,其特征在于,包被酶标板的牛血清淀粉样蛋白A(SAA)抗体可以是多克隆抗体,也可以是单克隆抗体,其中优选单克隆抗体。
5.根据权利要求1所描述的牛血清淀粉样蛋白A(SAA)标准品,其特征在于所用的牛血清淀粉样蛋白A(SAA)可以是天然的牛血清淀粉样蛋白A(SAA)也可以是重组表达的牛血清淀粉样蛋白A(SAA)。
6.根据权利要求5所描述的天然或者重组表达的牛血清淀粉样蛋白A(SAA),其特征在于,牛血清淀粉样蛋白A(SAA)的基因对应GeneBank ID NM_00181016.3对应的基因序列。
7.根据权利要求1所描述的标准品稀释液,其特征在于标准品稀释液为浓度为0.01-0.05M,PH6-8的磷酸缓冲液PBS, 其中优选0.01MPH7.4的磷酸缓冲液。
8.根据权利要求1所描述的牛血清淀粉样蛋白A(SAA)抗体,其特征在于抗体可以是单克隆抗体也可以是多克隆抗体,其中优选单克隆抗体。
9.根据权利要求1所描述的酶标记的羊抗鼠IgG抗体,其特征在于酶可以是辣根过氧化物酶HRP或者碱性磷酸酶AP,其中优选辣根过氧化物酶HRP。
10.根据权利要求1所描述的洗涤液,其特征在于洗涤液为含有表面活性剂的磷酸盐缓冲液,更具体的,洗涤液为含有0.1%Tween20的磷酸缓冲液。
11.根据权利要求1中所描述的底物,其特征在于底物为过氧化物,更具体的,底物为H2O2或者其氧化物,优选1mg/ml的过氧化氢脲。
12.根据权利要求1中所描述的显色剂,其特征在于显色剂为0.1—0.3mg/ml的四氨基联苯胺溶液。
13.根据权利要求1中所描述的终止液,其特征在于终止液为2M的H2SO4。
14.一种检测牛血清淀粉样蛋白A的酶联免疫试剂盒的用途,其特征在于该试剂盒用于检测牛奶中的牛血清淀粉样蛋白A(SAA)浓度,并以此诊断奶牛的隐性乳房炎。