含有二酮哌嗪的植物提取物及其制造方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及高浓度含有二酮哌嗪的植物提取物及其制造方法。
【背景技术】
[0002] 两个氨基酸键合的"二肽"作为功能性物质而备受关注。二肽可附加单体氨基酸 所没有的物理性质、新功能，作为具有比氨基酸广的应用范围的物质而备受期待。尤其是， 已知作为环状二肽的二酮哌嗪具有抗菌作用、抗氧化作用（非专利文献1，2)、学习积极性 改善作用（专利文献1)等各种各样的生理活性，预测在医疗?药理领域需求会扩大。
[0003] 通常，二酮哌嗪通过化学合成法（非专利文献3)、酶法（非专利文献2,4)等制造。 此外，还提出了下述方法：通过使直链肽在处于超临界区域或亚临界区域的高温高压水中 进行脱水·环化反应来合成具有任意的氨基酸序列的环状肽的方法（专利文献2)、将直链 二肽或直链三肽在水溶剂中进行加热处理来制造环状二肽的方法（专利文献3,4)。
[0004] 现有技术文献
[0005] 专利文献
[0006] 专利文献1日本特表2012-517998号公报
[0007] 专利文献2日本特开2003-252896号公报
[0008] 专利文献3韩国公开专利10-2011-0120051号公报
[0009] 专利文献4日本专利5456876号公报
[0010] 专利文献5日本特开2010-166911号公报
[0011] 专利文献6日本特表2012-517214号公报
[0012] 非专利文献
[0013] 非专利文献 1 P印 tides, 16(1)，151-164(1995)
[0014] 非专利文献2 Bioscience and Industry (日语原名：只彳才寸彳工 > 只t>夕、、 只卜 y 一），60 (7)，454-457 (2002)
[0015] 非专利文献 3 J. Comb, Chem.，3, 453-460 (2001)
[0016] 非专利文献 4 Chemistry Biology, 8, 997-1010 (2001)
[0017] 非专利文献 5 Agr. Biol. Chem.，38 (5)，927-932 (1974)
【发明内容】
[0018] 这样，虽然期待二酮哌嗪在生物体内发挥各种生理活性，然而来自天然产物的二 酮哌嗪、高浓度含有二酮哌嗪的食品几乎不存在。作为来自天然产物的二酮哌嗪，已知在雪 利酒、绍兴酒、酱油、甜料酒、醋等的发酵食品中存在二酮哌嗪（非专利文献5)，但其含量为 极微量，期待二酮哌嗪所具有的功能性而摄取上述食品时，必须摄取相当大的量，无论怎样 都缺乏实用性。此外，还已知含有Cyclo(Pro-Phe)、Cyclo (Pro-Leu)的咖啡饮料（专利文 献5)，但上述二酮哌嗪的苦味强，难以应用于其他饮料。
[0019] 进而，还已知以胶原蛋白、畜肉等的动物性蛋白质为起源的相对较多地含有二酮 哌嗪的组合物（专利文献4,6)。然而，由于将以上述动物性蛋白质为起源的含二酮哌嗪组 合物在下述饮料中直接使用时对香味有影响，故而存在困难，该饮料为茶饮料、咖啡饮料、 大豆饮料、果汁饮料等以植物提取液或榨汁液等作为主成分配合而得的饮料或风味水饮 料、矿物质饮料、碳酸饮料等的清凉饮料。
[0020] 本发明所要解决的技术课题在于提供高浓度含有来自天然产物且安全性高的二 酮哌嗪的香味良好的提取物及其制造法。
[0021] 本发明者为了解决上述课题而进行了深入研究，结果发现通过对含有蛋白质的植 物体实施分解处理来生成植物性肽，并将该植物性肽在液体中进行高温高压处理，可制造 高浓度含有二酮哌嗪的植物提取物。其次，确认了该植物提取物的风味良好，从而完成了本 发明。
[0022] 即，本发明涉及以下内容。
[0023] (1) -种植物提取物，其特征在于，以10 μ g/100g/Bx以上的浓度含有环丙氨酰谷 氨酰胺、环丙氨酰丙氨酸、环丝氨酰酪氨酸、环甘氨酰亮氨酸、环甘氨酰色氨酸、环缬氨酰缬 氨酸、环色氨酰酪氨酸、环亮氨酰色氨酸及环苯丙氨酰苯丙氨酸中的任意一个以上。
[0024] (2)根据⑴所述的植物提取物，其特征在于，单位Bx的二酮哌嗪的总量为 900 yg/100g/Bx 以上。
[0025] (3)根据（1)或（2)所述的植物提取物，其特征在于，植物提取物为茶提取物、大豆 提取物或麦芽提取物。
[0026] (4) -种植物提取物，其特征在于，通过对含有蛋白质的植物体实施分解处理而生 成植物性肽，并将该植物性肽在液体中进行高温高压处理而得。
[0027] (5) -种制造方法，其特征在于，包含将植物性肽在液体中进行高温高压处理的 工序，且制造高浓度含有包含环亮氨酰亮氨酸及环亮氨酰苯丙氨酸的二酮哌嗪的植物提取 物。
[0028] (6)根据（5)所述的制造方法，其特征在于，高温高压处理工序中的加热条件为在 100~170°C的液体中进行30~数小时。
[0029] (7)根据（5)或（6)所述的制造方法，其特征在于，植物性肽为寡肽。
[0030] (8)根据（5)~（7)中任一项所述的制造方法，其特征在于，植物性肽为对来自植 物的蛋白质或含有蛋白质的植物体实施分解处理而得。
[0031] (9)根据（8)所述的制造方法，其特征在于，分解处理为加热处理或酶处理。
[0032] (10)根据（9)所述的制造方法，其特征在于，分解处理为酶处理，酶为内切型蛋白 酶。
[0033] 根据本发明，无需繁琐的工序、复杂的设备而能够以大量的生产规模来简便地制 造高浓度含有来自天然产物且安全性高的二酮哌嗪的植物提取物。
【附图说明】
[0034] 图1表示使用大豆蛋白质所得到的植物肽加工品中的环苯丙氨酰苯丙氨酸浓度 的定量结果。
[0035]图2表示使用大米蛋白质所得到的植物肽加工品中的环苯丙氨酰苯丙氨酸浓度 的定量结果。
[0036]图3表示前提取的次数与可溶性成分的去除率的关系。
【具体实施方式】 [0037](植物性肽）
[0038] 本发明的植物提取物可将植物性肽在液体中进行高温高压处理来制造。在此，只 要没有特别声明，本说明书中的"植物性肽"是指数个下述氨基酸连接而成的肽，氨基酸通 过对来自植物的蛋白质或包含蛋白质的植物体实施已知的分解处理（由热、压力进行的分 解处理，由酸、碱进行的分解处理，由酶进行的分解处理等）从而进行低分子化（寡肽）来 生成。
[0039] 本发明的植物性肽可使用大豆肽、大麦肽、小麦肽、小麦胚芽肽、豌豆肽、大米肽 等。如后所述，也可从来自植物的蛋白质或包含蛋白质的植物体来制备植物性肽进行使用， 也可使用市售品。作为市售的植物性肽，例如可例示Hinute AM、Hinute DC、Hinute HK(以 上，不二精油公司制）等的大豆肽、ORYZA PEPTIDE P60(0ryza油化公司制）等的大米肽、 Glutamine Peptide GP_lN、Glutamine Peptide GP-N(以上，日清 PHARMA 公司制）等的小 麦肽、Goma peptide KM_20(KISC0公司制）等的芝麻肽。
[0040] 根据本发明者的研究，肽的大小不同所得到的二酮哌嗪混合物的收率也产生差 另|J。优选使用分子量5000以下的肽的比例高的植物性肽，更优选使用分子量3000以下的 肽的比例高的植物性肽，特别优选使用分子量1000以下的肽的比例高的植物性肽。此外， 当使用氨基酸分数高的大豆时，由于多种二酮哌嗪以更高的浓度生成，故而大豆肽为优选 方式的一个例子。
[0041] 本发明的植物性肽可使用以来自植物的蛋白质、包含蛋白质的植物体作为原料制 造的肽混合物。具体而言，可列举以下述物质作为原料实施已知的分解处理（由热、压力进 行的分解处理，由酸、碱进行的分解处理，由酶进行的分解处理等）所制造的肽混合物，该 物质有大豆蛋白质、小麦蛋白质、小麦胚芽蛋白质、大米蛋白质、芝麻蛋白质等来自植物的 蛋白质，或者绿茶叶等的叶类、大麦、小麦、麦芽、芝麻、米等的种子类、大豆、小豆、黑豆等的 豆类、甘薯、马铃薯等的薯类等含有蛋白质且可饮食用的植物体。在上述包含蛋白质的植物 体中，在本发明中可适合地使用大豆、麦芽、茶叶。特别优选使用大豆、茶叶，更优选使用茶 叶。将上述来自植物的蛋白质、包含蛋白质的植物体作为原料实施分解处理并得到作为植 物性肽的肽混合物，该分解处理在可生成寡肽的条件下进行。具体而言，为了使分子量5000 以下的肽（优选分子量3000以下的肽、更优选分子量1000以下的肽）的比例增高来进行 分解处理。
[0042] 从成为目标的寡肽生成的容易度（反应速度的快慢）、大量处理的容易度出发，分 解处理优选由热进行的分解处理及/或由酶进行的分解处理，特别适合使用由酶进行的分 解处理（以下，称为酶处理）。
[0043] 进行由加热进行的分解处理时，为了防止植物体、蛋白质的焦糊而在溶剂中进行。 通常，每1质量份植物体，溶剂的量为10~100质量份、优选15~80质量份、更优选20~ 60质量份、特别优选20~40质量份左右。作为溶剂，优选使用水、乙醇或它们的混合物等， 特别优选使用水。加热条件只要是可生成肽的条件，则没有特别限定。作为加热条件，可例 示在100°C以上、进而125°C以上的温度下进行30分钟~数小时、优选2~7小时左右的加 热。作为加热处理装置，可根据条件使用压力锅、高压灭菌器等。且，该加热处理可与本发 明的"在液体中的高温高压处理工序"同时进行。
[0044] 通过酶处理来制造植物性肽时，对于酶而言可使用蛋白质分解酶（蛋白酶），优选 使用内切型分解活性强的蛋白酶。此外，根据作用最适pH的差异，蛋白酶大致分为碱性蛋 白酶、中性蛋白酶及酸性蛋白酶3种。进而，作为蛋白酶的起源，有植物起源、动物起源或微 生物起源，只要没有分解效率差的情况或所得到的分解提取液的香味差等的不良影响，酶 起源及最适pH就没有特别限定。
[0045] 例如，作为本发明可使用的来自细菌的蛋白酶，可列举Protease N、Protease NL、 Protease S、Proleather(注册商标）FG_F(以上，Amano Enzyme 公司制）；protin NY、 protin P、Desukin、Depireisu、protin A、Thermoase (注册商标）（以上，大和化成公司 制）；Bioprase (注册商标）XL-416F、Bioprase (注册商标）SP-4FG、Bioprase (注册商标） SP_15FG(以上，Nagase chemtex 公司制）；0rientase (注册商标）90N、Nucleisin (注册 商标）、Orientase (注册商标）10NL、Orientase (注册商标）22BF(以上，HBI公司制）； Aroase (注册商标）AP-10 (YAKULT药品工业公司制）；Protamex (注册商标）、Neutrase (注 册商标）、Alcalase (注册商标）（以上，Novozyms 公司制）；C0R0LASE N、C0R0LASE 7089、 VER0N W、VER0N P(以上，AB Enzyme公司制）；Enchiron NBS(洛东化成工业公司制）； Alkali protease GL440、Purafect (注册商标）4000L、Protease 899、PR0TEX6L(以上， Genencor协和公司制）等。此外，作为本发明可使用的来自曲菌的蛋白酶，可列举Protease A、Protease M、Protease P、Umamizyme、peptidase R、Newlase (注册商标）A、New