不断进行，逐渐形成悬浮液。经离心、冻干便得到壳聚糖-Nisin核壳微球。具体的制备流程如图1所示。下面结合实施例对本发明作进一步说明。
[0017]实施例1:本实施例制备壳聚糖-Nisin核壳微球。
[0018]准确称取1.0OOg壳聚糖溶于900ml纯水中，加入9ml冰醋酸充分溶解，搅拌，超声1mino向上叙溶液中准确加入1.0OOgNisin，待混合均匀后，用输液泵以0.5ml/min的速度加入10ml浓度为0.5M柠檬酸三钠溶液。再加入5ml吐温80作为非离子稳定剂，在磁力搅拌器下搅拌2h。所得的悬浮液在6000r/min，4°C下离心lOmin，弃去上清液，所得沉淀物置于_80°C冰箱中，冻干，最后得到壳聚糖包埋的Nisin颗粒。
[0019]检测结果:用高效液相法测步骤2弃去的上清液中的Nisin的含量，得到Nisin的包埋率为58% ;通过激光粒度仪，测得核壳微球的平均粒径，其平均粒径1019±53.3nm，接近于细菌等微生物的大小，便于Nisin和细菌间的特异性作用和静电作用，提高了其抑菌效果。通过比较未包埋Nisin的壳聚糖(图2a)与包埋Nisin后的颗粒(图2b)可以看出，与未包埋Nisin的壳聚糖颗粒相比，后者颗粒较大，与颗粒的平均粒径检测结果的趋势相吻合，这说明壳聚糖-Nisin核壳结构的形成。Nisin外包覆一层壳聚糖外壳，不仅能提高Nisin的杀菌作用，同时，壳聚糖良好的成膜性也有利于在水产品外形成致密的隔离膜。
[0020]参照Nisin在食品添加剂使用限量及其他因素，将本实施例制备得到的核壳微球0.5g溶于IL质量分数为0.5%生理盐水中，用于新鲜带鱼的保鲜。结果表明，与对照组中添加游离态的Nisin相比，其保质期延长10天。
[0021]实施例2:本实施例制备壳聚糖-Nisin核壳微球。
[0022]准确称取3.0OOg壳聚糖溶于900ml纯水中，添加18ml的冰醋酸充分溶解，搅拌，超声lOmin。向上叙溶液中准确加入1.500gNisin，待混合均匀后，用输液泵以2ml/min的速度加入0.5M硫酸钠溶液。再加入1ml吐温80作为非离子稳定剂，在磁力搅拌器下搅拌3.5ho所得的悬浮液在8000r/min，4°C下离心lOmin，弃去上清液，所得沉淀物置于_80°C冰箱中，冻干，最后得到壳聚糖包埋的Nisin颗粒。
[0023]检测结果:此配方制得的包合物，Nisin的包埋率为62%，平均粒径930±45.8nm。
[0024]参照Nisin在食品添加剂使用限量及其他因素，将本实施例制备得到的核壳微球
0.75g溶于IL质量分数为0.5%生理盐水中，用于小黄鱼的保鲜。结果表明，与与对照组中添加游离态的Nisin相比，其保质期延长13天。
[0025]实施例3:本实施例制备壳聚糖-Nisin核壳微球。
[0026]准确称取3.0OOg壳聚糖溶于900ml纯水中，添加13.5ml的冰醋酸充分溶解，搅拌，超声lOmin。向上叙溶液中准确加入1.0OOgNisin，待混合均勾后，用输液泵以6ml/min的速度加入10ml0.5M柠檬酸三钠溶液。再加入8ml吐温80作为非离子稳定剂。在磁力搅拌器下搅拌5h。所得的悬浮液在8000r/min，4°C下离心lOmin，弃去上清液，所得沉淀物置于_80°C冰箱中，冻干，最后得到壳聚糖包埋的Nisin。
[0027]检测结果:此配方制得的包合物，Nisin的包埋率为61%，平均粒径677±35.6nm。
[0028]参照Nisin在食品添加剂使用限量及其他因素，将本实施例制备得到的核壳微球
1.0g溶于IL质量分数为0.5%生理盐水中，用于鲳鱼的保鲜。结果表明，与对照组中添加游离态的Nisin相比，其保质期延长18天。
[0029]以上实施例中通过本发明的方法，用不同浓度的壳聚糖包埋的Nisin处理的带鱼、小黄鱼、鲳鱼的感官品质明显优于未处理组，处理组鱼类的色泽、气味、形态与组织弹性均优于未处理组，且有效地降低了鱼类保鲜过程中的菌落总数，延长了其货架期。
【主权项】
1.一种壳聚糖-Nisin核壳微球，其特征在于，所述壳聚糖-Nisin核壳微球的核是Nisin颗粒，壳是分子量为5W~10W的壳聚糖，微球的粒径为600~1100nm。2.—种权利要求1所述的壳聚糖-Nisin核壳微球的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤制备: Cl)壳聚糖溶液的制备:将lg_3g壳聚糖溶于0.9L纯水中，混合均匀后加入9ml~18ml的无水冰醋酸，得到壳聚糖溶液； (2)壳聚糖-Nisin悬浮液的制备:向上述壳聚糖溶液中加入Nisin，所述Nisin与壳聚糖质量比为1:1?3，待混合均匀后，以0.5ml/min~6ml/min的速度加入0.1L浓度为0.5M沉淀盐溶液，再加入5ml~10ml的吐温80作为非离子稳定剂，在磁力搅拌下搅拌2_5h ； (3)干燥:将步骤(2)所得的悬浮液离心lOmin，弃去上清液，将沉淀物保存于_80°C冰箱中，冻干，最后得到壳聚糖-Nisin核壳微球。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述沉淀盐溶液为柠檬酸钠水溶液或硫酸钠水溶液。4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤3中，悬浮液离心的转速为4000r/min 以上。5.一种权利要求1所述的壳聚糖-Nisin核壳微球的应用，其特征在于，该应用为:将壳聚糖-Nisin核壳微球用于保鲜条件为中性或碱性的水产品的保鲜。
【专利摘要】本发明公开了一种壳聚糖-Nisin核壳微球及其制备方法与应用，所述壳聚糖-Nisin核壳微球为壳聚糖包覆Nisin的核壳材料，该材料的制备是在酸性条件下用壳聚糖对乳酸链球菌进行包埋，形成包合物，以降低其空间阻力，提高其稳定性，增强其抗菌活力，降低环境影响，使其功效在不同环境中得到保证，同时具有良好的生物相容性、低毒性、生物可降解性等优点。非常适合于水产品（保鲜条件为中性或碱性），特别是黄鱼鲳鱼和带鱼的保鲜。
【IPC分类】A23B4/20
【公开号】CN104920584
【申请号】CN201510275303
【发明人】胡亚芹, 陈士国, 丁甜, 陈健初, 吴甜甜, 吴春华, 符莎露
【申请人】浙江大学
【公开日】2015年9月23日
【申请日】2015年5月27日