专利名称：针对人核仁素的人单克隆抗体的制作方法
针对人核仁素的人单克隆抗体夺叉参考本申请要求2009年11月17日提交的美国临时专利申请序列号61/261，909的优先权，该申请通过引用全部纳入本文用于所有目的。有关联邦资助的研究的声明本申请在国立卫生研究院国立癌症研究所授予的美国政府基金号NCICA109254-04S1的资助下完成。美国政府可享有本发明的权利。发明背景
本发明一般涉及细胞生物学和免疫学领域。更具体地，本发明涉及人核仁素(NCL)的单克隆抗体的生产和使用相关的方法和组合物。抗体是一类称为“生物制品”的试剂。抗体来源可以是多克隆供给，例如人或马血清，或衍生自单克隆来源(单细胞克隆)。伴以控制和选择特异性抗原结合的技术能力，单克隆抗体已产生显著的治疗效果。但是，对某些靶标产生特异性抗体的难度限制了成功，且治疗与诊断试剂的潜力仍远未开发。开发用于人体治疗的单克隆抗体的障碍之一是需要“人源化”这类通常产生于小鼠、大鼠和兔的抗体。若未经人源化恒定区就将这类抗体给予人类患者，这些患者可能受“血清病”的折磨，意味着所述受体产生针对非人抗体序列的内源性免疫应答。科研动物中产生的人源化单克隆抗体可克服这一问题。但是，用于人源化抗体的时间和经济成本会相当可观。核仁素在人慢性淋巴细胞性白血病(CLL)细胞、急性骨髓性白血病(AML)细胞、一些形式的乳腺癌以及其他肿瘤的细胞表面表达。因此，核仁素构成有希望的肿瘤抗原，用作包括抗体在内的治疗剂革巴标。发明概述本发明的一方面提供能分泌结合人核仁素的抗体的永生化人B细胞的产生方法，其包括获取IgM-阳性人B细胞群体；将所述群体接触爱泼斯坦巴尔病毒(EBV)以使所述人B细胞永生化，接触细胞因子/生长因子/信号传导试剂混合物以诱导IgM向IgG的免疫球蛋白同种型类型转换；并在支持所述永生化和免疫球蛋白同种型类型转换的条件下培养细胞。在一种实施方式中，所述方法还包括选择表达针对人核仁素的抗体的永生化人B细胞。在另一实施方式中，进行的选择包括对永生化B细胞培养基上清液进行免疫测定。在另一实施方式中，细胞因子混合物含有递送辅助刺激信号给人B细胞的试剂。在另一实施方式中，细胞因子混合物含有抗-IgM F(ab，)2白介素(IL)-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、IL-13、INFa、BAFF、可溶性⑶40L。在另一实施方式中，IgM-阳性人B细胞群体从外周血、扁桃体骨髓、脾脏、淋巴结、脐带血、肝、单采血液成分操作或暗黄层获得。在另一实施方式中，所述方法还包括从步骤(d)的永生化人B细胞分离完整重链和/或轻链的编码核酸。在另一实施方式中，所述方法还包括从步骤(d)的永生化人B细胞分离重链和/或轻链抗原结合区的编码核酸。在另一实施方式中，所述方法还包括将所述核酸克隆入重链和/或轻链框架区的编码核酸中。在另一实施方式中，所述群体的接触还包括EBV浓缩步骤、感染中的离心步骤，或两者都有。在另一实施方式中，所述方法还包括在步骤(C)后冷冻所述人B细胞群体。在另一实施方式中，所述群体与细胞因子/生长因子/信号传导试剂混合物的接触在步骤(b) (ii)后约0-96小时进行。在另一实施方式中，所述群体与细胞因子/生长因子/信号传导试剂混合物的接触在步骤(b) (ii)后16-20小时进行。在另一实施方式中，所述群体有约50% -99%通过EBV感染而永生化。在另一实施方式中，所述群体有约95% -99%通过EBV感染而永生化。在另一实施方式中，表达人核仁素的抗体的永生化人B细胞的选择在感染后1-4周进行。在另一实施方式中，表达人核仁素的抗体的永生化人B细胞的选择在感染后2-3周进行。在另一实施方式中，表达人核仁素的抗体的永生化人B细胞的选择在解冻所保存的冷冻永生化B细胞后和/或在解冻所保存的由所述永生化B细胞所得冷冻培养基上清液后进行。在另一实施方式中，所述B细胞为抗原静息型(antigen nai\e )。在另一实施方式中，所述B细胞为抗原遭遇型(antigen experienced)。本发明的另一方面提供表达能结合人核仁素的IgG抗体的永生化人B细胞。在一种实施方式中，所述永生化人B细胞命名为T-OT1、V-3H11(3G5)、T-2D3、T-7G7 (1H9)、T-2H3、T-9F9、T-8G4 或 T-PIC6。 本发明的另一方面提供表达能结合SEQ ID No. 2所示蛋白的IgG抗体或其片段的永生化人B细胞。在一种实施方式中，所述IgG抗体是IgGl、IgG2、IgG3或IgG4抗体。在另一实施方式中，所述IgG抗体是IgGl抗体。在另一实施方式中,所述IgG抗体含有K轻链。在另一实施方式中，所述IgG抗体含有\轻链。在另一实施方式中，所述B细胞经EBV永生化。在另一实施方式中，所述抗体或其片段是单克隆抗体或其片段。在另一实施方式中，所述抗体或其片段对人基本无免疫原性。在另一实施方式中，所述抗体或其片段是人抗体或其片段。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少10%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少20%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少30%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少40%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少50%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少60%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少70%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少80%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少90%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少100%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与所述MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死MV4-11细胞群体的至少10%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与所述MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死MV4-11细胞群体的至少20%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与所述MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死MV4-11细胞群体的至少30%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与所述MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死MV4-11细胞群体的至少40%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与所述MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死MV4-11细胞群体的至少50%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与所述MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死MV4-11细胞群体的至少60%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与所述MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死MV4-11细胞群体的至少70%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与所述MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死MV4-11细胞群体的至少80%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与所述MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死MV4-11细胞群体的至少90%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与所述MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死MV4-11细胞群体的至少100%。在另一实施方式中，所述抗体或其片段结合人核仁素的RNA结合域。在另一实施方式中，所述抗体或其片段使人核仁素的RNA结合域失活。在另一实施方式中，所述分离的抗体或其片段诱发针对癌细胞的补体依赖性细胞毒性。在另一实施方式中，所述分离的抗体或其片段诱发针对癌细胞的非补体依赖性细胞毒性。在另一实施方式中，所述分离的抗体或其片段在接触时诱发癌细胞中的凋亡。在另一实施方式中，所述分离的抗体或其片段抑制或杀死AML癌细胞，CLL癌细胞或乳腺癌细胞。在另一实施方式中，所述分离的单克隆抗体或其片段降低癌细胞中的BCL-2水平。
本发明的另一方面提供表达能结合SEQ ID No. I所编码蛋白的IgG抗体或其片段的永生化人B细胞。在一种实施方式中，所述IgG抗体是IgGl、IgG2、IgG3或IgG4抗体。在另一实施方式中，所述IgG抗体是IgGl抗体。在另一实施方式中,所述IgG抗体含有K轻链。在另一实施方式中，所述IgG抗体含有\轻链。在另一实施方式中，所述B细胞经EBV永生化。在另一实施方式中，所述抗体或其片段是单克隆抗体或其片段。权利要求33所述的分离抗体或其片段，其中，所述抗体或其片段对人基本无免疫原性。在另一实施方式中，所述抗体或其片段是人抗体或其片段。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少10%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少20%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少30%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少40%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少50%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少60%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少70%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少80%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少90%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少100%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与所述MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死MV4-11细胞群体的至少10%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与所述MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死MV4-11细胞群体的至少20%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与所述MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死MV4-11细胞群体的至少30%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与所述MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死MV4-11细胞群体的至少40%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与所述MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死MV4-11细胞群体的至少50%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与所述MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死MV4-11细胞群体的至少60%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与所述MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死MV4-11细胞群体的至少70%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与所述MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死MV4-11细胞群体的至少80%。 在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与所述MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死MV4-11细胞群体的至少90%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与所述MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死MV4-11细胞群体的至少100%。在另一实施方式中，所述抗体或其片段结合人核仁素的RNA结合域。在另一实施方式中，所述抗体或其片段使人核仁素的RNA结合域失活。在另一实施方式中，所述分离的抗体或其片段诱发针对癌细胞的补体依赖性细胞毒性。在另一实施方式中，所述分离的抗体或其片段诱发针对癌细胞的非补体依赖性细胞毒性。在另一实施方式中，所述分离的抗体或其片段在接触时诱发癌细胞中的凋亡。在另一实施方式中，所述分离的抗体或其片段抑制或杀死AML癌细胞，CLL癌细胞或乳腺癌细胞。在另一实施方式中，所述分离的单克隆抗体或其片段降低癌细胞中的BCL-2水平。本发明的另一方面提供表达能结合含SEQ ID No. 4序列的蛋白的IgG抗体或其片段的永生化人B细胞。在一种实施方式中，所述IgG抗体是IgGl、IgG2、IgG3或IgG4抗体。在另一实施方式中，所述IgG抗体是IgGl抗体。在另一实施方式中,所述IgG抗体含有K轻链。在另一实施方式中，所述IgG抗体含有\轻链。在另一实施方式中，所述B细胞经EBV永生化。在另一实施方式中，权利要求33所述的分离抗体或其片段，其中，所述抗体或其片段是单克隆抗体或其片段。在另一实施方式中，所述抗体或其片段对人基本无免疫原性。在另一实施方式中，所述抗体或其片段是人抗体或其片段。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少10%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少20%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少30%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少40%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少50%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少60%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少70%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少80%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少90%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少100%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与所述MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死MV4-11细胞群体的至少10%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与所述MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死MV4-11细胞群体的至少20%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与所述MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死MV4-11细胞群体的至少30%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与所述MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死MV4-11细胞群体的至少40%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与所述MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死MV4-11细胞群体的至少50%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与所述MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死MV4-11细胞群体的至少60%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与所述MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死MV4-11细胞群体的至少70%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与所述MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死MV4-11细胞群体的至少80%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与所述MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死MV4-11细胞群体的至少90%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与所述MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死MV4-11细胞群体的至少100%。在另一实施方式中，所述抗体或其片段结合人核仁素的RNA结合域。在另一实施方式中，所述抗体或其片段使人核仁素的RNA结合域失活。 在另一实施方式中，所述分离的抗体或其片段诱发针对癌细胞的补体依赖性细胞毒性。在另一实施方式中，所述分离的抗体或其片段诱发针对癌细胞的非补体依赖性细胞毒性。在另一实施方式中，所述分离的抗体或其片段在接触时诱发癌细胞中的凋亡。在另一实施方式中，所述分离的抗体或其片段抑制或杀死AML癌细胞，CLL癌细胞或乳腺癌细胞。在另一实施方式中，所述分离的单克隆抗体或其片段降低癌细胞中的BCL-2水平。本发明的另一方面提供表达能结合SEQ ID No. 3所编码蛋白的IgG抗体或其片段的永生化人B细胞。在一种实施方式中，所述IgG抗体是IgGl、IgG2、IgG3或IgG4抗体。在另一实施方式中，所述IgG抗体是IgGl抗体。在另一实施方式中,所述IgG抗体含有K轻链。在另一实施方式中，所述IgG抗体含有\轻链。在另一实施方式中，所述B细胞经EBV永生化。在另一实施方式中，所述抗体或其片段是单克隆抗体或其片段。在另一实施方式中，所述抗体或其片段对人基本无免疫原性。在另一实施方式中，所述抗体或其片段是人抗体或其片段。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少10%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MV4-11细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MV4-11细胞群体的至少20%。在另一实施方式中，所述抗体或其片段结合人核仁素的RNA结合域。在另一实施方式中，所述抗体或其片段使人核仁素的RNA结合域失活。在另一实施方式中，所述分离的抗体或其片段诱发针对癌细胞的补体依赖性细胞毒性。在另一实施方式中，所述分离的抗体或其片段诱发针对癌细胞的非补体依赖性细胞毒性。在另一实施方式中，所述分离的抗体或其片段在接触时诱发癌细胞中的凋亡。在另一实施方式中，所述分离的抗体或其片段抑制或杀死AML癌细胞，CLL癌细胞或乳腺癌细胞。在另一实施方式中，所述分离的单克隆抗体或其片段降低癌细胞中的BCL-2水平。本发明的另一方面提供表达能特异性结合SEQ ID No. 4所示蛋白的分离的人单克隆抗体或其片段。在一种实施方式中，所述抗体或其片段是人抗体或其片段。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少10%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少20%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少30%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少40%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少50%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少60%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少70%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少80%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少90%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞群体和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少100%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与所述MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死 MV4-11细胞群体的至少10%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与所述MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死MV4-11细胞群体的至少20%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与所述MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死MV4-11细胞群体的至少30%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与所述MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死MV4-11细胞群体的至少40%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与所述MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死MV4-11细胞群体的至少50%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与所述MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死MV4-11细胞群体的至少60%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与所述MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死MV4-11细胞群体的至少70%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与所述MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死MV4-11细胞群体的至少80%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与所述MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死MV4-11细胞群体的至少90%。在另一实施方式中，当所述抗体或其片段与所述MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死MV4-11细胞群体的至少100%。在另一实施方式中，所述抗体或其片段结合人核仁素的RNA结合域。在另一实施方式中，所述抗体或其片段使人核仁素的RNA结合域失活。在另一实施方式中，所述分离的抗体或其片段诱发针对癌细胞的补体依赖性细胞毒性。在另一实施方式中，所述分离的抗体或其片段诱发针对癌细胞的非补体依赖性细胞毒性。在另一实施方式中，所述分离的抗体或其片段在接触时诱发癌细胞中的凋亡。在另一实施方式中，所述分离的抗体或其片段抑制或杀死AML癌细胞，CLL癌细胞或乳腺癌细胞。在另一实施方式中，所述分离的单克隆抗体或其片段降低癌细胞中的BCL-2水平。在本发明的另一方面提供特异性结合人核仁素蛋白的分离抗体或其片段，其中当所述抗体或其片段与MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少20%。在一种实施方式中，所述人核仁素的氨基酸序列包含SEQ ID No. 2。在另一实施方式中，所述抗体或其片段结合由SEQ ID No. 2的氨基酸残基1-283组成的氨基酸序列。在另一实施方式中，所述抗体或其片段是单克隆抗体或其片段。在另一实施方式中，所述抗体或其片段对人基本无免疫原性。在另一实施方式中，所述抗体或其片段是人抗体或其片段。在另一实施方式中，所述抗体或其片段结合人核仁素的RNA结合域。在另一实施方式中，所述抗体或其片段使人核仁素的RNA结合域失活。在另一实施方式中，所述分离的抗体或其片段连接诊断剂或治疗剂。在另一实施方式中，所述分离的抗体或其片段显示针对癌细胞的补体依赖性细胞毒性。在另一实施方式中，所述分离的抗体或其片段显示针对癌细胞的非补体依赖性细胞毒性。在另一实施方式中，所述分离的抗体或其片段在接触时诱发癌细胞中的凋亡。在另一实施方式中，所述抗体或其片段抑制或杀死AML癌细胞，CLL癌细胞或乳腺癌细胞。在另一实施方式中，所述分离的抗体或其片段降低癌细胞中的BCL-2水平。在另一实施方式中，所述抗体或其片段连接诊断剂。在另一实施方式中，所述诊断剂是放射性核素、荧光团、化学发光化合物、荧光化合物或酶。在另一实施方式中，所述抗体或其片段连接治疗剂。在另一实施方式中，所述治疗剂是放射性核素、毒素或化学治疗部分。本发明的另一方面提供特异性结合人核仁素蛋白的分离抗体或其片段，其中当所述抗体或其片段与MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死MV4-11细胞群体的至少 10-100%(例如，MV4-11 细胞群体的 10、20、30、40、50、60、70、80、90 或 100%)。在另一实施方式中，所述人核仁素的氨基酸序列包含SEQ ID No. 2。在另一实施方式中，所述抗体或其片段结合由SEQ ID No. 2的氨基酸残基1-283组成的氨基酸序列。在另一实施方式中，所述抗体或其片段是单克隆抗体或其片段。在另一实施方式中，所述抗体或其片段对人基本无免疫原性。在另一实施方式中，所述抗体或其片段是人抗体或其片段。在另一实施方式中，所述抗体或其片段结合人核仁素的RNA结合域。在另一实施方式中，所述抗体或其片段使人核仁素的RNA结合域失活。在另一实施方式中，所述分离的抗体或其片段连接诊断剂或治疗剂。在另一实施方式中，所述分离的抗体或其片段显示针对癌细胞的补体依赖性细胞毒性。在另一实施方式中，所述分离的抗体或其片段显示针对癌细胞的非补体依赖性细胞毒性。在另一实施方式中，所述分离的抗体或其片段在接触时诱发癌细胞中的凋亡。在另一实施方式中，所述抗体或其片段抑制或杀死AML癌细胞，CLL癌细胞或乳腺癌细胞。在另一实施方式中，所述分离的抗体或其片段降低癌细胞中的BCL-2水平。在另一实施方式中，所述抗体或其片段连接诊断剂。在另一实施方式中，所述诊断剂是放射性核素、荧光团、化学发光化合物、荧光化合物或酶。在另一实施方式中，所述抗体或其片段连接治疗剂。在另一实施方式中，所述治疗剂是放射性核素、毒素或化学治疗部分。本发明的另一方面提供抗核仁素的组合物，所述组合物包含特异性结合人核仁素蛋白的一种或多种分离的抗体或其片段，其中当所述一种或多种抗体与MCF-7细胞和人AB血清孵育48-96小时(例如，48、72或96小时)，其杀死MCF-7细胞群体的至少10-100%(例如，10、20、30、40、50、60、70、80、90或100%)。在一种实施方式中，所述一种或多种分离的抗体或其片段是单克隆抗体或其片段。在另一实施方式中，所述一种或多种分离的抗体或其片段对人基本无免疫原性。在另一实施方式中，所述一种或多种分离的抗体或其片段是人抗体或其片段。在另一实施方式中，所述一种或多种分离的抗体或其片段结合人核仁素的RNA结合域。在另一实施方式中，所述一种或多种分离的抗体或其片段灭活人核仁素的RNA结合域。在另一实施方式中，所述人核仁素的氨基酸序列包含SEQ ID No. 2。在另一实施方式中，所述一种或多种分离的抗体或其片段结合SEQ ID No. 4。在另一实施方式中，所述抗核仁素组合物还包含放射性核素、荧光团、化学发光化合物、荧光化合物、酶、毒素或化疗齐U。在另一实施方式中，所述放射性核素、荧光团、化学发光化合物、荧光化合物、酶、毒素或化疗剂偶联所述一种或多种抗体或其片段。在另一实施方式中，所述抗核仁素组合物包含两种或更多种分离的抗体或其片段特异性结合所述人核仁素蛋白，其中当所述一种或多种抗体与MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少20%。在另一实施方式中，所述抗核仁素组合物包含3种或更多种分离的抗体或其片段特异性结合所述人核仁素蛋白，其中当所述一种或多种抗体与MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少20%。本发明的另一方面提供抑制或杀死在细胞表面表达核仁素的细胞的方法，所述方法包括使述细胞接触能结合人核仁素蛋白的抗体或其片段，其中当所述抗体或其片段与MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少20%。在一种实施方式中，所述抗体或其片段是人抗体或其片段。在另一实施方式中，所述抗体或其片段是单克隆抗体或其片段。在另一实施方式中，所述抗体或其片段结合SEQ ID No. 2。在另一实施方式中，所述抗体或其片段结合SEQ ID No. I所编码的氨基酸序列。在另一实施方式中，所述 抗体或其片段结合SEQ ID No. 4。在另一实施方式中，所述抗体或其片段结合SEQ ID No. 3所编码的氨基酸序列。在另一实施方式中，所述细胞是癌细胞。在另一实施方式中，所述癌细胞是肺癌细胞，乳腺癌细胞、前列腺癌细胞、结肠癌细胞、胰腺癌细胞、肾细胞癌细胞、卵巢癌细胞、白血病细胞、黑色素瘤细胞、成胶质细胞瘤细胞、神经母细胞瘤细胞、肉瘤细胞或胃癌细胞。在另一实施方式中，所述细胞是免疫细胞。在另一实施方式中，所述免疫细胞是淋巴细胞、树突细胞、外周血单核细胞、巨噬细胞或神经胶质细胞。在另一实施方式中，所述免疫细胞是活化免疫细胞。在另一实施方式中，所述免疫细胞是活化B细胞。在另一实施方式中，所述免疫细胞是记忆B细胞。在另一实施方式中，所述免疫细胞是活化T细胞。在另一实施方式中，所述免疫细胞是活化CD4+T细胞。在另一实施方式中，所述免疫细胞是活化CD8+T细胞。在另一实施方式中，所述细胞是血管平滑肌细胞或内皮细胞。在另一实施方式中，所述抗体或其片段连接治疗剂。在另一实施方式中，所述治疗剂是放射性核素、毒素或化疗剂。在另一实施方式中，所述抑制或杀死包括所述细胞中的凋亡。在另一实施方式中，所述细胞位于人类对象中，且所述接触包括将所述抗体或其片段给予所述对象。在另一实施方式中，所述方法还包括使所述细胞接触至少一种补充抑制剂或疗法。在另一实施方式中，所述补充疗法包括一种或多种手术、放射治疗、化学治疗、毒素治疗、免疫治疗、激素治疗、抗血管生成治疗或基因治疗或其它生物学疗法。在另一实施方式中，所述补充抑制剂包括一种或多种放射性核素、化疗剂、毒素免疫治疗剂、激素、核酸或多肽。在另一实施方式中，所述毒素是白喉毒素、外毒素A链、蓖麻毒素A链、相思豆毒素A链、蒴莲根毒素A链、a八叠球菌、油桐(Aleurites fordii)蛋白、石竹素蛋白、美洲商陆(Phytolaca americana)蛋白、美洲商陆抗病毒蛋白、苦瓜(Momordica charantia)抑制剂、湾果素、巴豆毒素、肥阜草(Sapaonaria officinalis)抑制剂、白树毒素、迈托毒素(mitogellin)、局限曲菌素、酹霉素、伊诺霉素、卡奇霉素或单端孢霉烯族毒素(tricothecenes)。在另一实施方式中,所述化疗剂是烷基化剂、蒽环类抗生素、细胞骨架扰乱剂、大环内酯、拓扑异构酶I的抑制剂、拓扑异构酶II的抑制剂、核苷或核苷酸类似物、前体类似物、肽抗生素、钼基试剂、类视黄醇、长春花生物碱，或其衍生物。在另一实施方式中，所述化疗剂是放线菌素D、全反式视黄酸阿扎胞苷、阿霉素硫唑嘌呤、博来霉素、喜树碱、卡钼、卡培他滨、顺钼、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、阿糖胞苷、道诺红菌素、多西他赛、多西氟尿啶、多柔比星、表阿霉素、大环内酯、依托泊苷、氟尿嘧啶、5-氟尿嘧啶(5FU)、吉西他滨、羟基脲、过氧化氢、伊达比星、伊马替尼、双氯乙基甲胺、巯基嘌呤、甲氨蝶呤、丝裂霉素C、盐酸米托蒽醌、奥沙利钼、紫杉醇、培美曲塞、替尼泊苷、替尼泊苷、硫鸟嘌呤、戊柔比星、长春碱、长春新碱、长春碱酰胺或长春瑞宾。本发明的另一方面提供检测在其表面表达核仁素的细胞的方法，所述方法包括使所述细胞接触免疫结合所述核仁素的人抗体或其片段。在一种实施方式中，所述细胞是癌细胞，免疫细胞或在其表面表达核仁素的血管平滑肌细胞，在其表面表达核仁素的内皮细胞，或病毒感染细胞。在另一实施方式中，所述细胞是在其表面表达核仁素的癌前期细胞。在另一实施方式中，所述癌细胞选自下组肺癌细胞，乳腺癌细胞、前列腺癌细胞、结肠癌细胞、胰腺癌细胞、肾细胞癌细胞、卵巢癌细胞、白血病细胞、黑色素瘤细胞、成胶质细胞瘤细胞、神经母细胞瘤细胞、肉瘤细胞和胃癌细胞。在另一实施方式中，所述免疫细胞是淋巴细胞、树突细胞、外周血单核细胞、巨噬细胞和神经胶质细胞。在另一实施方式中，所述细胞是免疫细胞。在另一实施方式中，所述免疫细胞是活化免疫细胞。在另一实施方式中，所述免疫细胞是活化B细胞。在另一实施方式中，所述免疫细胞是记忆B细胞。在另一实施方式中，所述免疫细胞是活化T细胞。在另一实施方式中，所述免疫细胞是活化CD4+T细胞。在 另一实施方式中，所述免疫细胞是活化CD8+T细胞。在另一实施方式中，所述细胞是血管平滑肌细胞或内皮细胞。在另一实施方式中，所述抗体或其片段连接诊断剂。在另一实施方式中，所述诊断剂是放射性核素、荧光团、化学发光化合物、荧光化合物、量子点、纳米颗粒或酶。在另一实施方式中，所述细胞位于人类对象中，且所述接触包括将所述抗体或其片段给予所述对象。在另一实施方式中，所述细胞位于分离的组织样品或细胞悬液中。本发明的另一方面提供哺乳动物中癌症的治疗或预防方法，所述方法包括给予所述哺乳动物治疗有效量的抗核仁素试剂和药学上可接受的载体；其中所述抗核仁素试剂包括抗核仁素抗体或其片段，且当所述抗体或其片段与MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时(例如，48、72或96小时)，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少10-100%(例如，10、20、30、40、50、60、70、80、90或100%)。在一种实施方式中，所述哺乳动物是人。在另一实施方式中，所述哺乳动物中治疗癌症包括治疗肿瘤缺氧。在另一实施方式中，所述哺乳动物中治疗癌症包括抑制肿瘤血管发生。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段对人基本无免疫原性。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段是人抗体或其片段。在另一实施方式中，所述抗核仁素单克隆抗体或其片段是单克隆抗体或其片段。在另一实施方式中，所述毒素是白喉毒素、外毒素A链、蓖麻毒素A链、相思豆毒素A链、蒴莲根毒素A链、a八叠球菌、油桐(Aleurites fordii)蛋白、石竹素蛋白、美洲商陆(Phytolaca americana)蛋白、美洲商陆抗病毒蛋白、苦瓜(Momordica charantia)抑制剂、湾果素、巴豆毒素、肥阜草(Sapaonaria officinalis)抑制剂、白树毒素、迈托毒素(mitogellin)、局限曲菌素、酌 霉素、伊诺霉素、卡奇霉素或单端孢霉烯族毒素(tricothecenes)。在另一实施方式中,所述化疗剂是烷基化剂、蒽环类抗生素、细胞骨架扰舌L剂、大环内酯、拓扑异构酶I的抑制剂、拓扑异构酶II的抑制剂、核苷或核苷酸类似物、前体类似物、肽抗生素、钼基试剂、类视黄醇、长春花生物碱，或其衍生物。在另一实施方式中，所述化疗剂是放线菌素D、全反式视黄酸阿扎胞苷、阿霉素硫唑嘌呤、博来霉素、喜树碱、卡钼、卡培他滨、顺钼、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、阿糖胞苷、道诺红菌素、多西他赛、多西氟尿啶、多柔比星、表阿霉素、大环内酯、依托泊苷、氟尿嘧啶、5-氟尿嘧啶(5FU)、吉西他滨、羟基脲、过氧化氢、伊达比星、伊马替尼、双氯乙基甲胺、巯基嘌呤、甲氨蝶呤、丝裂霉素C、盐酸米托蒽醌、奥沙利钼、紫杉醇、培美曲塞、替尼泊苷、替尼泊苷、硫鸟嘌呤、戊柔比星、长春碱、长春新碱、长春碱酰胺或长春瑞宾。本发明的另一方面提供哺乳动物中癌症的治疗或预防方法，所述方法包括给予所述哺乳动物治疗有效量的抗核仁素抗体或其片段，毒素或化疗剂，以及药学上可接受的载体；且当所述抗体或其片段与MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时(例如，48、72或96小时)，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少10-100% (例如，10、20、30、40、50、60、70、80、90或100%)。在一种实施方式中，所述哺乳动物是人。在另一实施方式中，所述哺乳动物中治疗癌症包括治疗肿瘤缺氧。在另一实施方式中，所述哺乳动物中治疗癌症包括抑制肿瘤血管发生。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段对人基本无免疫原性。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段是人抗体或其片段。在另一实施方式中，所述抗核仁素单克隆抗体或其片段是单克隆抗体或其片段。在另一实施方式中，所述毒素是白喉毒素、外毒素A链、蓖麻毒素A链、相思豆毒素A链、蒴莲根毒素A链、a八叠球菌、油桐蛋白、石竹素蛋白、美洲商陆蛋白、美洲商陆抗病毒蛋白、苦瓜抑制剂、泻果素、巴豆毒素、肥皂草抑制剂、白树毒素、迈托毒素、局限曲菌素、酹霉素、伊诺霉素、卡奇霉素或单端孢霉烯族毒素。在另一 实施方式中，所述化疗剂是烷基化剂、蒽环类抗生素、细胞骨架扰乱剂、大环内酯、拓扑异构酶I的抑制剂、拓扑异构酶II的抑制剂、核苷或核苷酸类似物、前体类似物、肽抗生素、钼基试剂、类视黄醇、长春花生物碱，或其衍生物。在另一实施方式中，所述化疗剂是放线菌素D、全反式视黄酸阿扎胞苷、阿霉素硫唑嘌呤、博来霉素、喜树碱、卡钼、卡培他滨、顺钼、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、阿糖胞苷、道诺红菌素、多西他赛、多西氟尿啶、多柔比星、表阿霉素、大环内酯、依托泊苷、氟尿嘧啶、5-氟尿嘧啶(5FU)、吉西他滨、羟基脲、过氧化氢、伊达比星、伊马替尼、双氯乙基甲胺、巯基嘌呤、甲氨蝶呤、丝裂霉素C、盐酸米托蒽醌、奥沙利钼、紫杉醇、培美曲塞、替尼泊苷、替尼泊苷、硫鸟嘌呤、戊柔比星、长春碱、长春新碱、长春碱酰胺或长春瑞宾。本发明的另一方面提供哺乳动物中癌症的治疗或预防方法，所述方法包括给予所述哺乳动物治疗有效量的抗核仁素抗体或其片段以及药学上可接受的载体，并用放射治疗进一步治疗处理所述哺乳动物，其中当所述抗体或其片段与MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时(例如，48、72或96小时)，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少10_100%(例如，10、20、30、40、50、60、70、80、90或100%)。在一种实施方式中，所述哺乳动物是人。在另一实施方式中，所述哺乳动物中治疗癌症包括治疗肿瘤缺氧。在另一实施方式中，所述哺乳动物中治疗癌症包括抑制肿瘤血管发生。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段对人基本无免疫原性。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段是人抗体或其片段。在另一实施方式中，所述抗核仁素单克隆抗体或其片段是单克隆抗体或其片段。在另一实施方式中，所述毒素是白喉毒素、外毒素A链、蓖麻毒素A链、相思豆毒素A链、蒴莲根毒素A链、a八叠球菌、油桐蛋白、石竹素蛋白、美洲商陆蛋白、美洲商陆抗病毒蛋白、苦瓜抑制剂、泻果素、巴豆毒素、肥皂草抑制剂、白树毒素、迈托毒素、局限曲菌素、酚霉素、伊诺霉素、卡奇霉素或单端孢霉烯族毒素。在另一实施方式中，所述化疗剂是烷基化剂、蒽环类抗生素、细胞骨架扰乱剂、大环内酯、拓扑异构酶I的抑制剂、拓扑异构酶II的抑制剂、核苷或核苷酸类似物、前体类似物、肽抗生素、钼基试剂、类视黄醇、长春花生物碱，或其衍生物。在另一实施方式中，所述化疗剂是放线菌素D、全反式视黄酸阿扎胞苷、阿霉素硫唑嘌呤、博来霉素、喜树碱、卡钼、卡培他滨、顺钼、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、阿糖胞苷、道诺红菌素、多西他赛、多西氟尿啶、多柔比星、表阿霉素、大环内酯、依托泊苷、氟尿嘧啶、5-氟尿嘧啶(5FU)、吉西他滨、羟基脲、过氧化氢、伊达比星、伊马替尼、双氯乙基甲胺、巯基嘌呤、甲氨蝶呤、丝裂霉素C、盐酸米托蒽醌、奥沙利钼、紫杉醇、培美曲塞、替尼泊苷、替尼泊苷、硫鸟嘌呤、戊柔比星、长春碱、长春新碱、长春碱酰胺或长春瑞宾。本发明的另一方面提供在哺乳动物中治疗或预防癌症的方法，所述方法包括给予所述哺乳动物治疗有效量的抗核仁素剂和药学上可接受的载体；其中所述抗核仁素剂包含特异性结合SEQ ID No. 4所示蛋白的抗核仁素抗体或其片段。在一种实施方式中，所述哺乳动物是人。在另一实施方式中，所述哺乳动物中治疗癌症包括治疗肿瘤缺氧。在另一实施方式中，所述哺乳动物中治疗癌症包括抑制肿瘤血管发生。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段对人基本无免疫原性。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段是人抗体或其片段。在另一实施方式中，所述抗核仁素单克隆抗体或其片段是单克隆抗体或其片段。在另一实施方式中，所述毒素是白喉毒素、外毒素A链、蓖麻毒素A链、相思豆毒素A链、蒴莲根毒素A链、a八叠球菌、油桐蛋白、石竹素蛋白、美洲商陆蛋白、美洲商陆抗病毒蛋白、苦瓜抑制剂、泻果素、巴豆毒素、肥皂草抑制剂、白树毒素、迈托毒素、局限曲菌素、酚霉素、伊诺霉素、卡奇霉素或单端孢霉烯族毒素。在另一实施方式中，所述化疗剂是烷基化剂、蒽环类抗生素、细胞骨架扰乱剂、大环内酯、拓扑异构酶I的抑制剂、拓扑异构酶II的抑制剂、核苷或核苷酸类似物、前体类似物、肽抗生素、钼基试剂、类视黄醇、长春花生物碱，或其衍生物。在另一实施方式中，所述化疗剂是放线菌素D、全反式视黄酸阿扎胞苷、阿霉素硫唑嘌呤、博来霉素、喜树碱、卡钼、卡培他滨、顺钼、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、阿糖胞苷、道诺红菌素、多西他赛、多西氟尿啶、多柔比星、表阿霉素、大环内酯、依托泊苷、氟尿嘧啶、5-氟尿嘧啶(5FU)、吉西他滨、羟基脲、过氧化氢、伊达比星、伊马替尼、双氯乙基甲胺、巯基嘌呤、甲氨蝶呤、丝裂霉素C、盐酸米托蒽醌、奥沙利钼、紫杉醇、培美曲塞、替尼泊苷、替尼泊苷、硫鸟嘌呤、戊柔比星、长春碱、长春新碱、长春碱酰胺或长春瑞宾。
本发明的另一方面提供了在哺乳动物中治疗或预防癌症的方法，所述方法包括给予所述哺乳动物治疗有效量的抗核仁素抗体或其片段，毒素或化疗剂，以及药学上可接受的载体，其中所述抗体或其片段特异性结合SEQ IDNo.4所示蛋白。在一种实施方式中，所述哺乳动物是人。在另一实施方式中，所述哺乳动物中治疗癌症包括治疗肿瘤缺氧。在另一实施方式中，所述哺乳动物中治疗癌症包括抑制肿瘤血管发生。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段对人基本无免疫原性。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段是人抗体或其片段。在另一实施方式中，所述抗核仁素单克隆抗体或其片段是单克隆抗体或其片段。在另一实施方式中，所述毒素是白喉毒素、外毒素A链、蓖麻毒素A链、相思豆毒素A链、蒴莲根毒素A链、a八叠球菌、油桐蛋白、石竹素蛋白、美洲商陆蛋白、美洲商陆抗病毒蛋白、苦瓜抑制剂、泻果素、巴豆毒素、肥皂草抑制剂、白树毒素、迈托毒素、局限曲菌素、酚霉素、伊诺霉素、卡奇霉素或单端孢霉烯族毒素。在另一实施方式中，所述化疗剂是烷基化剂、蒽环类抗生素、细胞骨架扰乱剂、大环内酯、拓扑异构酶I的抑制剂、拓扑异构酶II的抑制剂、核苷或核苷酸类似物、前体类似物、肽抗生素、钼基试剂、类视黄醇、长春花生物碱，或其衍生物。在另一实施方式中，所述化疗剂是放线菌素D、全反式视黄酸阿扎胞苷、阿霉素硫唑嘌呤、博来霉素、喜树碱、卡钼、卡培他滨、顺钼、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、阿糖胞苷、道诺红菌素、多西他赛、多西氟尿啶、多柔比星、表阿霉素、大环内酯、依托泊苷、氟尿嘧啶、5-氟尿嘧啶(5FU)、吉西他滨、羟基脲、过氧化氢、伊达比星、伊马替尼、双氯乙基甲胺、巯基嘌呤、甲氨蝶呤、丝裂霉素C、盐酸米托蒽醌、奥沙利钼、紫杉醇、培美曲塞、替尼泊苷、替尼泊苷、硫鸟嘌呤、戊柔比星、长春碱、长春新碱、长春碱酰胺或长春瑞宾。本发明的另一方面提供了在哺乳动物中治疗或预防癌症的方法，所述方法包括给予所述哺乳动物治疗有效量的抗核仁素抗体或其片段和药学上可接受的载体，其中所述抗体或其片段特异性结合SEQ ID No. 4所示蛋白。在一种实施方式中，所述哺乳动物是人。在另一实施方式中，所述哺乳动物中治疗癌症包括治疗肿瘤缺氧。在另一实施方式中，所述哺乳动物中治疗癌症包括抑制肿瘤血管发生。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段对人基本无免疫原性。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段是人抗体或其片段。在另一实施方式中，所述抗核仁素单克隆抗体或其片段是单克隆抗体或其片段。在另一实施方式中，所述毒素是白喉毒素、外毒素A链、蓖麻毒素A链、相思豆毒素A链、蒴莲根毒素A链、a八叠球菌、油桐蛋白、石竹素蛋白、美洲商陆蛋白、美洲商陆抗病毒蛋白、苦瓜抑 制剂、泻果素、巴豆毒素、肥皂草抑制齐U、白树毒素、迈托毒素、局限曲菌素、酚霉素、伊诺霉素、卡奇霉素或单端孢霉烯族毒素。在另一实施方式中，所述化疗剂是烷基化剂、蒽环类抗生素、细胞骨架扰乱剂、大环内酯、拓扑异构酶I的抑制剂、拓扑异构酶II的抑制剂、核苷或核苷酸类似物、前体类似物、肽抗生素、钼基试剂、类视黄醇、长春花生物碱，或其衍生物。在另一实施方式中，所述化疗剂是放线菌素D、全反式视黄酸阿扎胞苷、阿霉素硫唑嘌呤、博来霉素、喜树碱、卡钼、卡培他滨、顺钼、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、阿糖胞苷、道诺红菌素、多西他赛、多西氟尿啶、多柔比星、表阿霉素、大环内酯、依托泊苷、氟尿嘧啶、5-氟尿嘧啶(5FU)、吉西他滨、羟基脲、过氧化氢、伊达比星、伊马替尼、双氯乙基甲胺、巯基嘌呤、甲氨蝶呤、丝裂霉素C、盐酸米托蒽醌、奥沙利钼、紫杉醇、培美曲塞、替尼泊苷、替尼泊苷、硫鸟嘌呤、戊柔比星、长春碱、长春新碱、长春碱酰胺或长春瑞宾。本发明的另一方面提供哺乳动物中治疗自身免疫性疾病的方法，所述方法包括给予所述哺乳动物治疗有效量的抗核仁素试剂和药学上可接受的载体；其中所述抗核仁素试剂包括抗核仁素抗体或其片段，且当所述抗体或其片段与MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时(例如，48、72或96小时)，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少10-100% (例如，10、20、30、40、50、60、70、80、90或100%)。在一种实施方式中，所述自身免疫性疾病是斑秃、强直性脊柱炎、抗磷脂综合征(antiphospholipid syndrome)、自身免疫性艾迪森病、哮喘、肾上腺的自身免疫病、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫肝炎、自身免疫性卵巢炎和睾丸炎、自身免疫性血小板减少、贝切特综合征、大疱型类天疱疮、心肌病、口炎性腹泻-皮炎、慢性疲劳免疫功能障碍综合征(CFIDS)、慢性炎性脱髓鞘多神经病、丘-施二氏综合征、疤痕性类天疱疮、CREST综合征、冷凝集素病、克罗恩氏病、盘状狼疮、特发性混合型冷球蛋白血症、糖尿病(例如I型)、嗜酸细胞性筋膜炎(eosinophilic fascites)、纤维肌痛-纤维肌炎、肾小球肾炎、格拉夫斯病、格-巴二氏综合征、桥本甲状腺炎、亨-舍二氏紫癜、特发性肺纤维化、特发性/自身免疫血小板减少性紫癜(ITP)、IgA神经病、青少年关节炎、扁平苔藓、红斑狼疮、美尼尔综合征、混合型结缔组织病、多发性硬化、I型或免疫介导的糖尿病、重症肌无力、天疱疮相关疾病(如寻常性天疱疮)、骨髓增生异常综合征、恶性贫血、结节性多动脉炎、多软骨炎(POIychrondritis)、多腺体综合征、风湿性多肌痛、多肌炎和皮肌炎、原发性丙种球蛋白缺乏症、原发性胆汁性肝硬化、牛皮癣、牛皮癣关节炎、雷氏现象(Raynaud’ sphenomenon)、莱特尔综合征、类风湿性关节炎、结节病、硬皮病、斯耶格伦综合征、全身肌强直综合征、系统性红斑狼疮(SLE)、斯维特综合征、斯提耳病、红斑狼疮、高安动脉炎、暂时性动脉炎/巨细胞动脉炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、血管炎如疱疹样皮炎血管炎、白癜风和韦格纳肉芽肿病。炎性疾病的例子包括但不限于哮喘、脑炎、炎性肠病、慢性阻塞性肺病(COPD)、变应性疾病、感染性休克、肺纤维化、未分化脊椎关节病变、未分化关节病、关节炎、骨溶解炎症、移植物抗宿主病、荨麻疫或VKH综合征(Vogt-Koyanagi-Hareda syndrome)。在另一实施方式中，所述哺乳动物是人。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段对人基本无免疫原性。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段是人抗体或其片段。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段是单克隆抗体或其片段。本发明的另一方面提供在哺乳动物中治疗自身免疫性疾病的方法，所述方法包括给予所述哺乳动物治疗有效量的抗核仁素剂和药学上可接受载体；其中所述抗核仁素剂包含特异性结合SEQ ID No. 2所示蛋白的人抗核仁素抗体或其片段。在一种实施方式中，所述自身免疫性疾病是斑秃、强直性脊柱炎、抗磷脂综合征、自身免疫性艾迪森病、哮喘、肾上 腺的自身免疫病、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫肝炎、自身免疫性卵巢炎和睾丸炎、自身免疫性血小板减少、贝切特综合征、大疱型类天疱疮、心肌病、口炎性腹泻-皮炎、慢性疲劳免疫功能障碍综合征、慢性炎性脱髓鞘多神经病、丘-施二氏综合征、疤痕性类天疱疮、CREST综合征、冷凝集素病、克罗恩氏病、盘状狼疮、特发性混合型冷球蛋白血症、糖尿病(例如I型)、嗜酸细胞性筋膜炎、纤维肌痛-纤维肌炎、肾小球肾炎、格拉夫斯病、格-巴二氏综合征、桥本甲状腺炎、亨-舍二氏紫癜、特发性肺纤维化、特发性/自身免疫血小板减少性紫癜(ITP)、IgA神经病、青少年关节炎、扁平苔藓、红斑狼疮、美尼尔综合征、混合型结缔组织病、多发性硬化、I型或免疫介导的糖尿病、重症肌无力、天疱疮相关疾病(如寻常性天疱疮)、骨髓增生异常综合征、恶性贫血、结节性多动脉炎、多软骨炎、多腺体综合征、风湿性多肌痛、多肌炎和皮肌炎、原发性丙种球蛋白缺乏症、原发性胆汁性肝硬化、牛皮癣、牛皮癣关节炎、雷氏现象、莱特尔综合征、类风湿性关节炎、结节病、硬皮病、斯耶格伦综合征、全身肌强直综合征、系统性红斑狼疮(SLE)、斯维特综合征、斯提耳病、红斑狼疮、高安动脉炎、暂时性动脉炎/巨细胞动脉炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、血管炎如疱疹样皮炎血管炎、白癜风和韦格纳肉芽肿病。炎性疾病的例子包括但不限于哮喘、脑炎、炎性肠病、慢性阻塞性肺病(COPD)、变应性疾病、感染性休克、肺纤维化、未分化脊椎关节病变、未分化关节病、关节炎、骨溶解炎症、移植物抗宿主病、荨麻疹或VKH综合征。在另一实施方式中，所述哺乳动物是人。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段对人基本无免疫原性。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段是人抗体或其片段。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段是单克隆抗体或其片段。 本发明的另一方面提供在哺乳动物中治疗自身免疫性疾病的方法，所述方法包括给予所述哺乳动物治疗有效量的抗核仁素剂和药学上可接受载体；其中所述抗核仁素剂包含特异性结合SEQ ID No. 4所示蛋白的抗核仁素抗体或其片段。在一种实施方式中，所述自身免疫性疾病是斑秃、强直性脊柱炎、抗磷脂综合征、自身免疫性艾迪森病、哮喘、肾上腺的自身免疫病、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫肝炎、自身免疫性卵巢炎和睾丸炎、自身免疫性血小板减少、贝切特综合征、大疱型类天疱疮、心肌病、口炎性腹泻-皮炎、慢性疲劳免疫功能障碍综合征、慢性炎性脱髓鞘多神经病、丘-施二氏综合征、疤痕性类天疱疮、CREST综合征、冷凝集素病、克罗恩氏病、盘状狼疮、特发性混合型冷球蛋白血症、糖尿病(例如I型)、嗜酸细胞性筋膜炎、纤维肌痛-纤维肌炎、肾小球肾炎、格拉夫斯病、格-巴二氏综合征、桥本甲状腺炎、亨-舍二氏紫癜、特发性肺纤维化、特发性/自身免疫血小板减少性紫癜(ITP)、IgA神经病、青少年关节炎、扁平苔藓、红斑狼疮、美尼尔综合征、混合型结缔组织病、多发性硬化、I型或免疫介导的糖尿病、重症肌无力、天疱疮相关疾病(如寻常性天疱疮)、骨髓增生异常综合征、恶性贫血、结节性多动脉炎、多软骨炎、多腺体综合征、风湿性多肌痛、多肌炎和皮肌炎、原发性丙种球蛋白缺乏症、原发性胆汁性肝硬化、牛皮癣、牛皮癣关节炎、雷氏现象、莱特尔综合征、类风湿性关节炎、结节病、硬皮病、斯耶格伦综合征、全身肌强直综合征、系统性红斑狼疮、斯维特综合征、斯提耳病、红斑狼疮、高安动脉炎、暂时性动脉炎/巨细胞动脉炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、血管炎如疱疹样皮炎血管炎、白癜风和韦格纳肉芽肿病。炎性疾病的例子包括但不限于哮喘、脑炎、炎性肠病、慢性阻塞性肺病、变应性疾病、感染性休克、肺纤维化、未分化脊椎关节病变、未分化关节病、关节炎、骨溶解炎症、移植物抗宿主病、荨麻疹或VKH综合征。在另一实施方式中，所述哺乳动物是人。在另一实 施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段对人基本无免疫原性。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段是人抗体或其片段。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段是单克隆抗体或其片段。本发明的另一方面提供哺乳动物中治疗气道疾病的方法，所述方法包括给予所述哺乳动物治疗有效量的抗核仁素试剂和药学上可接受的载体；其中所述抗核仁素试剂包括抗核仁素抗体或其片段，且当所述抗体或其片段与MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时(48,72或96小时)，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少10-100%(10、20、30、40、50、60、70、80、90、100%)。在另一实施方式中，所述气道基本是哮喘、慢性阻塞性肺病、特发性肺纤维变性、或肺炎。在另一实施方式中，所述哺乳动物是人。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段对人基本无免疫原性。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段是人抗体或其片段。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段是人抗体或其片段。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段是单克隆抗体或其片段。本发明的另一方面提供在哺乳动物中治疗气道疾病的方法，所述方法包括给予所述哺乳动物治疗有效量的抗核仁素剂和药学上可接受的载体；其中所述抗核仁素剂包含特异性结合SEQ ID No. 2所示蛋白的人抗核仁素抗体或其片段。在另一实施方式中，所述气道基本是哮喘、慢性阻塞性肺病、特发性肺纤维变性、或肺炎。在另一实施方式中，所述哺乳动物是人。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段对人基本无免疫原性。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段是人抗体或其片段。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段是人抗体或其片段。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段是单克隆抗体或其片段。本发明的另一方面提供在哺乳动物中治疗气道疾病的方法，所述方法包括给予所述哺乳动物治疗有效量的抗核仁素剂和药学上可接受的载体；其中所述抗核仁素剂包含特异性结合SEQ ID No. 4所示蛋白的抗核仁素抗体或其片段。在另一实施方式中，所述气道基本是哮喘、慢性阻塞性肺病、特发性肺纤维变性、或肺炎。在另一实施方式中，所述哺乳动物是人。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段对人基本无免疫原性。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段是人抗体或其片段。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段是人抗体或其片段。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段是单克隆抗体或其片段。本发明的另一方面提供哺乳动物中治疗病毒感染细胞的方法，所述方法包括给予所述哺乳动物治疗有效量的抗核仁素试剂和药学上可接受的载体；其中所述抗核仁素试剂包括抗核仁素抗体或其片段，且当所述抗体或其片段与MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少20%。在另一实施方式中，所述病毒感染细胞感染了HIV病毒。在另一实施方式中，所述哺乳动物是人。在另一实施方式中，所述抗核仁素单克隆抗体或其片段对人基本无免疫原性。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段是人抗体或其片段。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段是单克隆抗体或其片段。本发明的另一方面提供在哺乳动物中治疗病毒感染细胞的方法，所述方法包括给予所述哺乳动物治疗有效量的抗核仁素剂和药学上可接受的载体；其中所述抗核仁素剂包 含特异性结合SEQ ID No. 2所示蛋白的人抗核仁素抗体或其片段。在另一实施方式中，所述病毒感染细胞感染了 HIV病毒。在另一实施方式中，所述哺乳动物是人。在另一实施方式中，所述抗核仁素单克隆抗体或其片段对人基本无免疫原性。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段是人抗体或其片段。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段是单克隆抗体或其片段。本发明的另一方面提供在哺乳动物中治疗病毒感染细胞的方法，所述方法包括给予所述哺乳动物治疗有效量的抗核仁素剂和药学上可接受的载体；其中所述抗核仁素剂包含特异性结合SEQ ID No. 4所示蛋白的抗核仁素抗体或其片段。在另一实施方式中，所述病毒感染细胞感染了 HIV病毒。在另一实施方式中，所述哺乳动物是人。在另一实施方式中，所述抗核仁素单克隆抗体或其片段对人基本无免疫原性。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段是人抗体或其片段。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段是单克隆抗体或其片段。本发明的另一方面提供哺乳动物中治疗或预防非癌病症或疾病的方法，所述病症或疾病的特征为核仁素的表面表达增加，所述方法包括给予所述哺乳动物治疗有效量的抗核仁素试剂和药学上可接受的载体；其中所述抗核仁素试剂包含抗核仁素抗体或其片段，且当所述抗体或其片段与MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时(48、72或96小时)，其杀死所述 MCF-7 细胞群体的至少 10-100%(例如，10、20、30、40、50、60、70、80、90 或 100%)。在一种实施方式中，以核仁素表面表达增加为特征的哺乳动物中所述病症或疾病是黄斑变性、糖尿病性视网膜病或炎性疾病。在另一实施方式中，所述哺乳动物是人。在另一实施方式中，所述抗核仁素单克隆抗体或其片段对人基本无免疫原性。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段是人抗体或其片段。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段是单克隆抗体或其片段。本发明的另一方面提供在哺乳动物中治疗或预防非癌病症或疾病的方法，所述病症或疾病的特征为核仁素的表面表达增加，所述方法包括给予所述哺乳动物治疗有效量的抗核仁素剂和药学上可接受的载体；其中所述抗核仁素剂包含特异性结合SEQ ID No. 2所示蛋白的人抗核仁素抗体或其片段。在一种实施方式中，以核仁素表面表达增加为特征的哺乳动物中所述病症或疾病是黄斑变性、糖尿病性视网膜病或炎性疾病。在另一实施方式中，所述哺乳动物是人。在另一实施方式中，所述抗核仁素单克隆抗体或其片段对人基本无免疫原性。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段是人抗体或其片段。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段是单克隆抗体或其片段。本发明的另一方面提供在哺乳动物中治疗或预防非癌病症或疾病的方法，所述病症或疾病的特征为核仁素的表面表达增加，所述方法包括给予所述哺乳动物治疗有效量的抗核仁素剂和药学上可接受的载体；其中所述抗核仁素剂包含特异性结合SEQ ID No. 4所示蛋白的抗核仁素抗体或其片段。在一种实施方式中，以核仁素表面表达增加为特征的哺乳动物中所述病症或疾病是黄斑变性、糖尿病性视网膜病或炎性疾病。在另一实施方式中，所述哺乳动物是人。在另一实施方式中，所述抗核仁素单克隆抗体或其片段对人基本无免疫原性。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段是人抗体或其片段。在另一实施方式中，所述抗核仁素抗体或其片段是单克隆抗体或其片段。本发明的另一方面提供当与MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，能杀死MCF-7细胞群体的至少50%的抗核仁素剂。在另一实施方式中，所述抗核仁素剂对人基本无免疫 原性。本发明的另一方面提供当与MCF-7细胞和MCFlOA细胞及热灭活血清孵育72或96小时，所杀死的MCF-7细胞超过所杀死的MCFlOA细胞的抗核仁素剂。在另一实施方式中，所述抗核仁素剂对人基本无免疫原性。本发明的另一方面提供当与MCF-7细胞和MCFlOA细胞及人AB血清孵育96小时，所杀死的MCF-7细胞超过所杀死的MCFlOA细胞的抗核仁素剂。在另一实施方式中，所述抗核仁素剂对人基本无免疫原性。本发明的另一方面提供能特异性结合SEQ ID No. 4所示蛋白并抑制或杀死在其细胞表面表达核仁素的一种或多种癌细胞的抗核仁素剂。在另一实施方式中，所述抗核仁素剂对人基本无免疫原性。本发明的另一方面提供通过检测一种或多种癌前细胞中细胞表面核仁素表达来确定对象患癌可能性的方法。本发明的另一方面提供前述权利要求中任一项所述的抗体，其中，所述抗体片段为Fab、Fab’、F(ab' )2 *Fv片段；双价抗体；线性抗体；单链抗体；或由抗体片段形成的多特异性抗体。本发明的另一方面提供前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述方法包括使用抗体片段，其中所述抗体片段为Fab、Fab’、F(ab’)2 *Fv片段；双价抗体；线性抗体；单链抗体；或由抗体片段形成的多特异性抗体。附图简要说明下列附图构成本说明书的一部分并纳入其中以进一步说明本发明的某些方面。可参照这些附图中的一幅或者多幅并结合本文提供的具体实施方式
的详述来更好地理解本发明。图I. CLL细胞相对正常B细胞的核仁素和Bcl-2蛋白过量表达。通过密度梯度离心从CLL患者和健康志愿者分离得到外周血淋巴细胞，并用磁激活细胞分选(MACS)⑶19免疫磁珠通过正向选择纯化B细胞。通过蛋白印迹法测定细胞的SlO提取物中核仁素和Bcl-2蛋白水平。结果相对用已知量核仁素和Bcl-2蛋白外标所得数值标准化。沿X轴的标记N和C分别指明来自个体对象的正常B细胞和CLL细胞。N=来自健康志愿者的⑶19+B细胞；C=CD 19+CLL 细胞。图2A-B. CLL相对正常B细胞和MCF-7相对MCF-10A细胞的核仁素亚细胞定位。核仁素的胞内定位利用小鼠抗人核仁素mAb和FITC-偶联抗小鼠IgG 二抗通过间接免疫荧光测定。核用碘化丙锭复染。图2A显示CLL和正常B细胞间的比较。图2B显示MCF-7和MCF-10A细胞间的比较。图3. MCF-7和MCF-10A细胞内核仁素的亚细胞定位。核仁素的胞内定位利用针对人核仁素的单克隆抗体和FITC-偶联抗小鼠IgG 二抗通过间接免疫荧光测定。核用碘化丙锭复染。细胞形态显示为DIC图像。结果为三次单独实验的代表性结果。图4.用抗核仁素抗体对AML-Ml患者的骨髓活组织检查(品红染色)显示强烈的核染色。散布的非白血病骨髓元素为阴性(暗蓝色复染)或仅显示核发红。放大倍数为40X。 图5A-B.人AML移入小鼠的脾切片和人乳腺癌细胞中的核仁素过量表达。(图5A)小鼠脾中存在两种明确的结节状人白血病浸润。所述白血病浸润为核仁素阳性(品红免疫染色)。周围小鼠脾淋巴细胞为核仁素免疫染色阴性(蓝色复染)。放大倍数为40X。(图5B)含50例石蜡包埋福尔马林固定的人乳腺肿瘤和相邻正常组织的组织阵列(BiomaxBR1006)用抗核仁素MabMS3(圣克鲁兹公司(Santa Cruz), 1:100)染色，采用Vectastain小鼠试剂盒、DAB底物，并以苏木精复染。代表性情况在Olympus CKX41上以IOOx放大倍数成像。图6. CLL和正常B细胞中bcl_2hnRNA和bcl_2mRNA的相对表达水平。用RT-PCR测定来自4名CLL患者的CLL细胞和来自4名健康志愿者的正常B细胞中的bcl2hnRNA和bcl2mRNA水平。结果表示为每组4个测定的均值SEM。*表示与正常B细胞相比P〈0. 001。图7. CLL和正常B细胞的提取物中bcl-2mRNA的衰减。5’ -加帽且多腺苷酸化的[32P]bcl-2-CR RNA和[32P]bcl-2-CR-ARE RNA和由来自4名患者的CLL细胞或来自3名人志愿者的正常B细胞制备的SlOO提取物一起孵育。在标明的时间取反应化合物的等分试样并通过PAGE和磷成像分析。结果表示为剩余全长RNA平均百分数土SEM与时间的函数。符号_〇-CLL细胞提取物+[32P]bcl-2-CR RNA ；- -，CLL细胞提取物+[32P]bcl-2-CR-ARE RNA ；- □-，正常 B 细胞提取物 +[32P]bcl-2_CR RNA ；- ■-，正常 B 细胞提取物 +[32P]bcl-2-CR-ARE RNA ；- ▲-，正常细胞提取物 +[32P]bcl-2_CR-ARE RNA+280nM 纯化重组核仁素。图8.体外生产人mAb。分离出扁桃体B细胞并用EBV有效永生化，然后诱导分化成产抗体细胞。将永生化B细胞库接种入多孔板，然后筛选含IgG细胞上清液与重组核仁素的结合。将反应细胞通过有限稀释克隆、扩增，并从培养上清液纯化IgG。将Ig基因亚克隆入生产细胞系用于重组IgG大型生产。参见PCT/US2008/072124。图9A-B.扁桃体B细胞库中的有效EBV感染和诱导分化。(图9A)用GFP标记EBV(EBfaV-GFP)感染24小时后的扁桃体B细胞的流式细胞分析，比较常规上清液感染后的对照(上图)或用浓缩病毒离心感染后的细胞(下图)。GFP荧光表示感染。(图9B)四种B95-8EBV永生化扁桃体B细胞库加或不加抗-IgM F(ab’ ) 2、重组可溶性CD40L和Baff培养。5天(上图)或15天(下图)后通过ELISA分析细胞上清液的IgM和IgG。
图10A-B. 8种产核仁素特异性人抗体的永生化B细胞系的分离。(图10A)通过ELISA筛选从6株产抗核仁素抗体的人B细胞系所得培养上清液与重组A l-283Nuc-(His)6核仁素(缺少1-283位N-末端氨基酸的核仁素)的结合，采用HRP标记的羊抗人IgG和发色底物来检测。通过450nm的分光光度法测定结合。将结果与用含人抗-HA IgG或小鼠抗核仁素MS3的培养上清液所得结果比较。(图10B)通过有限稀释克隆对8株产抗核仁素抗体的B细胞系的亚克隆。3周后，各96孔板的不足10%孔含有小的单克隆集落，然后通过ELISA检测其与上述重组核仁素的结合。通过测定450nm的吸光度评估孔中的核仁素结
八
口 o图11.人抗核仁素抗体的分离。通过ELISA(上图)和蛋白印迹法(下图)筛选来自永生化人B细胞库的上清液与重组Al-283Nuc-(His)6核仁素和/或由MV411白血病 细胞分离所得内源核仁素的IgG结合。图12. HuMAb与细胞表面核仁素的结合与对MV4-11白血病细胞的细胞毒性。(图12A)将抗核仁素HuMab或RituxanK(5 y g/ml)与MV4-11或正常扁桃体细胞一起冰上孵育30分钟，清洗，然后与APC标记的抗人IgG(美天旎公司(Miltenyi)) —起孵育。在FACSCaliber上进行流式细胞术，显示中位荧光强度(MFI)。图13.补体介导杀死MV4-11。将从产抗体B细胞系所得上清液与MV411细胞一起(50%v/v)在人血清的存在下(25%v/v)孵育16小时。对照用星形孢菌素(25iiM)或培养基(未处理)处理。然后用碘化丙锭和膜联蛋白V-FITC染色细胞，并用流式细胞术分析。图14A-C. MCF-7和MV4-11AML细胞的核仁素特异性杀死通过补体依赖性和非依赖性机制发生。(图14A)MCF-7细胞与抗核仁素HuMAb (2 u g/ml) 一起在人AB血清(+补体)或热灭活血清(_补体)的存在下孵育。在48-96小时，通过MTS试验测定活力。(图14B)MCF-7 和MCFlOA细胞与抗核仁素HuMAb (2 ii g/ml，上图；或 lmg/ml，下图)或AS1411 (20 y M)一起在人AB血清(+补体)或热灭活血清(_补体)的存在下孵育。通过MTS试验在72小时(上图)和96小时(下图)测定活力。(图1401^4-11细胞与抗核仁素1111祖13(211§/ml)或AS 1411 (20 PM) 一起在人AB血清(+补体)或热灭活血清(_补体)的存在下孵育。在48-96小时，通过MTS试验测定活力。
具体实施例方式本发明提供特异性结合人核仁素的人单克隆抗体及其使用方法。这些抗体针对在质膜中表达人核仁素的细胞如参与癌症、自身免疫性疾病、病毒性疾病的细胞显示细胞毒性。因此，所述抗体具有对某些形式的癌症和自身免疫性疾病的治疗潜力，并可用作诊断剂。I.核仁素A.概述核仁素是能结合DNA、RNA和质膜外表面的多功能蛋白。核仁素在胞内进行多种多样功能的能力与所述蛋白质内的多个结构域相关。其带负电的N-末端结构域通过诱导核仁染色质解凝缩作用调节rDNA转录(Srivastava等，1989),而中央球形结构域含有4个RNA结合域(RBD) (Serin等，1997)。已提出核仁素凭借其RBD及其富含RGG的C-末端结构域与前核糖体RNA的结合通过将正确折叠的rRNA和rRNA成熟与核糖体装配的其它必需组件汇集到一起而起到装配因子的作用(Ginisty等，2001)。核仁素也可在细胞质与核之间穿梭时参与核糖体向细胞质的输出(Srivastava和Pollard, 1999)。表I列出了所述核仁素的基因编码和蛋白质序列。表1 -核仁素序列
权利要求
1.能分泌结合人核仁素的抗体的永生化人B细胞的产生方法，所述方法包括 (a)获取IgM阳性人B细胞群； (b)使所述细胞群接触 (i)爱泼斯坦巴尔病毒(EBV)以使所述人B细胞永生化，和 ( )细胞因子/生长因子/信号转导剂混合物以诱导IgM向IgG免疫球蛋白同种型类别转换；以及 (c)将细胞在支持所述永生化和免疫球蛋白同种型类别转换的条件下培养。
2.如权利要求I所述的方法，其特征在于，所述方法还包括 (d)选择表达针对人核仁素的抗体的永生化人B细胞。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述选择包括对永生化B细胞培养基上清液进行免疫测定。
4.如权利要求I所述的方法，其特征在于，所述细胞因子混合物包含递送辅助刺激信号给人B细胞的试剂。
5.如权利要求I所述的方法，其特征在于，所述细胞因子混合物含有抗-IgMF(ab’)2白介素(IL)-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、IL-13、INFa、BAFF、可溶性 CD40L。
6.如权利要求I所述的方法，其特征在于，所述IgM-阳性人B细胞群体从外周血、扁桃体骨髓、脾脏、淋巴结、脐带血、肝、单采血液成分操作或暗黄层获得。
7.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述方法还包括从步骤(d)的永生化人B细胞分离完整重链和/或轻链的编码核酸。
8.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述方法还包括从步骤(d)的永生化人B细胞分离重链和/或轻链抗原结合区的编码核酸。
9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述方法还包括将所述核酸克隆入重链和/或轻链框架区的编码核酸中。
10.如权利要求I所述的方法，其特征在于，所述步骤(b)还包括EBV浓缩步骤、感染中的离心步骤，或两者都有。
11.如权利要求I所述的方法，其特征在于，所述方法还包括在步骤(C)后冷冻所述人B细胞群体。
12.如权利要求I所述的方法，其特征在于，在步骤(b)(ii)后约0-96小时进行步骤(b) (ii)。
13.如权利要求12所述的方法，其特征在于，在步骤(b)(ii)后约16-20小时进行步骤(b)(ii)。
14.如权利要求I所述的方法，其特征在于，所述群体有约50%-99%通过EBV感染而永生化。
15.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述群体有约95%-99%通过EBV感染而永生化。
16.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(d)在感染后1-4周发生。
17.如权利要求16所述的方法，其特征在于，步骤(d)在感染后2-3周发生。
18.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(d)发生于保存的冷冻永生化B细胞解冻后，和/或保存的来自所述永生化B细胞的冷冻培养基上清液解冻后。
19.如权利要求I所述的方法，其特征在于，所述B细胞为抗原静息型。
20.如权利要求I所述的方法，其特征在于，所述B细胞为抗原遭遇型。
21.一种永生化人B细胞，所述细胞表达能结合人核仁素的IgG抗体。
22.—种永生化人B细胞，所述细胞表达能结合SEQ ID No. 2所示蛋白的IgG抗体。
23.—种永生化人B细胞，所述细胞表达能结合SEQ ID No. I所编码蛋白的IgG抗体。
24.一种永生化人B细胞，所述细胞表达能结合含SEQ ID No. 4的蛋白的IgG抗体。
25.—种永生化人B细胞，所述细胞表达能结合SEQ ID No. 3所编码蛋白的IgG抗体。
26.如权利要求21-25中任一项所述的永生化人B细胞，其特征在于，所述IgG抗体是IgGU IgG2、IgG3 或 IgG4 抗体。
27.如权利要求21-25中任一项所述的永生化人B细胞，其特征在于，所述IgG抗体是IgGl抗体。
28.如权利要求21-25中任一项所述的永生化人B细胞，其特征在于，所述IgG抗体包含K轻链。
29.如权利要求21-25中任一项所述的永生化人B细胞，其特征在于，所述IgG抗体包含λ轻链。
30.如权利要求21-25中任一项所述的永生化人B细胞，其中所述B细胞经EBV永生化。
31.如权利要求21所述的永生化人B细胞，其命名为T-OT1、V-3H11(3G5)、T-2D3、T-7G7 (1H9)、T-2H3、T-9F9、T-8G4 或 T-P1C6。
32.—种永生化人B细胞，保藏为以下保藏号__，分别命名为克隆 I、3H11 (3G5)、2D3、7G7 (1H9)、2H3、9F9、8G4或P1C6，且于2010年11月17日保藏到美国典型培养物保藏中心。
33.一种分离的抗体或其片段，其由权利要求21-25中所述的细胞产生。
34.如权利要求33所述的分离抗体或其片段，其特征在于，所述抗体或其片段是单克隆抗体或其片段。
35.如权利要求33所述的分离抗体或其片段，其特征在于，所述抗体或其片段对人基本无免疫原性。
36.如权利要求33所述的分离抗体或其片段，其特征在于，所述抗体或其片段是人抗体或其片段。
37.一种分离的人单克隆抗体或其片段，其能特异性结合SEQ ID No. 4所示蛋白。
38.如权利要求33-37所述的分离抗体或其片段，其特征在于，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少20%。
39.如权利要求33-37所述的分离抗体或其片段，其特征在于，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞和人AB血清孵育48小时，其杀死所述MV4-11细胞群体的至少20%。
40.如权利要求33-37所述的分离抗体或其片段，其特征在于，所述抗体或其片段结合人核仁素的RNA结合域。
41.如权利要求33-37所述的分离抗体或其片段，其特征在于，所述抗体或其片段灭活人核仁素的RNA结合域。
42.如权利要求33-37所述的分离抗体或其片段，其特征在于，所述分离抗体或其片段诱导针对癌细胞的补体依赖性细胞毒性。
43.如权利要求33-37所述的分离抗体或其片段，其特征在于，所述分离抗体或其片段诱导针对癌细胞的非补体依赖性细胞毒性。
44.如权利要求33-37所述的分离抗体或其片段，其特征在于，所述分离抗体或其片段在接触时诱导癌细胞的凋亡。
45.如权利要求33-37所述的分离抗体或其片段，其特征在于，所述分离抗体或其片段抑制或杀死AML癌细胞、CLL癌细胞或乳腺癌细胞。
46.如权利要求33-37所述的分离抗体或其片段，其特征在于，所述分离的单克隆抗体或其片段降低癌细胞中的BCL-2水平。
47.一种特异性结合人核仁素蛋白的分离抗体或其片段，其特征在于，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞和人AB血清一起孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少20%。
48.一种特异性结合人核仁素蛋白的分离抗体或其片段，其特征在于，当所述抗体或其片段与MCF-7细胞和人AB血清一起孵育48小时，其杀死所述MV4-11细胞群体的至少20%。
49.如权利要求47或48所述的抗体或其片段，其特征在于，所述人核仁素的氨基酸序列包含 SEQ ID No. 2。
50.如权利要求47或48所述的抗体或其片段，其特征在于，所述抗体或其片段结合由SEQ ID No. 2的氨基酸残基1-283组成的氨基酸序列。
51.如权利要求47或48所述的抗体或其片段，其特征在于，所述抗体或其片段是单克隆抗体或其片段。
52.如权利要求47或48所述的抗体或其片段，其特征在于，所述抗体或其片段对人基本无免疫原性。
53.如权利要求47或48所述的抗体或其片段，其特征在于，所述抗体或其片段是人抗体或其片段。
54.如权利要求47或48所述的抗体或其片段，其特征在于，所述抗体或其片段结合人核仁素的RNA结合域。
55.如权利要求47或48所述的抗体或其片段，其特征在于，所述抗体或其片段灭活人核仁素的RNA结合域。
56.如权利要求47或48所述的抗体或其片段，其特征在于，所述分离抗体或其片段连接有诊断剂或治疗剂。
57.如权利要求47或48所述的抗体或其片段，其特征在于，所述分离抗体或其片段显示针对癌细胞的补体依赖性细胞毒性。
58.如权利要求47或48所述的抗体或其片段，其特征在于，所述分离抗体或其片段显示针对癌细胞的非补体依赖性细胞毒性。
59.如权利要求47或48所述的抗体或其片段，其特征在于，所述分离抗体或其片段在接触时诱导癌细胞的凋亡。
60.如权利要求47或48所述的抗体或其片段，其特征在于，所述抗体或其片段抑制或杀死AML癌细胞、CLL癌细胞或乳腺癌细胞。
61.如权利要求47或48所述的抗体或其片段，其特征在于，所述分离抗体或其片段降低癌细胞中的BCL-2水平。
62.如权利要求47或48所述的抗体或其片段，其特征在于，所述抗体或其片段连接有诊断剂。
63.如权利要求62所述的抗体或其片段，其特征在于，所述诊断剂是放射性核素、荧光团、化学发光化合物、荧光化合物或酶。
64.如权利要求47或48所述的抗体或其片段，其特征在于，所述抗体或其片段连接有治疗剂。
65.如权利要求64所述的抗体或其片段，其特征在于，所述治疗剂是放射性核素、毒素或化疗部分。
66.一种抗核仁素组合物，所述抗核仁素组合物包含能特异性结合所述人核仁素蛋白的一种或多种分离的抗体或其片段，其中当所述一种或多种抗体或其片段与MCF-7细胞和人AB血清一起孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少20%。
67.如权利要求66所述的抗核仁素组合物，其特征在于，所述一种或多种分离抗体或其片段是单克隆抗体或其片段。
68.如权利要求66所述的抗核仁素组合物，其特征在于，所述一种或多种分离抗体或其片段对人基本无免疫原性。
69.如权利要求66所述的抗核仁素组合物，其特征在于，所述一种或多种分离抗体或其片段是人抗体或其片段。
70.如权利要求66所述的抗核仁素组合物，其特征在于，所述一种或多种分离抗体或其片段结合人核仁素的RNA结合域。
71.如权利要求66所述的抗核仁素组合物，其特征在于，所述一种或多种分离抗体或其片段灭活人核仁素的RNA结合域。
72.如权利要求47或48所述的抗体或其片段，其特征在于，所述人核仁素的氨基酸序列包含 SEQ ID No. 2。
73.如权利要求66所述的抗核仁素组合物，其特征在于，所述一种或多种分离抗体或其片段结合SEQ ID No. 4。
74.如权利要求66所述的抗核仁素组合物，其特征在于，还包含放射性核素、荧光团、化学发光化合物、荧光化合物、酶、毒素或化疗剂。
75.如权利要求66所述的抗核仁素组合物，其特征在于，所述放射性核素、荧光团、化学发光化合物、荧光化合物、酶、毒素或化疗剂偶联所述一种或多种分离抗体或其片段。
76.如权利要求66所述的抗核仁素组合物，其特征在于，所述抗核仁素组合物包含两种或更多种特异性结合所述人核仁素蛋白的分离抗体或其片段，其中当所述一种或多种抗体或其片段与MCF-7细胞和人AB血清一起孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少 20%ο
77.如权利要求66所述的抗核仁素组合物，其特征在于，所述抗核仁素组合物包含3种或更多种特异性结合所述人核仁素蛋白的分离抗体或其片段，其中当所述一种或多种抗体或其片段与MCF-7细胞和人AB血清一起孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少20%。
78.—种抑制或杀灭在细胞表面表达核仁素的细胞的方法，所述方法包括使所述细胞接触能结合人核仁素蛋白的抗体或其片段，其中当所述抗体或其片段与MCF-7细胞和人AB血清一起孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少20%。
79.如权利要求78所述的方法，其特征在于，所述抗体或其片段是人抗体或其片段。
80.如权利要求78所述的方法，其特征在于，所述抗体或其片段是单克隆抗体或其片段。
81.如权利要求78所述的方法，其特征在于，所述抗体或其片段结合SEQIDNo. 2。
82.如权利要求78所述的方法，其特征在于，所述抗体或其片段结合SEQIDNo. I编码的氨基酸序列。
83.如权利要求78所述的方法，其特征在于，所述抗体或其片段结合SEQIDNo. 4。
84.如权利要求78所述的方法，其特征在于，所述抗体或其片段结合SEQIDNo. 3编码的氨基酸序列。
85.如权利要求78所述的方法，其特征在于，所述细胞是癌细胞。
86.如权利要求78所述的方法，其特征在于，所述癌细胞是肺癌细胞，乳腺癌细胞、前列腺癌细胞、结肠癌细胞、胰腺癌细胞、肾细胞癌细胞、卵巢癌细胞、白血病细胞、黑色素瘤细胞、成胶质细胞瘤细胞、神经母细胞瘤细胞、肉瘤细胞或胃癌细胞。
87.如权利要求78所述的方法，其特征在于，所述细胞是免疫细胞。
88.如权利要求87所述的方法，其特征在于，所述免疫细胞是淋巴细胞、树突细胞、夕卜周血单核细胞、巨噬细胞或神经胶质细胞。
89.如权利要求78-88所述的方法，其特征在于，所述抗体或其片段连接有治疗剂。
90.如权利要求89所述的方法，其特征在于，所述治疗剂是放射性核素、毒素或化疗剂。
91.如权利要求78所述的方法，其特征在于，所述抑制或杀死包括诱导所述细胞中的凋亡。
92.如权利要求78所述的方法，其特征在于，所述细胞位于人类对象中，且所述接触包括将所述抗体或其片段给予所述对象。
93.如权利要求78所述的方法，其特征在于，所述方法还包括使所述细胞接触至少一种补充抑制剂或疗法。
94.如权利要求93所述的方法，其特征在于，所述补充疗法包括一种或多种手术、放射治疗、化学治疗、毒素治疗、免疫治疗、激素治疗、抗血管生成治疗或基因治疗或其它生物学疗法。
95.如权利要求93所述的方法，其特征在于，所述补充抑制剂包括一种或多种放射性核素、化疗剂、毒素免疫治疗剂、激素、核酸或多肽。
96.如权利要求95所述的方法，其特征在于，所述毒素是白喉毒素、外毒素A链、蓖麻毒素A链、相思豆毒素A链、蒴莲根毒素A链、α八叠球菌、油桐蛋白、石竹素蛋白、美洲商陆蛋白、美洲商陆抗病毒蛋白、苦瓜抑制剂、泻果素、巴豆毒素、肥皂草抑制剂、白树毒素、迈托毒素、局限曲菌素、酹霉素、伊诺霉素、卡奇霉素或单端孢霉烯族毒素。
97.如权利要求95所述的方法，其特征在于，所述化疗剂是烷基化剂、蒽环类抗生素、细胞骨架扰乱剂、大环内酯、拓扑异构酶I的抑制剂、拓扑异构酶II的抑制剂、核苷或核苷酸类似物、前体类似物、肽抗生素、钼基试剂、类视黄醇、长春花生物碱，或其衍生物。
98.如权利要求95所述的方法，其特征在于，所述化疗剂是放线菌素D、全反式视黄酸阿扎胞苷、阿霉素硫唑嘌呤、博来霉素、喜树碱、卡钼、卡培他滨、顺钼、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、阿糖胞苷、道诺红菌素、多西他赛、多西氟尿啶、多柔比星、表阿霉素、大环内酯、依托泊苷、氟尿嘧啶、5-氟尿嘧啶(5FU)、吉西他滨、羟基脲、过氧化氢、伊达比星、伊马替尼、双氯乙基甲胺、巯基嘌呤、甲氨蝶呤、丝裂霉素C、盐酸米托蒽醌、奥沙利钼、紫杉醇、培美曲塞、替尼泊苷、硫鸟嘌呤、戊柔比星、长春碱、长春新碱、长春碱酰胺或长春瑞宾。
99.一种检测在其表面表达核仁素的细胞的方法，所述方法包括使所述细胞接触免疫结合所述核仁素的人抗体或其片段。
100.如权利要求99所述的方法，其特征在于，所述细胞是癌细胞，免疫细胞或在其表面表达核仁素的血管平滑肌细胞，在其表面表达核仁素的内皮细胞，或病毒感染细胞。
101.如权利要求99所述的方法，其特征在于，所述细胞是在其表面表达核仁素的癌前细胞。
102.如权利要求99所述的方法，其特征在于，所述癌细胞选自下组肺癌细胞，乳腺癌细胞、前列腺癌细胞、结肠癌细胞、胰腺癌细胞、肾细胞癌细胞、卵巢癌细胞、白血病细胞、黑色素瘤细胞、成胶质细胞瘤细胞、神经母细胞瘤细胞、肉瘤细胞和胃癌细胞。
103.如权利要求99所述的方法，其特征在于，所述免疫细胞是淋巴细胞、树突细胞、夕卜周血单核细胞、巨噬细胞和神经胶质细胞。
104.如权利要求99所述的方法，其特征在于，所述细胞是免疫细胞。
105.如权利要求99所述的方法，其特征在于，所述免疫细胞是活化的免疫细胞。
106.如权利要求99所述的方法，其特征在于，所述免疫细胞是活化的B细胞。
107.如权利要求99所述的方法，其特征在于，所述免疫细胞是记忆B细胞。
108.如权利要求99所述的方法，其特征在于，所述免疫细胞是活化的T细胞。
109.如权利要求99所述的方法，其特征在于，所述免疫细胞是活化的CD4+T细胞。
110.如权利要求99所述的方法，其特征在于，所述免疫细胞是活化的CD8+T细胞。
111.如权利要求99所述的方法，其特征在于，所述细胞是血管平滑肌细胞或内皮细胞。
112.如权利要求99所述的方法，其特征在于，所述抗体或其片段连接有诊断剂。
113.如权利要求112所述的方法，其特征在于，所述诊断剂是放射性核素、荧光团、化学发光化合物、荧光化合物、量子点、纳米颗粒或酶。
114.如权利要求99所述的方法，其特征在于，所述细胞位于人类对象中，且所述接触包括将所述抗体或其片段给予所述对象。
115.如权利要求99所述的方法，其特征在于，所述细胞位于分离的组织样品或细胞悬液中。
116.一种治疗或预防哺乳动物中癌症的方法，所述方法包括给予所述哺乳动物治疗有效量的抗核仁素试剂和药学上可接受的载体；其中所述抗核仁素试剂包括抗核仁素抗体或其片段，且当所述抗体或其片段与MCF-7细胞和人AB血清一起孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少20%。
117.一种治疗或预防哺乳动物中癌症的方法，所述方法包括给予所述哺乳动物治疗有效量的抗核仁素抗体或其片段，毒素或化疗剂以及药学上可接受的载体；其中当所述抗体或其片段与MCF-7细胞和人AB血清一起孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少20%。
118.一种治疗或预防哺乳动物中癌症的方法，所述方法包括给予所述哺乳动物治疗有效量的抗核仁素抗体或其片段和药学上可接受的载体，并用放疗进一步治疗所述哺乳动物，其中当所述抗体或其片段与MCF-7细胞和人AB血清一起孵育48小时，其杀死所述MCF-7细胞群体的至少20%。
119.一种在哺乳动物中治疗或预防癌症的方法，所述方法包括给予所述哺乳动物治疗有效量的抗核仁素剂和药学上可接受的载体；其中所述抗核仁素剂包含特异性结合SEQ IDNo. 4所示蛋白的抗核仁素抗体或其片段。
120.一种在哺乳动物中治疗或预防癌症的方法，所述方法包括给予所述哺乳动物治疗有效量的抗核仁素抗体或其片段，毒素或化疗剂以及药学上可接受的载体，其中所述抗体或其片段特异性结合SEQ ID No. 4所示蛋白。
121.—种在哺乳动物中治疗或预防癌症的方法，所述方法包括给予所述哺乳动物治疗有效量的抗核仁素抗体或其片段和药学上可接受的载体，其中所述抗体或其片段特异性结合SEQ ID No. 4所示蛋白。
122.如权利要求116-121所述的方法，其特征在于，所述哺乳动物是人。
123.权利要求116-121所述的方法，其特征在于，所述抗核仁素抗体或其片段对人基本无免疫原性。
124.如权利要求116-121所述的方法，其特征在于，所述抗核仁素抗体或其片段是人抗体或其片段。
125.如权利要求116-121所述的方法，其特征在于，所述抗核仁素抗体或其片段是单克隆抗体或其片段。
126.如权利要求116-121所述的方法，其特征在于，所述毒素是白喉毒素、外毒素A链、蓖麻毒素A链、相思豆毒素A链、蒴莲根毒素A链、α八叠球菌、油桐蛋白、石竹素蛋白、美洲商陆蛋白、美洲商陆抗病毒蛋白、苦瓜抑制剂、泻果素、巴豆毒素、肥皂草抑制剂、白树毒素、迈托毒素、局限曲菌素、酹霉素、伊诺霉素、卡奇霉素或单端孢霉烯族毒素。
127.如权利要求116-121所述的方法，其特征在于，所述化疗剂是烷基化剂、蒽环类抗生素、细胞骨架扰乱剂、大环内酯、拓扑异构酶I的抑制剂、拓扑异构酶II的抑制剂、核苷或核苷酸类似物、前体类似物、肽抗生素、钼基试剂、类视黄醇、长春花生物碱，或其衍生物。
128.如权利要求116-121所述的方法，其特征在于，所述化疗剂是放线菌素D、全反式视黄酸阿扎胞苷、阿霉素硫唑嘌呤、博来霉素、喜树碱、卡钼、卡培他滨、顺钼、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、阿糖胞苷、道诺红菌素、多西他赛、多西氟尿啶、多柔比星、表阿霉素、大环内酯、依托泊苷、氟尿嘧啶、5-氟尿嘧啶(5FU)、吉西他滨、羟基脲、过氧化氢、伊达比星、伊马替尼、双氯乙基甲胺、巯基嘌呤、甲氨蝶呤、丝裂霉素C、盐酸米托蒽醌、奥沙利钼、紫杉醇、培美曲塞、替尼泊苷、硫鸟嘌呤、戊柔比星、长春碱、长春新碱、长春碱酰胺或长春瑞宾。
129.—种抗核仁素剂，当所述抗核仁素剂与MCF-7细胞和人AB血清一起孵育48小时，能杀死所述MCF-7细胞群体的至少50%。
130.一种抗核仁素剂，当所述抗核仁素剂与单独的MCF-7细胞和MCFlOA细胞群体及热灭活血清一起孵育72或96小时，所杀死的MCF-7细胞超过所杀死的MCFlOA细胞。
131.ー种抗核仁素剂，当所述抗核仁素剂与单独的MCF-7细胞和MCFlOA细胞群体及人AB血清一起孵育72或96小时，所杀死的MCF-7细胞超过所杀死的MCFlOA细胞。
132.—种抗核仁素剂，其能特异性结合SEQ ID No. 4所示蛋白并抑制或杀死在其表面表达核仁素的ー种或多种癌细胞。
133.如权利要求129-132所述的抗核仁素剂，其特征在于，所述抗核仁素剂对人基本无免疫原性。
134.ー种通过检测ー种或多种癌前细胞中细胞表面核仁素表达来确定对象患癌可能性的方法。
135.如前述权利要求中任一项所述的抗体，其特征在于，所述抗体片段为Fab、Fab’、F(ab’)2或Fv片段；双价抗体；线性抗体；单链抗体；或由抗体片段形成的多特异性抗体。
136.如前述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法包括使用抗体片段，其中所述抗体片段为Fab、Fab’、F(ab' )2或Fv片段；双价抗体；线性抗体；单链抗体；或由抗体片段形成的多特异性抗体。
全文摘要
本发明提供产生针对人核仁素的人单克隆抗体的方法，生产此类抗体的细胞，以及所述抗体本身。还提供用所述方法诊断和治疗恶性和非恶性疾病的方法，所述疾病在细胞表面表达核仁素影响疾病的病理生理学。
文档编号C12N5/00GK102770529SQ201080051890
公开日2012年11月7日 申请日期2010年11月17日 优先权日2009年11月17日
发明者B·赫尔, D·弗纳德斯, N·苏特科维斯基, S·鲁宾奇克 申请人:Musc研究发展基金会