幅降低了检测成本。
[0036] 本发明试剂盒选用液体双试剂检测法，合理分配各反应物质在整个反应体系中的 浓度，避免自发反应的出现，保持存在于其中的各种酶的空间结构完整，同时添加了酶保护 剂，保证了酶的长期高活性，有效的提高了试剂性能。
[0037] 本发明试剂盒选用新型色原物质，性能更优，呈色稳定，同时添加了抗干扰剂，较 常规的游离脂肪酸测定试剂盒抗干扰性能强，能有效避免样本中溶血、坏血酸、胆红素和黄 疸对检测结果的干扰，提高了试剂盒的分析灵敏度。
[0038] 本发明试剂盒选用复合稳定剂，有效的延长了试剂盒的保存时间，保证了试剂中 多种反应酶的性能稳定，在保存期内各反应酶不会因为环境温度等变化而产生变异，提高 了试剂盒的稳定性。本发明试剂盒在2_8°C温度条件下贮存，至少稳定20个月；试剂开瓶 后2_8°C可稳定保存至少1个月且准确度无明显变化，而市售试剂盒有效期一般为12个月， 开瓶后一般只能保存10-15天，久置后准确度明显降低。
[0039] 本发明用于临床检测血清游离脂肪酸含量，操作简单快捷，对医疗设施要求不高， 适用范围广，不仅可以在大中型医院广泛使用，而且可直接应用于各种全自动、半自动生化 分析仪，仅需几分钟便可完成检测。
【附图说明】
[0040] 附图1所示的是根据本发明实施例1所述的酶法游离脂肪酸测定试剂盒与进口试 剂盒检测40例临床样本的相关性比对图。
[0041] 附图2所示的是根据本发明实施例1所述的酶法游离脂肪酸测定试剂盒与进口试 剂盒线性对比图。
[0042] 附图3所示的是根据本发明实施例2所述的酶法游离脂肪酸测定试剂盒与进口试 剂盒检测40例临床样本的相关性比对图。
[0043] 附图4所示的是根据本发明实施例2所述的酶法游离脂肪酸测定试剂盒与进口试 剂盒线性对比图。
[0044] 附图5所示的是根据本发明实施例3所述的酶法游离脂肪酸测定试剂盒与进口试 剂盒检测40例临床样本的相关性比对图。
[0045] 附图6所示的是根据本发明实施例3所述的酶法游离脂肪酸测定试剂盒与进口试 剂盒线性对比图。
【具体实施方式】
[0046] 下面通过实施例对本发明作进一步的描述，但是，本申请不限于这些实施例，这些 实施例也不能解释为对本申请的限制。
[0047] 下述试剂的配制方法如无特别说明，均为常规方法，所使用的试验材料如无特别 说明，均可从商业公司获取。
[0048] 实施例1
[0049] -、一种稳定的酶法游离脂肪酸测定试剂盒，该试剂盒由按照下述成分和比例配 制的液体双试剂组成，其中：
[0050] 试剂 1 :
[0051]
[0052] 试剂 2 :
[0053]
[0054]
[0055] 所述试剂1和试剂2的容积比为4:1。
[0056] 二、操作方法
[0057] 本实施例描述的游离脂肪酸测定试剂盒，采用自动生化分析仪，以日立7080为 例，具体操作如下：
[0058] 表1本发明试剂盒检测方法
[0059]
[0060] 测试条件：37°C，比色杯光径为1. 0cm，检测主波长546nm，副波长660nm。按以下 公式计算游离脂肪酸含量。
[0061]
[0062] 三、本发明试剂盒与进口酶法试剂盒的
相关性
[0063] 使用本实施例所述试剂盒与进口试剂盒（德赛），同时对40例人血清样本中游 离脂肪酸的检测结果进行相关性分析。进口试剂盒按照其说明书进行操作，测定结果如下 表2所示。下表中进口试剂盒参考范围是0. 10-0. 60mmol/L，本发明试剂盒的参考范围是 0.13-〇.77mmol/L〇
[0064]表2本发明试剂盒与进口试剂盒对游离脂肪酸的测定结果比较
[0065]
[0066] 相关系数R表示两组数值的相关程度，R越接近1表明两组数据的相关性越好。通 常认为R大于〇. 990时的相关性为良好。
[0067] 所述相关系数的计算方法如下：
[0068]
[0069] 其中，X为本发明
试剂盒测得的NEFA含量浓度值，叉为上述测得的X值的平均数； Y为使用进口试剂盒测得的NEFA含量浓度值，f为上述测得的Y值的平均数。
[0070] 由上表统计结果可以看出，在这40例新鲜人血清样本中，共出现29例阴性结果和 11例阳性结果，本发明试剂盒和进口酶法试剂盒在结果判断上是一一对应的，二者相关性 良好（R = 0. 9990)，临床意义显著。
[0071] 以上的试验是采用日立公司制造的7080型号全自动生化分析仪进行的，但本发 明试剂盒的应用不限于上述仪器，还适用于其他全自动或半自动生化分析仪，并且本领域 技术人员可以根据情况对测定参数做适当调整。
[0072] 四、线性评估
[0073] 取某一高值样本，分别用本发明试剂盒和进口试剂盒（德赛）测定高值样本5次 倍比稀释后的线性，以此从实际样本中评估各试剂盒的线性，结果列于表3中。
[0074] 表3本发明试剂盒与进口试剂盒线性对比
[0075]
[0076] 结果表明本发明试剂盒线性良好，拟合相关系数优于进口试剂盒。
[0077] 五、稳定性研究
[0078] 使用本实施例所述试剂盒，对高、低两个水平的游离脂肪酸样本进行测定，每个水 平样本重复测定10次，并分别与2-8°C放置20个月的试剂测定结果进行对比，验证测定结 果的准确性，按正规统计学要求，计算每个水平样品测定结果的平均值和标准差，然后按公 式：
[0079]
[0080] 变异系数（CV)=标准差/平均值X 100% ;
[0081] 其中，X为测得的游离脂肪酸含量浓度值，玄为测得的X值的平均数，n为重复测 定次数；
[0082] 计算变异系数CV，结果列于下表4中；
[0083]按公式B%= (X-T)/Tx丨〇〇%
[0084] 其中T为初始测定值均值，f为2-8°C放置20个月的测定值均值。
[0085] 计算2_8°C放置20个月测定值与初始测定值均值的相对偏差（B% )，结果列于表 4中。
[0086] 表4本发明试剂盒2_8°C长期放置20个月检测结果
[0087]
[0088] 由表4可以看出本实施例所述试剂盒在2_8°C放置20个月，测定结果重复性CV均 小于10%，且与初始测定值的偏差均小于10%，符合《体外诊断试剂通用要求》，表明本发 明试剂盒重复性良好，具有较好的准确性和良好的稳定性。
[0089] 六、酶活性的影响
[0090] 加入0.5 %脂酰辅酶A氧化酶稳定剂对脂酰辅酶A氧化酶的保护作用。
[0091] 表5酶保护剂对试剂中酶活性的影响
[0094] 本发明试剂盒对试剂中的酶有很强的保护作用，随着时间的推移，对酶的保护作 用会更明显，20个月后加酶稳定剂的试剂与未加酶稳定剂的试剂相比，残存酶活率升高 45%〇
[0095] 实施例2
[0096] -、一种稳定的酶法游离脂肪酸测定试剂盒，该试剂盒由按照下述成分和比例配 制的液体双试剂组成，其中：
[0097]试剂1 :
[0098] HEPPS 缓冲液 200 mmol/L MgCl2 ? 6H20 100 mmol/L KCL 50 nimoi/L ATP 20 mmol/L. 辅酶 A 2.0 mmol/L 脂酰辅酶A合成酶 5.0 KU/L 4-氨基安替比林 2.0 g/L 稳定剂蔗糖 2,0 g/L 衫-环糊精 2,0 g/L 无脂肪酸白蛋白 5.0 g/L 咪唑烷基脲 0.5 % 表面活性剂 5.0 g/L EGTA 2.5 mmol/L 抗坏血酸氧化酶 10 KU/L 亚铁氰化钾 0.1 mmol/L
[0099]试剂2 :
[0100] MOPS 缓冲液 2:00 mrad/L 脂酰辅酶A氧化酶 100KU/L 黄素腺嘌呤二核苷酸钠盐 0.05 g/L 3-甲基-N,N-二丙磺酸钠苯胺 10 mmol/L DTPA 螯合剂 3.0 mrnol/L
[0101] 表面活性剂 5.0 g/L 咪唑烷基脲 0.5 % 脂酰辅酶A氧化權II定剂 2,0% 过氧化物酶 150KU/L
[0102] 所述试剂1和试剂2的容积比为4:1。
[0103] 二、本发明试剂盒与进口试剂盒的相关性
[0104] 使用本实施例所述试剂盒，按实施例1所述方法，同时与市售进口试剂盒（德赛） 对40例人血清样本中的游离脂肪酸含量进行测定，进口试剂盒按照其说明书进行操作，测 定结果如下表6所示。下表中进口试剂盒参考范围是0. 10-0. 60mmol/L，本发明试剂盒的参 考范围是 〇? 13-0. 77mmol/L。
[0105] 表6本发明试剂盒与进口试剂盒对NEFA的测定结果
[0106]
[0107]
[0108] 由上表统计结果可以看出，在这40例新鲜人血清样本中，共出现30例阴性结果和 10例阳性结果，本发明试剂盒和进口酶法试剂盒在结果判断上是一一对应的，计算本发明 试剂盒与进口试剂盒测定结果的相关系数r = 0.9989,二者相关性良好，临床意义显著。
[0109] 以上的试验是采用日立公司制造的7080型号全自动生化分析仪进行的，但本发 明试剂盒的应用不限于上述仪器，还适用于其它全自动或半自动生化分析仪，并且本领域 技术人员可以根据情况对测定参数做适当调整。
[0110] 三、线性评估
[0111] 取某一高值样本，分别用本发明试剂盒和进口试剂盒（德赛）测定高值样本5次 倍比稀释后的线性，以此从实际样本中评估各试剂盒的线性，结果列于表7中。
[0112] 表