进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并 不用于限定本发明。
[0031] 本发明提供了一种检测免疫球蛋白E含量的试剂盒。该试剂盒包括:试剂R1、试剂 R2和免疫球蛋白E校准品。
[0032] 其中，试剂R1包括:第一缓冲液10~500mmol/L、第一电解质5~50g/L、表面活性剂 0.5~50g/L、第一稳定剂0.5~10g/L、高分子促进剂1~100g/L和第一防腐剂1~10g/L。 [0033] 试剂R2包括:第二缓冲液10~500mmol/L、抗人免疫球蛋白E抗体包被胶乳颗粒5~ 50%w/v(相当于抗人免疫球蛋白E抗体的浓度为50~500g/L)、第二电解质5~50g/L、第二 稳定剂0.5~10g/L和第二防腐剂1~10g/L。本发明中，w/v表示的意思是单位体积的溶液中 所含的溶质质量。
[0034] 免疫球蛋白E校准品包括:第三缓冲液10~500mmol/L、第三稳定剂5~50g/L、第三 防腐剂1~l〇g/L、抗氧化剂0.01~10g/L和抗人免疫球蛋白E抗原。
[0035]优选的，试剂R1中，第一缓冲液选自醋酸盐缓冲液、氯化铵缓冲液、磷酸盐缓冲液、 三羟甲基氨基甲烷TRIS缓冲液、硼砂-氢氧化钠缓冲液、甘氨酸缓冲液、3-(N-吗啉)丙磺酸 MOPS缓冲液、3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸CAPS0缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES缓冲 液中的一种或几种。第一电解质选自氯化钠、硫酸镁、氯化镁和氯化钾中的一种或几种。表 面活性剂选自Triton系列表面活性剂、Tween系列表面活性剂、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧 乙烯壬基苯基醚和聚氧乙烯辛基苯醚中的一种或几种。第一稳定剂选自亚氨基二乙酸、月旨 肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠、乙二胺四乙酸二钠、二乙烯三胺五乙酸钠、1，2-环己二醇缩水甘 油、甘露糖、葡萄糖、壳聚糖、山梨醇和牛血清蛋白中的一种或几种。高分子促进剂选自脂肪 醇聚氧乙烯醚、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸钠、乙二醇聚氧乙烯醚、羟丙基甲基纤维素和羟 甲基纤维素钠中的一种或几种。第一防腐剂选自叠氮钠、苯酚、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲 酸乙酯和乙基汞硫代硫酸钠中的一种或几种。
[0036] 优选的，试剂R2中，第二缓冲液选自醋酸盐缓冲液、氯化铵缓冲液、磷酸盐缓冲液、 三羟甲基氨基甲烷TRIS缓冲液、硼砂-氢氧化钠缓冲液、甘氨酸缓冲液、3-(N-吗啉)丙磺酸 MOPS缓冲液、3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸CAPS0缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES缓冲 液中的一种或几种。第二电解质选自氯化钠、硫酸镁、氯化镁和氯化钾中的一种或几种。第 二稳定剂选自亚氨基二乙酸、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠、乙二胺四乙酸二钠、二乙烯三胺五 乙酸钠、1，2_环己二醇缩水甘油、甘露糖、葡萄糖、壳聚糖、山梨醇和牛血清蛋白中的一种或 几种。第二防腐剂选自叠氮钠、苯酚、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯和乙基汞硫代硫酸 钠中的一种或几种。
[0037] 优选的，试剂R2中，抗人免疫球蛋白E抗体包被胶乳颗粒的制备过程如下：在交联 缓冲液中，通过化学交联剂将抗人免疫球蛋白E多克隆抗体包被到胶乳颗粒的表面。
[0038]其中，交联缓冲液选自不含氨基的缓冲液、2-(N_吗啡啉）乙磺酸MES缓冲液、3-吗 啉-2-羟基丙磺酸M0PS0缓冲液、3-(N-吗啉)丙磺酸MOPS缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES 缓冲液或者磷酸缓冲液。交联缓冲液的pH值为6.0~8.0。
[0039]化学交联剂选自碳化亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺、N-羟基硫代琥珀酰亚胺、酰肼和异 氰酸酯中的一种或几种。
[0040]抗人免疫球蛋白E多克隆抗体选自鼠抗人、鸡抗人、鸭抗人、鹅抗人、兔抗人、羊抗 人或牛抗人免疫球蛋白E抗体。优选的，抗人免疫球蛋白E多克隆抗体为鸡抗人免疫球蛋白 E。本发明的选自鸡、鸭、鹅等禽类所产生的抗体与哺乳类产生的抗体有较大差异，相比具有 以下优势:能有效避免人体体液样本中补体、类风湿因子或Fc受体的干扰，保证试剂较高的 特异性;在遗传上，与人类进化关系差异较大的禽类能够产生比哺乳类动物多克隆抗体更 高的亲和性抗体，此类抗体效价高，用量小，试剂成本优势高。上述的抗人免疫球蛋白E多克 隆抗体可自制或购买。
[0041]胶乳颗粒为聚苯乙烯胶乳颗粒。优选的，胶乳颗粒的浓度为0.5~5mg/mL。胶乳颗 粒的直径为100~300nm。更优选的，胶乳颗粒的直径为150~250nm。更优选的，胶乳颗粒的 直径为200nm〇
[0042 ]优选的，胶乳颗粒的表面连有功能团。该功能团起修饰的作用。优选的，该功能团 选自羧基、氨基、羟基、酰肼或氯甲基。更有选的，该功能团为羧基。
[0043]优选的，免疫球蛋白E校准品中，第三缓冲液选自醋酸盐缓冲液、氯化铵缓冲液、磷 酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷TRIS缓冲液、硼砂-氢氧化钠缓冲液、甘氨酸缓冲液、3-(N-吗啉)丙磺酸MOPS缓冲液、3-(环己胺)-2-羟基-1 -丙磺酸CAPS0缓冲液和4-羟乙基哌嗪乙磺 酸HEPES缓冲液中的一种或几种。第三稳定剂选自亚氨基二乙酸、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸 钠、乙二胺四乙酸二钠、二乙烯三胺五乙酸钠、1，2_环己二醇缩水甘油、甘露糖、葡萄糖、壳 聚糖、山梨醇和牛血清蛋白中的一种或几种。第三防腐剂选自叠氮钠、苯酚、对羟基苯甲酸、 对羟基苯甲酸乙酯和乙基汞硫代硫酸钠中的一种或几种。抗氧化剂选自丁基羟基茴香醚、 没食子酸丙酯、二丁基羟基甲苯、苯多酚、磷脂、甘草抗氧化物、硫代二丙酸二月桂酯、特丁 基对苯二酚和维生素系列中的一种或几种。
[0044] 优选的，试剂R1的pH为6~9。
[0045] 优选的，试剂R2的pH为6~9。
[0046]更优选的，试剂R1中的第一缓冲液和试剂R2中的第二缓冲液的成分相同。
[0047]更优选的，第三缓冲液为磷酸盐缓冲液。
[0048] 更优选的，该试剂盒包括如下的成分：
[0049] 试剂1?1包括:磷酸盐缓冲液10~500臟〇1/1、氯化钠5~5(^/1、1^行〇11乂 1000.5~ 50g/L、牛血清蛋白0.5~10g/L、乙二醇聚氧乙烯醚1~100g/L和叠氮钠1~10g/L。试剂R1的 pH为6~9。试剂R2包括:磷酸盐缓冲液10~500mm〇l/L、抗人免疫球蛋白E抗体包被胶乳颗粒 5~50%w/v(该胶乳颗粒的直径为100~300nm)、氯化钠5~50g/L、牛血清蛋白0.5~10g/L 和叠氮钠1~l〇g/L。试剂R2的pH为6~9。免疫球蛋白E校准品包括：磷酸盐缓冲液10~ 500mmol/L、牛血清蛋白5~50g/L、叠氮钠1~10g/L、二丁基羟基甲苯0.01~10g/L和免疫球 蛋白E抗原。
[0050] 本发明实施例的检测免疫球蛋白E含量的试剂盒使用简便快速，可简洁快速地检 测样本中免疫球蛋白E的含量;具有较高的准确度和很好的特异性，能够满足临床快速高通 量检测样本的要求，检测效率明显提尚；试剂的稳定性大大提尚，在2~8°C的环境下，可以 稳定存放一年以上，因此在临床应用上具有广阔的前景;还具有灵敏度高，可自动化检测等 特点。
[0051] 本发明实施例还提供了一种上述的检测免疫球蛋白E含量的试剂盒的在检测免疫 球蛋白E含量中的用途，可以用于简洁快速地检测样本中免疫球蛋白E的含量，具有较高的 准确度和很好的特异性。
[0052]本发明实施例还提供了一种采用上述的检测免疫球蛋白E含量的试剂盒检测免疫 球蛋白E含量的方法。采用本发明的试剂盒检测的方法为胶乳增强免疫比浊法定量检测免 疫球蛋白E。其原理是:利用化学交联法将特异的免疫球蛋白E多克隆抗体包被到胶乳颗粒 表面，当被测样本中含有免疫球蛋白E抗原时，发生抗原抗体免疫反应形成抗原-抗体-胶乳 颗粒复合物，形成的复合物能与邻近的胶乳颗粒连接，最终交织成网状，引起反应体系浊度 显著变化。保持反应体系里抗体过量时，其体系浊度的变化与免疫球蛋白E含量成正比关 系，根据免疫球蛋白E标准曲线可以定量分析。
[0053]如图1所示，为本发明实施例的检测免疫球蛋白E含量的方法的流程图。该方法具 体包括如下的步骤：
[0054] 步骤S10:按待测样品和试剂R1的体积比为1~10:250，向待测样品中加入试剂R1， 得到第一混合液，并得到第一混合液的吸光度0D1。该步骤可解除待测样品中抗原周围电子 层和水化层，使抗原