专利名称：一种扁座壳孢菌大量产孢培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种通过响应面法优化得到的扁座壳孢菌大量产孢培养基。
背景技术：
扁座壳孢菌(Aschersonia placenta)是虫生真菌的重要成员，其有性型为莫勒菌0foe77erie77a)，隶属于子囊菌门、粪菌纲、肉座菌目、麦角菌科。已有研究表明扁座壳孢菌及其有性型莫勒菌能引发粉虱及介壳类昆虫群体性流行病的发生，这使得它成为有效的生物防治因子。而作为生物防控因子，真菌的孢子由于存活期较长、对环境耐受性较强而更易 于大量生产并商业化。因此大量生产该菌孢子成为至关重要的问题。据研究报道，培养基成分对繁殖体的属性如产量、生控效能、对干燥的容忍性及存活率等等都有很显著的影响，且因菌株不同而存在差异。
发明内容
本发明的目的在于提供一种扁座壳孢菌大量产孢培养基，该培养基有利于消除培养基成分对繁殖体的属性如产量、生控效能、对干燥的容忍性及存活率等的影响。为实现上述目的，本发明的技术方案是一种扁座壳孢菌大量产孢培养基，由小米、胰蛋白胨、磷酸氢二钾、硫酸镁和水组成，其中小米33.0 g 35. 0g，胰蛋白胨2. 90 g
3.10g，磷酸氢二钾1.00 g 1.20g，硫酸镁0. 3g 0. 5g，琼脂20. 0g，用水定容至IL0上述扁座壳孢菌大量产孢培养基为固体产孢培养基。上述扁座壳孢菌大量产孢培养基可按常规方法配制，灭菌条件为温度121°C，压力范围 0. I MPa 0. 15MPa,时间 30min。上述扁座壳孢菌大量产孢培养基在接种前需将其冷却至凝固。上述扁座壳孢菌大量产孢培养基在接种时接种量要控制在培养基重量比的10%以内。上述扁座壳孢菌大量产孢培养基中，碳源为小米，氮源为胰蛋白胨，其最优配比为小米33. 8g，胰蛋白胨3g，磷酸氢二钾I. Hg,硫酸镁0. 37g，琼脂20. 0g，用水定容至1L。本发明的有益效果是通过响应面法优化得到扁座壳孢菌大量产孢培养基，不仅避免了培养基成分对繁殖体的属性如产量、生控效能、对干燥的容忍性及存活率等的影响，而且孢子产量较高，孢子的单位产量可达I. TTAXlO^pores/L以上，为等量PDA培养基产量I. 792X 109spores/L的10倍。该培养基为该菌孢子的大规模批量生产提供了参考条件。
图I是本发明扁座壳孢菌大量产孢培养基的构成示意图。图2是通过响应面法优化本发明培养基所得Hiillet(X1)和K2HPO4(X2)两因素对孢子产量的影响的响应曲面图。图3是通过响应面法优化本发明培养基所得Hiillet(X1)和K2HPO4(X2)两因素对孢子产量的影响的等高线图。图4是通过响应面法优化本发明培养基所得millet (X1)和MgSO4 7H20(X3)两因素对孢子产量的影响的响应曲面图。图5是通过响应面法优化本发明培养基所得millet (X1)和MgSO4 7H20(X3)两因素对孢子产量的影响的等高线图。 图6是通过响应面法优化本发明培养基所得K2HPO4 (X2)和MgSO4 WH2O(X3)两因素对孢子产量的影响的响应曲面图。图7是通过响应面法优化本发明培养基所得K2HPO4 (X2)和MgSO4 *7H20 (X3)两因素对孢子产量的影响的等高线图。
具体实施例方式本发明的扁座壳孢菌大量产孢培养基，由小米、胰蛋白胨、磷酸氢二钾、硫酸镁和水组成，其中小米33. 0 g 35. 0g，胰蛋白胨2. 90 g 3. 10g，磷酸氢二钾I. 00 g 1.20g，硫酸镁0. 3g 0. 5g，琼脂20. 0g，用水定容至IL0上述扁座壳孢菌大量产孢培养基为固体产孢培养基。上述扁座壳孢菌大量产孢培养基可按常规方法配制，灭菌条件为温度121°C，压力范围 0. I MPa 0. 15MPa,时间 30min。上述扁座壳孢菌大量产孢培养基在接种前需将其冷却至凝固。上述扁座壳孢菌大量产孢培养基在接种时接种量要控制在培养基重量比的10%以内。上述扁座壳孢菌大量产孢培养基中，碳源为小米，氮源为胰蛋白胨，其最优配比为小米33. 8g，胰蛋白胨3g，磷酸氢二钾I. Hg,硫酸镁0. 37g，琼脂20. 0g，用水定容至1L。下面结合具体实施例对利用本发明的扁座壳孢菌大量产孢培养基培养该菌获得孢子的过程及效果作进一步的说明。实施例I :从自然侵染扁座壳孢菌的粉虱虫尸上获得该菌，进行分离纯化，并借助形态及分子生物学证据对其进行鉴定。将其接种至上述培养基和PDA对照培养基中，分别按照常规方法进行孢子生产。结果表明扁座壳孢菌大量产孢培养基的孢子的单位产量可达
I.774X 1010 spores/L以上，为等量PDB培养基产量1.692X 109 spores/L的10倍左右。其中，扁座壳孢菌大量产孢培养基按最优配比进行配制。实施例2 :从自然侵染扁座壳孢菌的粉虱虫尸上获得该菌，进行分离纯化，并借助形态及分子生物学证据对其进行鉴定。将其接种至上述培养基和PDA对照培养基中，分别按照常规方法进行孢子生产。结果表明扁座壳孢菌大量产孢培养基的孢子的单位产量可达1.534X101。spores/L以上，为等量PDB培养基产量I. 528X IO9 spores/L的10倍左右。其中，扁座壳孢菌大量产孢培养基配方为其中小米33.0g，胰蛋白胨2.95g，磷酸氢二钾1.20g，硫酸镁0. 3g，琼脂20. 0g，用水定容至1L。实施例3 :从自然侵染扁座壳孢菌的粉虱虫尸上获得该菌，进行分离纯化，并借助形态及分子生物学证据对其进行鉴定。将其接种至上述培养基和PDA对照培养基中，分别按照常规方法进行孢子生产。结果表明扁座壳孢菌大量产孢培养基的孢子的单位产量可达1.657X101。spores/L以上，为等量PDB培养基产量I. 643X IO9 spores/L的10倍左右。其中，扁座壳孢菌大量产孢培养基配方为其中小米34. 5g，胰蛋白胨3. 10g，磷酸氢二钾1.0(^，硫酸镁0. 3g，琼脂20. 0g，用水定容至1L。以上是本发明的较佳实施例，凡依本发明技术方案所作的改变，所产生的功能作用未超出本发明技术方案的范围时，均属于本发明的保护范围。·
权利要求
1.一种扁座壳孢菌大量产孢培养基，其特征在于由小米、胰蛋白胨、磷酸氢二钾、硫酸镁和水组成，其中小米33. O g 35. Og，胰蛋白胨2. 90 g 3. 10g，磷酸氢二钾I. 00 g I. 20g，硫酸镁0. 3g 0. 5g，琼脂20. 0g，用水定容至1L。
2.根据权利要求I所述的一种扁座壳孢菌大量产孢培养基，其特征在于所述扁座壳孢菌大量产孢培养基为固体产孢培养基。
3.根据权利要求I所述的一种扁座壳孢菌大量产孢培养基，其特征在于所述扁座壳孢菌大量产孢培养基的灭菌条件为温度121°C，压力范围0. I MPa 0. 15MPa，时间30min。
4.根据权利要求I所述的一种扁座壳孢菌大量产孢培养基，其特征在于所述扁座壳孢菌大量产孢培养基在接种前需将其冷却至凝固。
5.根据权利要求I所述的一种扁座壳孢菌大量产孢培养基，其特征在于所述扁座壳孢菌大量产孢培养基在接种时接种量要控制在培养基重量比的10%以内。
6.根据权利要求I所述的一种扁座壳孢菌大量产孢培养基，其特征在于所述扁座壳孢菌大量产孢培养基中，碳源为小米，氮源为胰蛋白胨，其最优配比为小米33. Sg，胰蛋白胨3g，磷酸氢二钾I. 118，硫酸镁0. 37g，琼脂20. 0g，用水定容至1L。
7.根据权利要求I所述的一种扁座壳孢菌大量产孢培养基，其特征在于所述扁座壳孢菌大量产孢培养基通过响应面法优化得到。
全文摘要
本发明涉及一种通过响应面法优化得到的扁座壳孢菌大量产孢培养基，由小米、胰蛋白胨、磷酸氢二钾、硫酸镁和水组成，其中小米33.0g～35.0g，胰蛋白胨2.90g～3.10g，磷酸氢二钾1.00g～1.20g，硫酸镁0.3g～0.5g，琼脂20.0g，用水定容至1L。该培养基不仅有利于消除培养基成分对繁殖体的属性如产量、生控效能、对干燥的容忍性及存活率等的影响，而且孢子产量较高，孢子的单位产量可达1.774×1010spores/L以上，为等量PDA培养基产量1.792×109spores/L的10倍。该培养基为该菌孢子的大规模批量生产提供了参考条件。
文档编号C12N1/14GK102747027SQ20121026744
公开日2012年10月24日 申请日期2012年7月31日 优先权日2012年7月31日
发明者关雄, 宋飞飞, 李小霞, 涂洁, 邱云锋, 邱君志 申请人:福建农林大学