本发明属于植物组织培养技术领域，尤其涉及一种诱导酸浆植株再生的培养基及培养方法。
背景技术：
酸浆(拉丁文名：Physali alkekengi L.)又名红菇娘、挂金灯等，原产于中国，南北均有野生资源分布。酸浆为茄科酸浆属多年生直立草本植物，株高50～80cm，地上茎常不分枝，有纵棱，茎节膨大，幼茎被有较密的柔毛。根状茎白色，横卧地下，多分枝，节部有不定根。酸浆具有清热、解毒、利尿、降压、强心、抑菌等功能。主治热咳、咽痛、音哑、急性扁挑体炎、小便不利和水肿等病。酸浆果实中含有人体需要的多种营养成分，其中钙的含量是西红柿的73.1倍、胡萝卜的13.8倍，维生素C的含量是西红柿的6.4倍、胡萝卜的5.4倍。由于其独特的风味和丰富的营养，利用酸浆加工而成的饮料、果酒、食品和药物具有良好的市场前景。
现今对酸浆药食的需求量逐年递增，为了满足市场的需要、提高酸浆产量，扩大酸浆种植势在必行。虽然采用外植体组织培养能够降低污染率，而且使得反季节育苗更为有效，但是目前的酸浆外植体组织培养技术存在诱导分化成苗率低的问题。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明的目的在于针对现有技术的不足，而提供一种用于诱导酸浆植株再生的培养基，使该培养基能够提高成苗率。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
一种用于诱导酸浆植株再生的培养基，以水为溶剂，包括以下浓度的组分：
NH4NO3 200～1800mg/L、MgSO4 150～400mg/L、Na2EDTA 20～40mg/L、FeSO4 10～35mg/L、H3BO3 1～10mg/L、ZnSO4 2～10mg/L、NaMoO4 0.1～0.3mg/L、CuSO4 0.01～0.03mg/L、CoCl2 0.01～0.03mg/L、肌醇2～120mg/L、烟酸0.05～0.8mg/L、盐酸吡哆醇0.05～0.8mg/L、硫胺素0.05～1.2mg/L、甘氨酸0.5～2.5mg/L、6-苄基氨基嘌呤0.05～1.5mg/L、萘乙酸0.01～0.05mg/L、蔗糖20～40g/L和琼脂3～10g/L。
优选的，还包括K2SO4 950～1100mg/L、KNO3 900～2000mg/L、CaCl2 200～460mg/L、KH2PO4 150～200mg/L、KI 0.5～1.0mg/L、MnSO4 15～25mg/L和赤霉素0.5～1.5mg/L中的一种或几种。
优选的，还包括NH4H2PO4 100～130mg/L和/或Ca(NO3)2 200～250mg/L。
本发明提供了上述培养基诱导酸浆再生植株的方法，包括：
将酸浆当年嫩茎预处理后置于上述培养基内培养，得到再生酸浆植株。
优选的，所述预处理包括以下步骤：
1)将酸浆当年嫩茎剪至3～5cm长，依次用清洗剂和流水冲洗；
2)将所述步骤1)冲洗后的酸浆嫩茎消毒，具体为依次用酒精溶液浸泡、无菌水冲洗、消毒剂消毒和无菌水再次冲洗；
3)将所述步骤2)消毒后酸浆嫩茎的茎段两端去掉。
优选的，所述步骤1)中的清洗剂为去污剂或漂白粉，具体为将去污剂或漂白粉用水稀释后对酸浆当年嫩茎进行清洗；
所述流水冲洗的时间为40～70min。
优选的，所述步骤2)中的酒精溶液的体积百分含量为60～80％，所述酒精溶液浸泡的时间为5～15s。
优选的，所述培养在光照条件下进行，所述光照的条件为：光照的时间为12～14h/d，光照强度为15～20μmol/m2/s。
优选的，所述培养的温度为22～28℃。
本发明提供了一种用于诱导酸浆植株再生的培养基，以水为溶剂，包括以下浓度的组分：NH4NO3 200～1800mg/L、MgSO4 150～400mg/L、Na2EDTA 20～40mg/L、FeSO4 10～35mg/L、H3BO3 1～10mg/L、ZnSO4 2～10mg/L、NaMoO4 0.1～0.3mg/L、CuSO4 0.01～0.03mg/L、CoCl2 0.01～0.03mg/L、肌醇2～120mg/L、烟酸0.05～0.8mg/L、盐酸吡哆醇0.05～0.8mg/L、硫胺素0.05～1.2mg/L、甘氨酸0.5～2.5mg/L、6-苄基氨基嘌呤0.05～1.5mg/L、萘乙酸0.01～0.05mg/L、蔗糖20～40g/L、琼脂3～10g/L。采用本发明提供的培养基对酸浆进行诱导再生，培养基污染率为0～3％，酸浆当年嫩茎诱导分化成苗率为75～95％。
具体实施方式
本发明提供了一种用于诱导酸浆植株再生的培养基，能够提高酸浆植株的成苗率。所述培养基以水为溶剂，包括以下浓度的组分：NH4NO3 200～1800mg/L、MgSO4 150～400mg/L、Na2EDTA 20～40mg/L、FeSO4 10～35mg/L、H3BO3 1～10mg/L、ZnSO4 2～10mg/L、NaMoO4 0.1～0.3mg/L、CuSO4 0.01～0.03mg/L、CoCl2 0.01～0.03mg/L、肌醇2～120mg/L、烟酸0.05～0.8mg/L、盐酸吡哆醇0.05～0.8mg/L、硫胺素005～1.2mg/L、甘氨酸0.5～2.5mg/L、6-苄基氨基嘌呤0.05～1.5mg/L、萘乙酸0.01～0.05mg/L、蔗糖20～40g/L、琼脂3～10g/L；优选为NH4NO3 250～1750mg/L、MgSO4 200～350mg/L、Na2EDTA 22～38mg/L、FeSO412～32mg/L、H3BO3 1.5～8mg/L、ZnSO4 4～9mg/L、NaMoO4 0.15～0.25mg/L、CuSO4 0.01～0.03mg/L、CoCl2 0.01～0.03mg/L、肌醇5～110mg/L、烟酸0.1～0.7mg/L、盐酸吡哆醇0.1～0.7mg/L、硫胺素0.1～1.0mg/L、甘氨酸0.8～2.0mg/L、6-苄基氨基嘌呤0.1～1.2mg/L、萘乙酸0.02～0.04mg/L、蔗糖25～35g/L、琼脂4～8g/L；更优选为NH4NO3 300～1700mg/L、MgSO4220～340mg/L、Na2EDTA 25～32mg/L、FeSO4 15～28mg/L、H3BO3 2～7.5mg/L、ZnSO4 5～8mg/L、NaMoO4 0.2～0.25mg/L、CuSO4 0.01～0.03mg/L、CoCl2 0.01～0.03mg/L、肌醇10～105mg/L、烟酸0.15～0.65mg/L、盐酸吡哆醇0.15～0.65mg/L、硫胺素0.2～0.8mg/L、甘氨酸1.0～1.5mg/L、6-苄基氨基嘌呤0.2～1.0mg/L、萘乙酸0.03mg/L、蔗糖30g/L、琼脂6g/L。本发明对上述试剂的来源没有特殊限定，采用本领域技术人员常规选用的配制培养基的试剂即可。在本发明中，所述培养基以水为溶剂，优选为去离子水。
本发明提供的诱导酸浆植株再生的培养基优选还包括K2SO4 950～1100mg/L、KNO3900～2000mg/L、CaCl2 200～460mg/L、KH2PO4 150～200mg/L、KI 0.5～1.0mg/L、MnSO4 15～25mg/L和赤霉素0.5～1.5mg/L中的一种或几种。在本发明中，所述K2SO4、KNO3、CaCl2、KH2PO4、KI、MnSO4和赤霉素的含量优选为K2SO4 975～1050mg/L、KNO3 950～1950mg/L、CaCl2250～400mg/L、KH2PO4 125～180mg/L、KI 0.6～0.9mg/L、MnSO4 18～22mg/L和赤霉素0.8～1.2mg/L；更优选为K2SO4 1000mg/L、KNO3 1000～1900mg/L、CaCl2 280～350mg/L、KH2PO4150～160mg/L、KI 0.7～0.8mg/L、MnSO4 20mg/L和赤霉素1.0mg/L。本发明对上述试剂的来源没有特殊限定，采用本领域技术人员常规选用的饿配制培养基的试剂即可。
在本发明中，所述诱导酸浆植株再生的培养基优选还包括NH4H2PO4 100～130mg/L和/或Ca(NO3)2 200～250mg/L。所述NH4H2PO4和Ca(NO3)2的含量优选为NH4H2PO4 110～120mg/L和Ca(NO3)2 210～240mg/L；更优选为NH4H2PO4 115mg/L和Ca(NO3)2 230mg/L。本发明对上述试剂的来源没有特殊限定，采用本领域技术人员常规选用配制培养基的试剂即可。
在本发明中，对所述培养基的配制方法没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的培养基配制方法即可。
本发明还提供了利用上述技术方案所述培养基诱导酸浆再生植株的方法，包括：将酸浆当年嫩茎预处理后置于上述技术方案所述培养基内培养，得到再生酸浆植株。
在本发明中，对酸浆当年嫩茎预处理优选包括以下步骤：
1)将酸浆当年嫩茎剪至3～5cm长，依次用清洗剂和流水冲洗所述剪切得到的茎段；
2)将所述步骤1)冲洗后的酸浆茎段消毒，具体为依次用酒精溶液浸泡、无菌水冲洗、消毒剂消毒和无菌水再次冲洗；
3)将所述步骤2)消毒后酸浆嫩茎段的两端去掉。
在本发明中，将酸浆当年嫩茎剪至3～5cm长，优选为2～4cm长。
本发明对酸浆当年生嫩茎剪切得到的茎段依次用清洗剂和流水冲洗。在本发明中，所述清洗剂优选为去污粉或漂白粉。本发明对所述去污粉和漂白粉的来源没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的市售商品即可。本发明优选将去污粉和漂白粉用水稀释后对所述茎段进行清洗，对去污粉或漂白粉稀释的浓度没有特殊限定，采用本领域技术人员常规选用的浓度即可，如浓度为3％～5％。在本发明中，所述流水冲洗的时间为40～70min，优选为50～60min。
本发明将所述冲洗后的酸浆茎段消毒，所述消毒具体为依次用酒精溶液浸泡、无菌水冲洗、消毒剂消毒和无菌水再次冲洗。在本发明中，所述酒精溶液的体积百分含量优选为60～80％，更优选为70～78％，最优选为75％。在本发明中，所述酒精溶液浸泡的优选时间为5～15s，更优选为8～12s，最优选为10s。
在本发明中，所述无菌水冲洗的次数优选为1～5次，更优选为2～4次，最优选为3次。
在本发明中，所述消毒剂优选为氯化汞溶液或次氯酸钠溶液；当所述消毒剂为氯化汞溶液时，所述氯化汞在氯化汞溶液中的质量含量为0.5～1.5％，优选为0.8～1.2％，更优选为1.0％；所述氯化汞溶液的消毒的时间为4～12min，优选为5～10min，更优选为8min。当所述消毒剂为次氯酸钠溶液时，所述次氯酸钠早次氯酸钠溶液中的质量含量为1～3％，优选为1.5～2.5％，更优选为2.0％；所述次氯酸钠消毒的时间优选为5～15min，更优选为8～12min，最优选为10min。
在本发明中，采用无菌水再冲洗的次数优选为1～5次，更优选为2～4次，最优选为3次。
所述消毒后，本发明将所述消毒后的酸浆嫩茎段的两端去掉0.2～0.4cm，用于酸浆植株的诱导再生。
所述预处理后，本发明将得到的预处理茎段插入上述技术方案所述培养基中进行培养，得到再生酸浆植株。在本发明中，采用诱导酸浆植株再生的器皿为高白玻璃瓶，所述器皿的规格为240ml。在本发明中，所述预处理酸浆当年嫩茎在所述器皿上分布的密度为2-4个，优选为3-4个，更优选为3个。
在本发明中，所述培养在光照条件下进行，所述光照的条件优选为：光照的时间为12～14h/d，光照强度为15～20μmol/m2/s；更优选为：光照时间为13h/d，光照强度为16～18μmol/m2/s。
在本发明中，所述培养的温度为22～28℃，优选为23～27℃，更优选为24～26℃。
在本发明中，将所述酸浆当年嫩茎预处理后置于上述技术方案所述培养基内培养7～15天，得到再生酸浆植株。
下面结合实施例对本发明提供的一种用于诱导酸浆植株再生的培养基进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
取酸浆当年嫩茎剪至4cm，只留1片叶片，将漂白粉用水稀释后洗净酸浆当年嫩茎，流水冲洗60min，放入无菌操作台内用体积浓度为75％的酒精消毒8s，再用无菌水冲洗3次，再用质量浓度为1％的氯化汞消毒8min，再无菌水冲洗3次，蒸馏水浸泡30min，然后滤纸吸干水分，剪去茎段两端，放入再生培养基中培养，培养的条件为每天光照12h，光照的强度为20μmol/m2/s，培养的温度为28℃，培养15天即可获得酸浆再生植株。
培养基以水为溶剂，包括以下浓度的组分：NH4NO3 400mg/L、K2SO4 990mg/L、MgSO4370mg/L、KH2PO4 170mg/L、Na2EDTA 37.3mg/L、FeSO4 27.8mg/L、MnSO4 22.5mg/L、H3BO36.2mg/L、ZnSO4 8.6mg/L、NaMoO4 0.25mg/L、CuSO4 0.25mg/L、CoCl2 0.025mg/L、肌醇100mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、甘氨酸2.0mg/L、硫胺素1.0mg/L、6-苄基氨基嘌呤1.0mg/L、萘乙酸0.05mg/L蔗糖30h/L和琼脂6g/L。
采用本实施例的培养基和培养方法，得到的酸浆再生植株的株高为1.5～2.0cm，根长为0.5～1.0cm，根系数量为1～2，叶片数量为2～4，茎叶0.2～0.4cm，颜色为浅绿色，有部分叶片泛黄，培养基污染率为0，对酸浆当年嫩茎诱导分化成苗率为75～80％。
实施例2
取酸浆当年嫩茎剪至3cm，只留2片叶片，将去污粉用水稀释后洗净酸浆当年嫩茎，流水冲洗40min，放入无菌操作台内用体积浓度为80％的酒精消毒10s，再用无菌水冲洗3次，再用质量浓度为2％的次氯酸钠消毒10min，再无菌水冲洗3次，蒸馏水浸泡30min，然后滤纸吸干水分，剪去茎段两端，放入再生培养基中培养，培养的条件为每天光照14h，光照的强度为15μmol/m2/s，培养的温度为28℃，培养15天即可获得酸浆再生植株。
培养基以水为溶剂，包括以下浓度的组分：NH4NO3 1650mg/L、KNO3 1900mg/L、MgSO4 370mg/L、CaCl2 440mg/L、KH2PO4 170mg/L、Na2EDTA 37.3mg/L、FeSO4 27.8mg/L、KI 0.83mg/L、MnSO4 22.3mg/L、H3BO3 6.2mg/L、ZnSO4 8.6mg/L、NaMoO4 0.25mg/L、CuSO40.025mg/L、CoCl2 0.025mg/L、肌醇20mg/ml、烟酸0.5mg/ml、盐酸吡哆醇0.5mg/ml、甘氨酸2mg/ml、硫胺素0.1mg/ml、6-苄基氨基嘌呤1.0mg/L、萘乙酸0.05mg/L、蔗糖30g和琼脂6g/L。
采用本实施例的培养基和培养方法，得到的酸浆再生植株的株高为1.5～2.5cm，根长为1.0～1.5cm，根系数量为2～5，叶片数量为3～6，茎叶0.2～0.5cm，颜色均为浓绿色，有部分叶片泛黄，培养基污染率为3％，对酸浆当年嫩茎诱导分化成苗率为80～85％。
实施例3
取酸浆当年嫩茎剪至5cm，只留2片叶片，将漂白粉用水稀释后洗净酸浆当年嫩茎，流水冲洗70min，放入无菌操作台内用体积浓度为75％的酒精消毒10s，再用无菌水冲洗3次，再用质量浓度为2％的次氯酸钠消毒15min，再无菌水冲洗3次，蒸馏水浸泡30min，然后滤纸吸干水分，剪去茎段两端，放入再生培养基中培养，培养的条件为每天光照13h，光照的强度为18μmol/m2/s，培养的温度为26℃，培养10天即可获得酸浆再生植株。
培养基以水为溶剂，包括以下浓度的组分：NH4NO3 1650mg/L、KNO3 1900mg/L、MgSO4 370mg/L、CaCl2 440mg/L、KH2PO4 170mg/L、Na2EDTA 37.3mg/L、FeSO4 27.8mg/L、KI 0.83mg/L、MnSO4 22.3mg/L、H3BO3 6.2mg/L、ZnSO4 8.6mg/L、NaMoO4 0.25mg/L、CuSO40.025mg/L、CoCl2 0.025mg/L、肌醇20mg/ml、烟酸0.5mg/ml、盐酸吡哆醇0.5mg/ml、甘氨酸2mg/ml、硫胺素0.1mg/ml、6-苄基氨基嘌呤1.0mg/L、赤霉素1.0mg/L、萘乙酸0.05mg/L、蔗糖30g/L和琼脂6g/L。
采用本实施例的培养基和培养方法，得到的酸浆再生植株的株高为1.5～2.5cm，根长为1.0～1.5cm，根系数量为2～5，叶片数量为3～6，茎叶0.2～0.5cm，颜色均为浓绿色，有部分叶片泛黄，培养基污染率为1％，对酸浆当年嫩茎诱导分化成苗率为85～90％。
实施例4
取酸浆当年嫩茎剪至3cm，只留1片叶片，将漂白粉用水稀释后洗净酸浆当年嫩茎，流水冲洗70min，放入无菌操作台内用体积浓度为75％的酒精消毒10s，再用无菌水冲洗3次，再用质量浓度为2％的次氯酸钠消毒15min，再无菌水冲洗3次，蒸馏水浸泡30min，然后滤纸吸干水分，剪去茎段两端，放入再生培养基中培养，培养的条件为每天光照12h，光照的强度为15μmol/m2/s，培养的温度为26℃，培养7天即可获得酸浆再生植株。
培养基以水为溶剂，包括以下浓度的组分：NH4NO3 825mg/L、KNO3 950mg/L、MgSO4185mg/L、CaCl2 220mg/L、NH4H2PO4 115mg/L、CaNO3 236mg/L、Na2EDTA 37.3mg/L、FeSO427.8mg/L、KI 0.83mg/L、MnSO4 16.9mg/L、H3BO3 6.2mg/L、ZnSO4 8.6mg/L、NaMoO4 0.25mg/L、CuSO4 0.025mg/L、CoCl2 0.025mg/L、肌醇20mg/ml、烟酸0.5mg/ml、盐酸吡哆醇0.5mg/ml、甘氨酸2mg/ml、硫胺素0.1mg/ml、6-苄基氨基嘌呤1.0mg/L、赤霉素1.0mg/L、萘乙酸0.05mg/L、蔗糖30g/L和琼脂6g/L。
采用本实施例的培养基和培养方法，得到的酸浆再生植株的株高为2.5～3.5cm，根长为1.5～2.0cm，根系数量为3～5，叶片数量为10～15，茎叶0.3～0.5cm，培养基污染率为0，诱导分化成苗率为90～95％，并且分化苗生长健壮，茎叶粗壮，均呈现浓绿色。
由以上实施例可知，采用本发明提供的培养基，培养基的污染率为0～3％，成苗率为75～95％。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。