一种快速定位大豆基因的方法
【专利摘要】本发明公开一种快速定位大豆基因的方法。在大豆基因定位中，首先将表型有差异的两个亲本进行杂交，收获杂种F1代，然后，将F1种植并收获其自交产生的F2代，然后将表型与F1代相同的亲本之一作为一个基因池，将表型与另一个亲本相同的F2群体中的多个体作为另一个基因池。本发明提供的一种快速定位大豆基因的方法，不需要用F2群体构建杂合显性基因池，也不需要通过NILs群体、F2:3家系群体，BCF1群体等后代群体构建纯合显性基因池，简化了构建基因池的步骤，缩短了一个大豆生长季的时间，起到了快速定位大豆显性单基因的目的，具有广泛的实用性。
【专利说明】一种快速定位大豆基因的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于定位植物基因的【技术领域】，更具体的，本发明涉及一种快速定位大豆基因的方法的【技术领域】，进一步讲，涉及到针对大豆显性单基因的定位的【技术领域】。
【背景技术】
[0002]目前，定位大豆基因通常是获得与目标基因连锁的分子标记，通过分子标记来确定目标基因在大豆连锁图谱中的位置。获取分子标记的方法主要有近等基因系法、分离群体分组分析法(及/从et/ Segregant简称BSA)(参见文献[1])和利用连锁群已有的标记筛选法。大量研究表明，利用近等基因系分析法和分离群体分组分析法是快速有效地寻找与质量性状基因紧密连锁的分子标记的主要途径。现有技术提供的方法都是通过将表型有差异的两个亲本进行杂交，将其衍生的NILs (近等基因系)、F2群体、F2:3家系群体，BCF1群体等后代群体，按照目标表型的差异分成两组，分别组成基因池。由于分组时只对目标性状进行选择，因此两个DNA混合池理论上在目标基因所在的区域存在差异，对两个池进行标记筛选，如某一标记在池间产生多态性，就表明该标记与目标基因链锁，用此标记对分离群的所有单株进行筛选，就可计算标记与目标基因的距离。
[0003]参考文献:[1].Michelmore R W, Paran 1.1dentification of markers linkedto disease—resistance genes by bulked segregate analysis: A rapid method todetect markers in specific genomic regions by using segregating populations[J].Process Natural Academic Science USA, 1991, 88: 9828-9832。
【发明内容】
[0004]本发明涉及一种快速定位大豆显性基因的方法，针对现有技术中定位大豆显性单基因通常的方法，工作量大、`耗时长的现状及存在的问题。本发明为了克服现有定位方法的不足，旨在提供一种快速定位大豆基因的方法，该方法不仅能准确的进行大豆基因定位，而且减少了的工作量和所需时间，与现有技术相比，获得良好的技术效果。
[0005]本发明提供的技术方案:
在大豆基因定位中，首先将表型有差异的两个亲本进行杂交，收获杂种F1代，然后，将F1种植并收获其自交产生的F2代，然后将表型与F1代相同的亲本之一作为一个基因池，将表型与另一个亲本相同的F2群体中的多个体作为另一个基因池。本发明提供的一种快速定位大豆基因的方法，不需要用F2群体构建杂合显性基因池，也不需要通过NILs群体、F2:3家系群体，BCF1群体等后代群体构建纯合显性基因池，简化了构建基因池的步骤，缩短了时间，起到了快速定位大豆显性单基因的目的。
[0006]本发明具体提供了一种快速定位大豆基因的方法，具体方法步骤如下:
(1)亲本的选择:选择表型有差异的两个大豆材料作为亲本。
[0007](2)分子标记的初步筛选:选择在两亲本间具有多态性的标记。
[0008](3) F2群体的建立。[0009](4)基因池的构建:将表型与F1代相同的亲本之一作为一个基因池，将表型与另一个亲本相同的F2群体中的多个体组成另一个基因池。
[0010](5)与目标基因连锁标记的筛选:选择在基因池间具有多态性的标记。
[0011]本发明中，F2分离群体只构建的一个基因池，基因池是由隐性纯合基因组成的。
[0012]本发明中，另一个基因池由等量的亲本来充当，这个亲本是具有显性目的基因的。
[0013]本发明提供的快速定位大豆基因的方法比较适合针对大豆显性单基因的定位，由于大豆是严格自花授粉植物，其亲本的基因型被视为是纯合的，具有显性纯合目标基因型的亲本与具有隐性纯合目标基因型的F2个体，它们之间的表型是不同的，组成的基因池间存在不同的等位基因，据此可对目标基因进行定位。此方法不需要用F2群体构建杂合显性基因池，也不需要通过NILs群体、F2:3家系群体，BCF1群体等后代群体构建纯合显性基因池，简化了构建基因池的步骤，缩短了时间，起到了快速定位大豆显性单基因的目的。
[0014]通过本发明提供的技术方案，与现有技术相比，本发明获得有益效果:
采用本发明提供的快速定位大豆基因的方法，针对大豆显性单基因的定位，不需要用F2群体构建杂合显性基因池，也不需要通过F2:3家系构建纯合显性基因池，简化了构建基因池的步骤，可以在准确定位大豆显性单基因的同时，简化了基因池的构建，缩短了一个大豆生长季的时间，且操作简单，对于现有技术记载各种复杂繁琐的各类定位大豆基因的方法相比，获得显著的技术效果。【专利附图】
【附图说明】
[0015]图1为快速定位大豆基因的流程图。
【具体实施方式】
[0016]下面结合附图和实施例，对本发明做进一步地详细描述。
[0017]实施例一:快速定位大豆基因的方法参见附图1:
(1)用分离群体分组法建立基因池的时候，F2分离群体只构建一个基因池，另一个基因池由亲本之一来充当。
[0018](2)F2分离群体只构建的一个基因池，基因池是由隐性纯合基因组成。
[0019](3)另一个基因池由等量的亲本来充当，这个亲本是具有显性目的基因的哪些基因池由等量的亲本来充当，现有方法没探讨基因池由等量的亲本来充当。此本发明的意义所在。
[0020]进一步阐述快速定位大豆基因的方法具体阐述如下:
(1)亲本的选择:选择表型有差异的两个大豆材料作为亲本。
[0021](2)分子标记的初步筛选:选择在两亲本间具有多态性的标记。
[0022](3) F2群体的建立。
[0023](4)基因池的构建:将表型与F1代相同的亲本之一作为一个基因池，将表型与另一个亲本相同的F2群体中的多个体组成另一个基因池。
[0024](5)与目标基因连锁标记的筛选:选择在基因池间具有多态性的标记。
[0025]实施例二:大豆疫霉根腐病抗病基因RpsWY的定位参见附图1，研究表明大豆疫霉根腐病的抗病性是由显性单基因决定，本研究的定位群体由华春2号和瓦窑黄豆及其杂交产生的191株F2组成:华春2号为感病品种，瓦窑黄豆为抗病品种。2010年春季配制华春2号X瓦窑黄豆的杂交组合，F1代于同年6月9日盆栽种植，经表型和分子鉴定为真杂种，9月7日收获F1代自交产生的211粒种子，继续种植，其中191粒正常出苗做为F2代群体。
[0026]用覆盖大豆基因组的613对SSR标记在亲本间进行筛选，其中210对在两亲本之间有多态性，进一步用这210对标记在9个F2感病单株和9株抗病亲本(瓦窑黄豆)组成的抗感池间进行筛选，发现位于N连锁群上的标记Sattl52、Satt631、Satt009和Sat_084与抗病基因有连锁关系，将这4对引物在F2群体191个单株中进行分析，最终将大豆疫霉根腐病抗病基因RpsWY定位在N连锁群上，位于标记Satt631和Sattl52之间，遗传距离分别为 2.lcM 和 3.9cM。
[0027]实施例三:
目前进行大豆基因定位的常见方法是分离群体分组法(及/从et/ Segregant Analysis,简称BSA法)。该方法是从一对表型有差异的亲本所产生的任何一种分离群体(F2、BCF1等)中，按照表现型分成两组，并将每组中一定数量的单株DNA等量混合，建立差异池进行多态性引物的筛选，在两池间出现多态性的引物可能就是与目标基因连锁的标记。然后用筛选出的引物对分离群体单株进行验证，从而找出更紧密连锁的分子标记。本方法是将亲本直接与少部分F2代单株进行差`异池的构建，简化了基因定位的步骤，缩短了时间。
【权利要求】
1.一种快速定位大豆基因的方法，其特征在于，所述的方法具体步骤如下:(1)亲本的选择:选择表型有差异的两个大豆材料作为亲本；(2)分子标记的初步筛选:选择在两亲本间具有多态性的标记；(3)F2群体的建立；(4)基因池的构建:将表型与F1代相同的亲本之一作为一个基因池，将表型与另一个亲本相同的F2群体中的多个体组成另一个基因池； (5)与目标基因连锁标记的筛选:选择在基因池间具有多态性的标记。
2.根据权利要求1所述的快速定位大豆基因的方法，其特征在于，所述的在大豆显性单基因的定位中，用分离群体分组法建立基因池的时候，F2分离群体只构建一个基因池，另一个基因池由亲本之一来充当。
3.根据权利要求1所述的快速定位大豆基因的方法，其特征在于，所述的F2分离群体只构建的一个基因池，基因池是由隐性纯合基因组成的。
4.根据权利要求1所述的快速定位大豆基因的方法，其特征在于，所述的另一个基因池由等量的亲本来充当，这个亲本是具有显性目的基因的。
【文档编号】C12Q1/68GK103725789SQ201410018771
【公开日】2014年4月16日 申请日期:2014年1月16日 优先权日:2014年1月16日
【发明者】任海龙, 徐麟, 张龑, 樊国全, 李文慧, 符小发, 李益, 陈积豪, 曹庆, 王天地 申请人:新疆农业科学院海南三亚农作物育种试验中心