检测免疫球蛋白e含量的试剂盒、方法及用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于检测免疫球蛋白E含量的技术领域，具体涉及一种检测免疫球蛋白E含 量的试剂盒、方法及用途。
【背景技术】
[0002] 免疫球蛋白E(Immunoglobulin E，IgE)主要由呼吸道、消化道黏膜固有层淋巴组 织中的B细胞合成，为过敏反应的介导因素。在血清中含量极微，仅占血清免疫球蛋白总量 的0.002%，但它却是引起过敏反应的主要抗体。
[0003] IgE为亲细胞型抗体，正常人血清含量极低，为10~350U/ml。过敏患者及寄生虫患 者血清IgE含量显著高于正常人。自1966年日本学者Ishizaka发现IgE以来，开启了过敏性 疾病研究的新时代。总IgE的体外定量检测已在临床广泛应用，它已成为判定机体对过敏原 的易感性与鉴别诊断寄生虫感染性疾病免疫功能障碍相关性疾病的评估指标。
[0004] 目前检测IgE的方法有放射免疫测定法(IRST)、酶联免疫测定法(ELISA)以及间接 血凝试验法。放射免疫测定法（IRST)和酶联免疫法测定过程较为繁琐，易受污染，耗时长， 灵敏度差，自动化程度不高，需要配备多种专门设备，一定程度上增加了成本。血清中总IgE 的含量较低，特别是新生儿脐带血中总IgE含量极低，必须用灵敏的方法才能正确检测。建 立一个高度敏感又具特异性的检测系统是目前亟需解决的问题。
【发明内容】
[0005] 本发明实施例的目的在于克服现有技术的上述不足，提供一种检测免疫球蛋白E 含量的试剂盒，可以简洁快速地检测样本中免疫球蛋白E的含量，具有较高的准确度和很好 的特异性。
[0006] 本发明实施例的另一目的在于克服现有技术的上述不足，提供一种上述的检测免 疫球蛋白E含量的试剂盒的在检测免疫球蛋白E含量中的用途，可用于简洁快速地检测样本 中免疫球蛋白E的含量，具有较高的准确度和很好的特异性。
[0007] 本发明实施例的再一目的在于克服现有技术的上述不足，提供一种采用上述的检 测免疫球蛋白E含量的试剂盒检测免疫球蛋白E含量的方法，可以简洁快速地检测样本中免 疫球蛋白E的含量，具有较高的准确度和很好的特异性。
[0008] 为了实现上述发明目的，本发明实施例的技术方案如下：
[0009] -种检测免疫球蛋白E含量的试剂盒，包括:试剂R1、试剂R2和免疫球蛋白E校准 品；所述试剂R1包括:第一缓冲液10~500mmol/L、第一电解质5~50g/L、表面活性剂0.5~ 50g/L、第一稳定剂0.5~10g/L、高分子促进剂1~100g/L和第一防腐剂1~10g/L;所述试剂 R2包括:第二缓冲液10~500mmol/L、抗人免疫球蛋白E抗体包被胶乳颗粒5~50%w/v、第二 电解质5~50g/L、第二稳定剂0.5~10g/L和第二防腐剂1~10g/L;所述免疫球蛋白E校准品 包括:第三缓冲液10~500mmol/L、第三稳定剂5~50g/L、第三防腐剂1~10g/L、抗氧化剂 0.01~10g/L和抗人免疫球蛋白E抗原。
[0010] 进一步，所述抗人免疫球蛋白E抗体包被胶乳颗粒的制备过程如下:在交联缓冲液 中，通过化学交联剂将抗人免疫球蛋白E多克隆抗体包被到胶乳颗粒的表面。
[0011] 进一步:所述交联缓冲液选自不含氨基的缓冲液、2-(N-吗啡啉）乙磺酸MES缓冲 液、3-吗啉-2-羟基丙磺酸M0PS0缓冲液、3-( N-吗啉)丙磺酸MOPS缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺 酸HEPES缓冲液或者磷酸缓冲液，所述交联缓冲液的pH值为6.0~8.0;所述化学交联剂选自 碳化亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺、N-羟基硫代琥珀酰亚胺、酰肼和异氰酸酯中的一种或几种； 所述抗人免疫球蛋白E多克隆抗体选自鼠抗人、鸡抗人、鸭抗人、鹅抗人、兔抗人、羊抗人或 牛抗人免疫球蛋白E抗体;所述胶乳颗粒为聚苯乙烯胶乳颗粒。
[0012] 进一步：所述胶乳颗粒的浓度为0.5~5mg/mL，所述胶乳颗粒的直径为100~ 300nm〇
[0013] 进一步:所述胶乳颗粒的表面连有功能团，所述功能团选自羧基、氨基、羟基、酰肼 或氯甲基。
[0014] 进一步:所述试剂R1的pH为6~9,所述试剂R2的pH为6~9。
[0015] 进一步:所述第一缓冲液、所述第二缓冲液和所述第三缓冲液均选自醋酸盐缓冲 液、氯化铵缓冲液、磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷TRIS缓冲液、硼砂-氢氧化钠缓冲液、 甘氨酸缓冲液、3-(N-吗啉）丙磺酸MOPS缓冲液、3-(环己胺）-2_羟基-1-丙磺酸CAPS0缓冲 液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES缓冲液中的一种或几种；和/或，所述第一稳定剂、所述第二 稳定剂和所述第三稳定剂均选自亚氨基二乙酸、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠、乙二胺四乙酸 二钠、二乙烯三胺五乙酸钠、1，2_环己二醇缩水甘油、甘露糖、葡萄糖、壳聚糖、山梨醇和牛 血清蛋白中的一种或几种;和/或，所述第一防腐剂、所述第二防腐剂和所述第三防腐剂均 选自叠氮钠、苯酚、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯和乙基汞硫代硫酸钠中的一种或几 种;和/或，所述第一电解质和所述第二电解质均选自氯化钠、硫酸镁、氯化镁和氯化钾中的 一种或几种；和/或，所述表面活性剂选自Triton系列表面活性剂、Tween系列表面活性剂、 聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯壬基苯基醚和聚氧乙烯辛基苯醚中的一种或几种；和/或， 所述高分子促进剂选自脂肪醇聚氧乙烯醚、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸钠、乙二醇聚氧乙烯 醚、羟丙基甲基纤维素和羟甲基纤维素钠中的一种或几种;和/或，所述抗氧化剂选自丁基 羟基茴香醚、没食子酸丙酯、二丁基羟基甲苯、苯多酚、磷脂、甘草抗氧化物、硫代二丙酸二 月桂酯、特丁基对苯二酚和维生素系列中的一种或几种。
[0016] 进一步:所述第一缓冲液和所述第二缓冲液的成分相同。
[0017] -种如上所述的检测免疫球蛋白E含量的试剂盒的在检测免疫球蛋白E含量中的 用途。
[0018] 以及，一种采用如上所述的检测免疫球蛋白E含量的试剂盒检测免疫球蛋白E含量 的方法，包括:按待测样品和所述试剂R1的体积比为1~10:250,向所述待测样品中加入所 述试剂R1，得到第一混合液，并得到所述第一混合液的吸光度0D1;按所述试剂R2与所述试 剂R1体积比为1:1~7,向所述第一混合液中加入所述试剂R2,得到第二混合液，并得到所述 第二混合液的吸光度0D2;使用所述免疫球蛋白E校准品得到标准曲线，根据所述吸光度0D1 和所述吸光度0D2在所述标准曲线上得到所述待测样品中免疫球蛋白E的含量。
[0019] 本发明实施例的有益效果如下：
[0020] 1、本发明实施例的检测免疫球蛋白E含量的试剂盒，使用简便快速，可简洁快速地 检测样本中免疫球蛋白E的含量。
[0021 ] 2、本发明实施例的检测免疫球蛋白E含量的试剂盒，与进口对比试剂实验表明，本 发明的试剂盒中的试剂具有较高的准确度和很好的特异性，能够满足临床快速高通量检测 样本的要求，检测效率明显提尚。
[0022] 3、本发明实施例的检测免疫球蛋白E含量的试剂盒，使用了经过筛选后的最优化 的试剂组合，使得试剂的稳定性大大提高，在2~8°C的环境下，可以稳定存放一年以上，因 此在临床应用上具有广阔的前景。
[0023] 4、本发明实施例的检测免疫球蛋白E含量的试剂盒，还具有灵敏度高，可自动化检 测等特点。
[0024] 5、本发明实施例的检测免疫球蛋白E含量的试剂盒使其具有检测免疫球蛋白E含 量的用途。
[0025] 6、本发明实施例的检测免疫球蛋白E含量的试剂盒检测免疫球蛋白E含量的方法， 简洁快速地检测样本中免疫球蛋白E的含量，检测效率较高，在临床应用上具有广阔的前 景。
【附图说明】
[0026] 图1是本发明实施例的检测免疫球蛋白E含量的方法的流程图；
[0027] 图2是本发明的实施例1的免疫球蛋白E含量的检测方法的流程示意图；
[0028] 图3是本发明的实施例1的检测免疫球蛋白E含量的标准曲线；
[0029] 图4是本发明的实施例5的检测免疫球蛋白E试剂盒与国外对比试剂盒的比较结果 示意图。
【具体实施方式】
[0030] 为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图和实施例，对 本发明