肺炎支原体抗原检测试剂盒及其检测方法
【技术领域】
[0001]本发明属于医学检测领域，涉及一种肺炎支原体抗原检测试剂盒及其检测方法。
【背景技术】
[0002]肺炎支原体(IAeymwia)是人类支原体肺炎的病原体。支原体肺炎的病理改变以间质性肺炎为主，有时并发支气管肺炎，称为原发性非典型性肺炎。主要经飞沫传染，潜伏期2?3周，发病率以青少年最高。
[0003]支原体肺炎的临床表现和胸部X线检查并不具特征性，单凭临床表现和胸部X线检查无法做出诊断。若要明确诊断，需要进行病原体的检测。现有的肺炎支原体(IPneumonia )的检测方法主要包括:病原体分离培养及组织细胞培养法，胶体金法，酶免疫测定(EIA )，核酸扩增法(PCR )荧光法。
[0004]中国专利申请文件CN104673718A公开了 “一种人肺炎支原体培养基及其诊断试剂盒”，即采用病原体分离培养的方法进行病原体检测，但是此种方法检测窗口期长(需病毒感染7天以上)，容易造成假阳性或假阴性；检测过程繁杂，时间长；特异性低，肉眼判断，
不可定量。
[0005]胶体金法也存在特异性低的问题。
[0006]核酸扩增法(PCR )荧光法对检测设备仪器PCR仪和检测技术要求高。
[0007]此外酶标仪酶免疫测定(EIA )同样存在对检测设备仪器酶标仪和检测技术要求尚的缺陷。
【发明内容】
[0008]本发明的目的是提供一种肺炎支原体抗原检测试剂盒及其检测方法，以实现检测窗口期短；检测用时短，操作简便；检测特异性强；灵敏度高的目的。
[0009]为实现上述目的，本发明采取下述技术方案来实现:
本发明提供一种肺炎支原体抗原检测试剂盒，包括试剂板，样品抽提液和样品管； 试剂板包括卡板和试剂条，
其中试剂板的外壳为卡板，试剂条位于卡板内部；
卡板上表面设有加样孔和检测窗口；
试剂条包括PVC板，层析膜，样品垫，结合垫和吸水材料；
卡板上的加样孔位于样品垫之上，
结合垫上面含有纳米微球标记的肺炎支原体单克隆抗体，
层析膜上包含检测线T和质控线C，检测线T和质控线C均位于卡板的检测窗口内，T线含有肺炎支原体单克隆抗体，C线含有羊抗鼠的IgG的多克隆抗体。
[0010]进一步，纳米微球为纳米金颗粒，彩色乳胶微球、或荧光微球以及量子点中的一种，直径为纳米级别的颗粒。
[0011]进一步，试剂盒还包括样品管支架。
[0012]进一步，试剂盒还包括棉签。
[0013]进一步，样品抽提液为磷酸缓冲液、Tris缓冲液、硼酸缓冲液中的一种。
[0014]优选的，所述样品抽提液中含有质量分数1%的表面活性剂TritonX-100。
[0015]本发明还提供一种肺炎支原体抗原检测方法，包括以下步骤:
步骤a，采取待测样品；
步骤b，使用如权利要求1所述的试剂盒，将取出的样品放入样品管中，并加入样品抽提液混合均勾;
步骤C，在试剂板的加样孔中滴加步骤b中混合均匀的待测样品液进行反应；
步骤d，将反应后的试剂板插入免疫分析仪中进行检测，得到检测结果。
[0016]进一步，步骤b中加入的样品抽提液体积与样品体积比为1:1。
[0017]进一步，步骤c中滴加的待测样品液体积为100 μ I。
[0018]进一步，步骤d中使用免疫荧光分析仪器时，其检测波段为激发光波长365nm，发射光波长610nmo
[0019]与现有技术相比，本发明具有以下优点:
本发明的试剂盒和检测方法是采用纳米微球免疫层析技术，其基本原理是免疫层析检测方法和纳米微球标记技术的结合，产品是采用的是抗原抗体反应方法，即将待测抗原相应的抗体固定于载体T线上，同时将纳米微球标记好的另一个抗体固定于结合垫上。当样品中含有待检测物质时，待检测物质和固定在结合垫上的纳米微球标记抗体反应，在层析至固定于T线位置上的抗体处，和该抗体反应形成抗体-抗原-抗体-纳米微球复合物，该复合物可以显色或者在激发光作用下显色，显色的强弱与待测物质的浓度呈线性关系。
[0020]应用本发明的检测试剂盒和检测方法时，时间短，操作简便。
[0021]本产品以肺炎支原体的抗原和抗体的特异性结合反应，加之荧光物质强化特异性反应效果，大大提高了产品的性能。
[0022]灵敏度:肺炎支原体抗原检测试剂盒最小检测灵敏度为7.81 X 102CFU/ml，本发明较传统的培养法，其检测灵敏度可以高出1-2个数量级。
[0023]特异性:产品的特异性大于99%，交叉反应试验确认，本试剂与18种细菌和真菌、14种病毒及衣原体均没有交叉反应。
[0024]在患者感染的初期(2-3天左右)，仅有少量的肺炎支原体病毒时。本试剂盒较高的特异性和灵敏度，能够准确判断MP的阳性感染情况，在感染初期即可确定是否感染MP病毒，为治疗提供依据。
【附图说明】
[0025]图1是本发明实施例1中的试剂板结构示意图。
[0026]图2是本发明实施例1中的荧光免疫分析仪读取的结果。
[0027]图3是本发明实施例2中的可肉眼判读的检测结果。
【具体实施方式】
[0028]下面结合具体实施例对本发明进行详细阐述。
[0029]实施例1 一种肺炎支原体抗原检测试剂盒(荧光免疫法)
该试剂盒包括试剂板，样品抽提液，样品管，棉签和样品管架。
[0030]其中样品抽提液为磷酸缓冲液，所述磷酸缓冲液浓度为ΙΟηΜ，并含有质量分数1%的表面活性剂TritonX-100。
[0031 ] 样品管为普通样品管即可，无特殊要求。
[0032]棉签用于辅助样品的采集，适用于鼻腔取样。
[0033]样品管架用于支撑样品管，便于操作。
[0034]试剂板如图1所示，包括卡板I和试剂条，
其中卡板1，包括上下两块，分别为卡板11和卡板12，卡板11和卡板12合在一起形成试剂板的外壳，试剂条位于两块卡板中间的空腔内。
[0035]卡板11的上表面设有加样孔13和检测窗口 14。
[0036]其中加样孔13对应试纸条的加样位置，检测窗口 14对应试纸条的检测位置。
[0037]试剂条为免疫层析试纸条，包括PVC板，层析膜，样品垫，结合垫和吸水材料。
[0038]结合垫为玻璃纤维，上面固定有荧光微球标记的肺炎支原体单克隆抗体。
[0039]层析膜为硝酸纤维素膜，层析膜上包含检测线T和质控线C，检测线T和质控线C均位于卡板的检测窗口内，其中T线位置固定有肺炎支原体单克隆抗体，C线位置固定有羊抗鼠的IgG的多克隆抗体。T线位置固定的肺炎支原体单克隆抗体与结合垫上固定的肺炎支原体单克隆抗体，此两处的抗体与抗原结合的位点不同。
[0040]吸水材料位于层析膜样品流动方向的末端，确保产品能够顺利快速的通过层析膜。
[0041]使用实施例1的肺炎支原体抗原检测试剂盒(免疫荧光法)检测待测样品，操作过程如下:
1.取待测样品(如咽拭子)0.5ml，加入样品管中，然后加入0.5ml的样品抽提液，反复挤压样品管数次，使咽拭子样品中病毒尽可能多的释放到样品抽提液中，并且充分混匀样品O
[0042]2.在试剂板上的加样孔中，滴加10ul (3滴)的待测样品液，等待15_20min。
[0043]3.将反应后的试剂板，插入焚光免疫分析仪中，开始检测。焚光免疫分析仪的检测波段为激发光波长365nm，发射光波长610nm。
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