一种竹根七组织培养快速繁殖方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种植物繁殖方法，特别是一种竹根七组织培养快速繁殖方法。
【背景技术】
[0002]竹根七(Disporopsis fuscopicta Hance)，又名假万寿竹，为百合科竹根七属多年生植物，其干燥根茎供药用，具有养阴清肺、活血化瘀等功效。用于治疗阴虚肺燥、咳嗽咽干、产后虚劳、妇女干痨，对跌打损伤祛和骨折也有良好的治疗作用。竹根七生于林下或山谷中，主产广西、广东、福建、江西等地，因株型优美，也常作为园林绿化景观植物使用。
[0003]目前竹根七药材及种苗主要来源于野生资源，还没有人工繁育及人工种植技术的报道。为了防止竹根七野生资源遭到严重的认为破坏，保证竹根七资源的可持续利用，需要对竹根七进行种苗繁育技术研究，以保障大规模采挖后可以提供充足的种苗以资源更新的需要。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是提供一种竹根七组织培养快速繁殖方法，它能够快速繁殖出大量适合移栽的优良竹根七种苗、满足生产需要。
[0005]本发明通过以下技术方案达到上述目的:一种竹根七组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤:
[0006](1)外植体的选择与消毒:取竹根七健康植株新萌发的嫩芽作为外植体，依次用2v/v%洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15_30min、添加了 2_3滴吐温-20的100毫升0.1￥八％升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3_5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；
[0007](2)外植体初代诱导获得无菌试管苗:将步骤⑴得到的外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001uX，光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天，种子发芽后获得无菌试管苗，其中MS培养基中添加1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8 ;
[0008](3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为8_10小时/天的条件下培养30天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加0.5-4.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.1-ο.3mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-1.0mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。
[0009]本发明的突出优点在于:
[0010](1)采用生物技术对竹根七进行组织培养快速繁殖，在短时间内可培育出大量适合栽培种植的竹根七幼苗，保障竹根七种苗的增殖系数和种苗质量，实现规模化生产，满足生产上的需要。
[0011](2)采用本发明所述的培养方法得到的竹根七丛生芽增殖系数达到10-15倍，丛生芽健壮，接种到生根培养基后容易生根，生根率可达95%以上。
【具体实施方式】
[0012]下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明。
[0013]实施例1
[0014]本发明所述的竹根七组织培养快速繁殖方法的一个实例，包括以下步骤:
[0015](1)外植体的选择与消毒:取竹根七健康植株新萌发的嫩芽作为外植体，依次用2v/v% %洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15_30min、添加了 2_3滴吐温-20的100毫升0.1￥八％升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3_5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；
[0016](2)外植体初代诱导获得无菌试管苗:将步骤⑴得到的外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001uX，光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天，种子发芽后获得无菌试管苗，其中MS培养基中添加1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8 ;
[0017](3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为8_10小时/天的条件下培养30天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.lmg/L的吲哚乙酸IAA、0.lmg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，丛生芽增殖系数为6.8。
[0018]实施例2
[0019]本发明所述的竹根七组织培养快速繁殖方法的另一个实例，包括以下步骤:
[0020](1)外植体的选择与消毒:取竹根七健康植株新萌发的嫩芽作为外植体，依次用2v/v%洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15_30min、添加了 2_3滴吐温-20的100毫升0.1￥八％升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3_5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；
[0021 ] (2)外植体初代诱导获得无菌试管苗:将步骤(1)得到的外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001uX，光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天，种子发芽后获得无菌试管苗，其中MS培养基中添加1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8 ;
[0022](3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为8_10小时/天的条件下培养30天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加2.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.3mg/L的吲哚乙酸IAA、0.5mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，丛生芽增殖系数为9.5。
[0023]实施例3
[0024]本发明所述的竹根七组织培养快速繁殖方法的再一个实例，包括以下步骤:
[0025](1)外植体的选择与消毒:取竹根七健康植株新萌发的嫩芽作为外植体，依次用2v/v%洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15_30min、添加了 2_3滴吐温-20的100毫升0.1￥八％升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3_5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；
[0026](2)外植体初代诱导获得无菌试管苗:将步骤(1)得到的外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001uX，光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天，种子发芽后获得无菌试管苗，其中MS培养基中添加1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8 ;
[0027](3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为8_10小时/天的条件下培养30天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加4.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6_BA、0.2mg/L的吲哚乙酸ΙΑΑ、0.lmg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，丛生芽增殖系数为12.4。
[0028]实施例4
[0029]本发明所述的竹根七组织培养快速繁殖方法的又一个实例，包括以下步骤:
[0030](1)外植体的选择与消毒:取竹根七健康植株新萌发的嫩芽作为外植体，依次用2v/v%洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15_30min、添加了 2_3滴吐温-20的100毫升0.1￥八％升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3_5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；
[0031 ] (2)外植体初代诱导获得无菌试管苗:将步骤(1)得到的外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001uX，光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天，种子发芽后获得无菌试管苗，其中MS培养基中添加1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8 ;
[0032](3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为8_10小时/天的条件下培养30天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加3.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6_BA、0.2mg/L的吲哚乙酸ΙΑΑ、1.0mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，丛生芽增殖系数为15.7。
【主权项】
1.一种竹根七组织培养快速繁殖方法，其特征在于:该方法包括以下步骤: (1)外植体的选择与消毒:取竹根七健康植株新萌发的嫩芽作为外植体，依次用2v/v%洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加了 2_3滴吐温-20的100毫升0.1% ￥八％升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3_5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水； (2)外植体初代诱导获得无菌试管苗:将步骤(1)得到的外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天，种子发芽后获得无菌试管苗，其中MS培养基中添加1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8 ; (3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为8_10小时/天的条件下培养30天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加0.5-4.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.1-0.3mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-1.0mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。
【专利摘要】一种竹根七组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤：(1)取竹根七健康植株新萌发的嫩芽作为外植体进行消毒；(2)将消毒后的外植体置于MS基本培养基中诱导得到无菌试管苗；(3)将所述无菌试管苗置于MS繁殖培养基中进行试管苗快速繁殖培养获得丛生芽。采用本发明所述的培养方法得到的竹根七丛生芽增殖系数达到10-15倍，获得的组培苗生根率在95％以上，有效解决了竹根七的规模化育苗问题。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105265318
【申请号】CN201510782770
【发明人】熊建文, 蔡锦源, 韦剑锋, 易慧, 黄艳玲, 胡桂娟, 张彩云
【申请人】广西科技大学鹿山学院
【公开日】2016年1月27日
【申请日】2015年11月16日