一种动胶菌样申氏菌及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种动胶菌样申氏菌，其分类命名为动胶菌样申氏菌(Shinella zoogloeoides)，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为：CGMCC No.9280，保藏日期为2014年06月09日。本发明还提供了该菌种的应用。本发明动胶菌样申氏菌B230对铁皮石斛白绢病菌、铁皮石斛根腐病、铁皮石斛灰霉病、杨树大斑溃疡病等多种病原真菌具有很好的抑制作用，该拮抗细菌对其他植物病害也有很好的防治效果；具有繁殖速度快；能够人工培养，易于操作，便于生产应用；抗逆能力强等优点，尤其是对真菌引起的铁皮石斛白绢病的防治具有重要意义；培养条件简单、容易保存，易于工业化生产，具有良好的开发应用前景。
CGMCC No9280
2014.06.09
【专利说明】一种动胶菌样申氏菌及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于植物保护领域，尤其涉及一种动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides) B230及其在防治铁皮石斛白絹病中的应用。
【背景技术】
[0002] 近年来，随着公众对食品和环境中化学农药安全性的普遍关注，以及一些危险性 化学农药的禁用，促使人们寻求安全有效的植物病害控制新途径，利用有益微生物防治植 物病害日趋受到重视。它是向被打破了的植物自然生态系中引入对植物有益的外源拮抗 菌、或通过调节环境促使自然的有益微生物群体增长，并表现出生防活性，通过微生物之间 的相互作用达到防病目的。目前，植物病害的生防已成为各国研究重点。
[0003] 自然界潜在的微生物资源种类丰富，在微生物农药的产品开发方面有明显优势， 因此世界各国都投入大量的人力和财力，研究、开发具有自主知识产权的新型微生物农药， 并以此带动其他高科技产业的全面发展。我国也把微生物农药的研制和开发列为国家重点 科技攻关和1?新技术发展计划。
[0004] 铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo)属国家二级保护植物，是中 药石斛中珍贵品种之一，因表皮呈铁绿色而得名；其主要成分具有独特的保健与药用价值， 被道家养生经典著作《道臧》誉为"中华九大仙草之首"。在我国，自然分布于浙江、安徽、福 建、湖南、广西、四川和云南等地人迹稀少的、悬崖峭壁背阴处的石缝里，终年饱受云雾雨露 滋润，生长期为3-5年，自然产量极少。
[0005] 但是，尽十多年来，随着铁皮石斛人工栽培面积不断扩大，铁皮石斛白絹病 (Sclerotium delfphninii)发生较普遍，造成根部腐烂，叶片变黄、脱落，最后导致全株死 亡，经济损失巨大，为此，铁皮石斛白絹病的防治具有现实意义。
[0006] 从保护生态环境和食品安全的角度出发，铁皮石斛需要有机栽培；因此研制对人 体安全的微生物制剂来控制铁皮石斛病害，达到安全食用的目的，也符合生物农药产业的 发展。
【发明内容】
[0007] 发明目的：为了克服现有技术的不足，本发明的第一目的在于提供一种对铁皮石 斛白絹病菌具有拮抗作用的动胶菌样申氏菌。
[0008] 本发明的第二目的在于提供动胶菌样申氏菌在防治铁皮石斛白絹病中的应用。
[0009] 技术方案：为了解决上述第一目的，本发明所采用的技术方案为：一种动胶菌样 申氏菌，其分类命名为动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides),在中国微生物菌种保藏 管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC)保藏，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1 号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码为100101，其保藏编号为：CGMCC No. 9280， 保藏日期为2014年06月09日。
[0010] 为了解决上述的第二目的，本发明所采用的技术方案为：所述的动胶菌样申氏菌 (Shinella zoogloeoides)B230在防治铁皮石斛白絹病中的应用。
[0011] 具体应用为：将动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides)B230接种于液体发酵 培养基中，在28°C -35°C下发酵培养48-72小时，得到的发酵液作为防治铁皮石斛白絹病菌 的菌剂。
[0012] 本发明中所述发酵培养基的配方为：1000mL蒸馏水，牛肉膏2-5g，蛋白胨5-10g， 氯化钠 4-5g，pH6.5-7.5。
[0013] 本发明中所述的动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides)B230的形态学和生理 活性特征如下：
[0014] 所述动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides)B230在牛肉膏蛋白胨培养 基平板上菌落较大，浅黄色，表面隆起，菌落有波纹，边缘较规则，菌体杆状，两端钝圆， 大小为1. 90-5. 11X0. 49-0. 71 μ m，平均3. 32X0. 58μπι;芽孢两端生，椭圆形，大小为 0· 64-0. 92 X 0· 51-0. 66 μ m，平均 0· 70 X 0· 55 μ m。
[0015] 革兰氏阴性杆菌，好氧；在固体培养基中呈黄褐色、表面光滑的圆形小菌落；在液 体培养基中有自絮凝现象；对氨苄青霉素、卡那霉素、壮观霉素有抗性，对氯霉素、四环素、 头孢敏感。
[0016] 动胶菌样申氏菌的16SrDNA序列如SEQ ID No. 1所示。将所测16SrDNA序列通过 BLAST比对，鉴定为动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides)。
[0017] 有益效果：与现有技术相比，本发明的优点是：
[0018] (1)动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides)B230对多种植物病原菌具有 抑制作用，在拮抗细菌对植物病害生物防治中起到非常重要的作用，例如种类和数量众 多；对病原菌的作用方式多样化；繁殖速度快；能够人工培养，易于操作，便于生产应用； 抗逆能力强等优点，尤其是对真菌引起的铁皮石斛白絹病、铁皮石斛根腐病Fusarium pro 1 iferatum)、铁皮石斛灰霉病的防治效果佳。
[0019] (2)动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides)B230培养条件简单、容易保存，易 于工业化生产，具有良好的开发应用前景。
【专利附图】
【附图说明】
[0020] 图la为本发明中动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides)B230的形态图；
[0021] 图lb为本发明中动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides)B230芽孢形态图（在 两端折光体）；
[0022] 图2a为本发明中动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides)B230对铁皮石斛白 絹病菌（Sclerotium delfphninii)的抑制作用；
[0023] 图2b为本发明中动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides)B230对铁皮石斛根 腐病菌（Fusarium proliferatum)的抑制作用；
[0024] 图2c为本发明中动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides)B230对铁皮石斛灰 霉病菌（Botrytis cinerea)的抑制作用；
[0025] 图2d为本发明中动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides)B230对草莓根腐病 菌（Fusarium oxsporum)的抑制作用；
[0026] 图2e为本发明中动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides)B230对杨树大斑病 菌（Dothichiza populea)的抑制作用；
[0027] 图2f为本发明中动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides)B230对小麦赤霉病 菌（Fusarium asiaticum)的抑制作用；
[0028] 图3a为本发明中采用动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides)B230对铁皮石 斛白絹病的防治试验。
[0029] 图3b为本发明中未采用动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides)B230菌液处 理铁皮石斛（对照）。
【具体实施方式】
[0030] 下面结合实验例详细阐述本发明动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides)B230 的应用。
[0031] 实验例1 :动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides)B230对铁皮石斛白絹病菌 (Sclerotium delfphninii)、铁皮石斛根腐病菌（Fusarium proliferatum)、铁皮石斛灰 霉菌（Botrytis cinerea)、草莓根腐病（Fusarium oxsporum)、杨树大斑病菌（Dothichiza populea)、小麦赤霉病菌（Fusarium asiaticum)的平板抑菌作用。
[0032] 将用LB斜面活化的动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides)B230菌株划线接 种于90mm PDA平板一侧，再将铁皮石斛灰霉菌、铁皮石斛根腐病菌、铁皮石斛白絹病菌、草 莓根腐病、小麦赤霉病菌和杨树大斑病菌的PDA平板培养物用直径5mm打孔器打取同质同 量的菌块，接种于平板另一侧。30±1°C培养15天和30天，观察抑菌能力，并记录抑制带的 宽度（如表1)，实验效果如图2a至图2f所示。试验结果表明，动胶菌样申氏菌B230对6 种病原菌均有较好的拮抗作用，以占据培养皿的直径判断抑制效果，用B230细菌的PDA圆 块作为对照（表2)。
[0033] 表1 B230对铁皮石斛白絹病菌等6种其他病原菌15天和30天的抑制作用
[0034]
【权利要求】
1. 一种动胶菌样申氏菌，其分类命名为动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides)，保 藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No. 9280,保藏 日期为2014年06月09日。
2. 权利要求1所述的动胶菌样申氏菌在防治铁皮石斛白絹病中的应用。
3. 根据权利要求2所述的应用，其特征在于：将动胶菌样申氏菌（Shinella zoogloeoides)接种于发酵培养基中，在28°C -35°C下发酵培养48-72小时，得到的发酵液 作为防治铁皮石斛白絹病菌的菌剂。
4. 根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述发酵培养基的配方为：1000mL蒸馏 水，牛肉膏2-5g，蛋白胨5-10g，氯化钠4-5g，ρΗ6· 5-7. 5。
5. 权利要求1所述的动胶菌样申氏菌在防治铁皮石斛根腐病中的应用。
6. 权利要求1所述的动胶菌样申氏菌在防治铁皮石斛灰霉病中的应用。
7. 权利要求1所述的动胶菌样申氏菌在防治草莓根腐病中的应用。
8. 权利要求1所述的动胶菌样申氏菌在防治杨树大斑病中的应用。
9. 权利要求1所述的动胶菌样申氏菌在防治小麦赤霉病中的应用。
【文档编号】C12R1/01GK104232513SQ201410398237
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2014年8月13日 优先权日:2014年8月13日
【发明者】赵楠, 刘玉华, 赵桂华 申请人:江苏农林职业技术学院