专利名称：一种制备转线粒体基因组小鼠的方法
技术领域：
本发明涉及的是一种制备转线粒体基因组小鼠的方法。
生物学常识告诉我们，所有的真核生物都至少有两套遗传的机构核基因组和线粒体基因组。前者携带的基因是通过孟德尔方式遗传的，后者则是通过母系遗传的，即通过卵传递给后代。现有的制备转基因小鼠的方法所转移的目的基因都是核基因。
本发明的目的在于提出一种制备转线粒体基因组小鼠的方法，原则上它也可以用来制备带有转线粒体基因组的其他动物。这种品系的动物在理论研究和实际应用方面都有广阔的前景，如用于研究人类线粒体基因缺陷的遗传病、研究线粒体对动物胚胎发育的影响、培育具有高生产性能的核-质杂种牲畜、以及克隆珍稀和濒临灭绝的动物，等等。
本发明的方法步骤如下一、将带有核遗传标记(如控制毛色遗传的标记)的小鼠胚胎干细胞(ES细胞)的线粒体去除，代之以异源的线粒体。具体操作如下1.将小鼠ES细胞和异种动物的细胞分别培养在适当的基片上。
2.将培养的两种细胞分别用细胞松弛素处理。
3.将处理的两种细胞分别离心，获得相应的核体和胞质体。
4.取样检测上述核体和胞质体的处理效果，调整处理方法，使(1)小鼠ES细胞的核体中不含有或几乎不含有线粒体；(2)异种细胞的胞质体中不残留有任何的细胞核。
5.将达到上述(1)与(2)要求的两种成分用PEG(聚乙二醇)或电击的方法融合。
6.将上述的融合细胞在适当条件下培养一段时间。
二、将经过上述处理的ES细胞注射到带有不同的核遗传标记的小鼠品系的早期囊胚中。
三、将上述囊胚移植到代孕母鼠的子宫中，饲养到直至产下子鼠。只要移植操作足够多，这些子鼠中总可以发现具有核遗传标记的镶嵌性状(如杂色皮毛)者。
四、取上述具有镶嵌性状的雌性小鼠与一般品系的小鼠杂交。对所产后代中的雌性小鼠进行线粒体基因组的鉴定筛选，只带有外源线粒体基因组的留作种用。
五、用上述小鼠与一般品系的雄性小鼠交配繁殖，扩增雌性小鼠的数量，作为种用，建立起携带有外源线粒体基因组的小鼠品系。
本发明的效果是，可以获得转线粒体基因组的小鼠，且此性状能够通过母系稳定地传递给后代。
权利要求
1.一种制备转基因动物的方法，其特征在于，所转移的是整个线粒体基因组，其操作步骤包括将带有核遗传标记的小鼠胚胎干细胞(ES细胞)的线粒体去除，代之以异源的线粒体。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述去除线粒方法包括如下步骤(1)将小鼠ES细胞和异种动物的细胞分别培养在适当的基片上；(2)将培养的两种细胞分别用细胞松弛素处理；(3)将处理的两种细胞分别离心，获得相应的核体和胞质体；(4)取样检测上述核体和胞质体的处理效果，调整处理方法，使小鼠ES细胞的核体中不含有或几乎不含有线粒体、异种细胞的胞质体中不残留有任何的细胞核；(5)将达到上述要求的两种成分用PEG(聚乙二醇)或电击的方法融合；(6)将上述的融合细胞在适当条件下培养一段时间，然后注射到囊胚中，以得到镶嵌小鼠。
全文摘要
本发明涉及一种制备转线粒体基因组小鼠的方法，该方法所采用的步骤是在带有核遗传标记的小鼠胚胎干细胞中引入异源线粒体基因组，然后按照经典的制备转基因小鼠的方法将这种胚胎干细胞引入带有不同的核遗传标记的小鼠品系的早期囊胚中，做成镶嵌小鼠。使具有镶嵌性状的雌性子代小鼠与一般品系的小鼠杂交，对所产后代中的雌性小鼠进行线粒体基因组的鉴定筛选，只带有异源线粒体基因组的留作种用。
文档编号A01K67/027GK1412302SQ0113645
公开日2003年4月23日 申请日期2001年10月18日 优先权日2001年10月18日
发明者孙群 申请人:孙群