lase (注 册商标）F(以上，Amano Enzyme公司制）；Sumizyme(注册商标）AP、Sumizyme(注册商 标）LP、Sumizyme (注册商标）MP、Sumizyme (注册商标）FP、Sumizyme (注册商标）LPL (以 上，新日本化学工业公司制）；protin(注册商标）FN(大和化成公司制）；Denapsin 2P、 Denazyme (注册商标）AP、XP-415 (以上，Nagase chemtex 公司制）；0rientase (注册商 标）20八、〇!^61^386(注册商标）0吧、16奸326(注册商标）3(以上，耶1公司制）；]\1〇18；!_11(注 册商标）F、PD enzyme、IP enzyme、A〇-protease(以上，Kikkoman 公司制）；Sakanaze(科研 制药公司制）、Pancidase (注册商标）YP-SS、Pancidase (注册商标）NP-2、Pancidase (注 册商标）P(以上，YAKULT药品工业公司制）；Flavourzyme (注册商标）（Novozyms Japan公 司制）；Kokulaze (注册商标）SS、Kokulaze (注册商标）P (以上，三共Lifetech公司制）； VER0N PS、C0R0LASE PN-L(以上，AB Enzyme公司制）等。此外，作为本发明可使用的蛋 白酶，可列举来自放线菌的蛋白酶（例如Actinase (注册商标）AS、Actinase (注册商标） AF(以上，科研制药公司制）、Tasinase(注册商标）（Genencor协和公司制））、来自植物的 蛋白酶（例如 papain W-40 (Amano Enzyme 公司制）、食品用纯化 papain (Nagase chemtex 公司制））、来自动物的胃蛋白酶、胰蛋白胸等。
[0046] 在上述的蛋白酶中，从分解效率、所得到的含肽液的香味的观点出发，优选使用 来自细菌的蛋白酶，更优选使用来自枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)的中性蛋白酶、 来自解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens)的蛋白酶、来自嗜热脂肪芽孢杆菌 (Bacillus stearothermophilus)的蛋白酶，特别优选使用来自枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)的中性蛋白酶。
[0047] 优选相对于来自植物的蛋白质、包含蛋白质的植物体，将上述蛋白酶在0. 1~20 重量％、优选1~15重量％、更优选3~10重量％的范围内使用。少于上述范围的添加量 时，无法发挥使肽生成收率提高的效果，另一方面，即使多于上述范围进行添加，也无法期 待肽生成收率的大幅提高且在成本方面不利。应予说明，酶处理为在来自植物的蛋白质或 植物体中加入水且在湿润的状态下使酶作用。添加的水量通常为每1质量份干燥状态的蛋 白质或植物体，水为10~50质量份、更优选10~30质量份、特别优选10~20质量份左 右。
[0048] 由蛋白酶进行的酶处理条件只要根据所使用的蛋白酶的最适条件进行设定即可， 通常为在20~70°C (优选30~60°C、更优选40~60°C )下进行30分钟~24小时（优 选1小时~12小时、更优选1小时~6小时）左右。
[0049] 由于酶的种类不同，对作为基质的蛋白质的作用部位也不同，其结果可改变本发 明所得到的二酮哌嗪混合物的组成，故而还可根据所期望的二酮哌嗪混合物的组成来选择 酶。酶也可2种以上合用来进行使用。
[0050] 作为植物性肽，在使用植物体时，在实施由上述的分解处理进行的肽生成工序前， 优选进行预先减少植物体所含有的水溶性蛋白质的前处理。根据本发明者的研究，通过预 先减少水溶性蛋白质，由分解处理进行的肽的生成收率、由本发明的加热处理工序进行的 二酮哌嗪的生成收率明显提高。作为去除水溶性蛋白质的前处理的方法，可列举将植物体 在液体中加热使水溶性蛋白质溶出的方法且其后进行固液分离将所得到的固体（植物体） 供于分解处理的方法、用水等的水性溶剂对植物体实施提取处理的方法且将其提取残渣供 于分解处理的方法等（以下，统称为"前提取"）。在前提取时，优选浸渍于相对于植物体的 重量优选为15倍重量以上、更优选15~150倍重量左右的提取溶剂中，从而使植物体所包 含的水溶性蛋白质等的可溶性成分溶出。此时，也可预先将提取溶剂进行加热，也可将植物 体浸渍于提取溶剂后进行加热、提取。作为提取溶剂，可适合地使用纯水，也可使其适当含 有乙醇等有机溶剂。此外，还可通过在提取溶剂中添加矿物质成分来适当调整硬度。
[0051] 在前提取中，其提取温度没有特别限定，通常为50~100 °C、优选60~95 °C、更优 选70~90°C左右。此外，提取时间为1分钟~24小时、优选3分钟~20小时左右。提取 温度、时间等的提取条件设定为使所得到的提取残渣的可溶性成分去除率成为60%以上、 优选70%以上、更优选80%以上、进一步优选90%以上、特别优选95%。可溶性成分的去 除率是指将可最大限度去除的可溶性成分作为100%时在提取液中可回收的固体成分的相 对比例，指通过式"（通过前提取所得到的采液量（总量）（g) X其白利度[Bx]V(可最大 限度去除的可溶性成分（g)X其白利度[Bx])X100(%)"计算的值。在本说明书中，作为 "可最大限度去除的可溶性成分"，为了方便表示"反复进行10次下述操作时的采液量：在 相对于植物体的重量为30倍量的热水中提取10分钟"。在此，本说明书中提到的Bx可用 市售的Bx测定计测器进行计测。
[0052] 植物体的前提取可仅进行1次，也可进行多次。可废弃前提取所得到的提取液，也 可配合到饮食物中进行利用，例如还可与本发明所得到的含有二酮哌嗪的植物提取物混合 从而配合到饮食物中。
[0053] (加热处理）
[0054] 在本发明的制造方法中，通过将这样的植物性肽在液体中进行高温高压处理来生 成二酮哌嗪。作为高温高压处理中的液体，可适合地使用纯水，也可使其适当含有乙醇等有 机溶剂。此外，还可通过在提取溶剂中添加矿物质成分来适当调整硬度。优选根据需要预 先进行浓缩或稀释，使得供于加热处理的液体的白利度（Bx)成为0. 1~50左右。
[0055] 本说明书中提到的高温高压意味着100°C以上的温度且超过大气压的压力。作为 高温高压提取装置，可根据条件使用耐压性提取装置或压力锅、高压灭菌器等。
[0056] 高温高压的温度优选100~170°C、更优选110~150°C、特别优选120~140°C。 且，作为加热装置使用耐压性提取装置时，该温度表示测定提取柱的出口温度的值，作为加 热装置使用高压灭菌器时，该温度表示测定压力容器内的中心温度的温度的值。此外，压力 优选0. 101~0. 79MPa、更优选0. 101~0. 48MPa。进而，加热时间优选30~500分钟、更 优选60~300分钟左右。
[0057] 更为适合的加热处理条件为在以横轴作为时间（分钟）、以纵轴作为温度（°C )的 坐标系中，保持在由如下坐标系（i)~（vi)所包围的时间及温度的范围内的加热处理。
[0058] (i) (17(TC，30 分钟）、（ii) (15(TC，30 分钟）、（iii) (115Γ，180 分钟）、（iv) (105°C，480 分钟）、（v) (135°C，480 分钟）、（vi) (150°C，180 分钟）
[0059] 在液体中进行高温高压处理后，根据需要进行固液分离回收液体部，可得到高浓 度含有本发明的二酮哌嗪的植物提取物。在固液分离中可使用过滤及/或离心分离方法。
[0060] 植物性肽的来源（成为原料的植物的种类）、酶的种类不同，所得到的高浓度 含有二酮哌嗪的植物提取物中的二酮哌嗪的组成也不同，通过将本发明的植物性肽在 液体中进行高温高压处理，可使选自环丙氨酰谷氨酰胺（CAS注册号：268221-76-7 ; Cyclo (Ala-Gin))、环组氨酰哺氨酸（CAS 注册号：53109-32-3 ;Cyclo (His-Pro))、环 丙氨酰丙氨酸（CAS注册号：5845-61-4 ;Cyclo (Ala-Ala))、环甘氨酰哺氨酸（CAS注 册号：3705-27-9 ;Cyclo(Gly-Pro))、环丝氨酰酪氨酸（CAS 注册号：21754-31-4 ; Cyclo (Ser-Tyr))、环哺氨酰苏氨酸（CAS 注册号：227777-31-3 ;Cyclo (Pro-Thr))、环组 氨酰苯丙氨酸（CAS注册号：56586-95-9 ;Cyclo (His-Phe))、环丙氨酰哺氨酸（CAS注 册号：65556-33-4 ;Cyclo (Ala-Pro))、环苯丙氨酰丝氨酸（CAS 注册号：35591-00-5 ; Cyclo (Phe-Ser))、环甘氨酰亮氨酸（CAS 注册号：5845-67-0 ;Cyclo(Gly_Leu))、 环甘氨酰苯丙氨酸（CAS注册号：10125-07-2 ;Cyclo (Gly-Phe))、环哺氨酰哺氨酸 (Cyclo (Pro-Pro))、环甘氨酰色氨酸（Cyclo (Gly-Trp))、环天冬氨酰苯丙氨酸（CAS 注册号：5262-10-2 ;Cyclo (Asp-Phe))、环缴氨酰哺氨酸（Cyclo (Val-Pro))、环哺氨 酰酪氨酸（Cyclo (Pro-Tyr))、环蛋氨酰哺氨酸（Cyclo (Met-Pro))、环蛋氨酰蛋氨酸 (Cyclo (Met-Met))、环缴氨酰缴氨酸（Cyclo (Val-Val))、环亮氨酰哺氨酸（CAS注册 号：2873-36-1 ;Cyclo (Leu-Pro))、环色氨酰酪氨酸（Cyclo (Trp-Tyr))、环苯丙氨酰哺氨酸 (CAS 注册号：3705-26-8 ;Cyclo(Phe-Pro))、环亮氨酰色氨酸（CAS 注册号：15136-34-2 ; Cyclo (Leu-Trp))、环苯丙氨酰色氨酸（CAS 注册号：82597-82-8 ;Cyclo (Phe-Trp))、环 亮氨酰苯丙氨酸（CAS注册号：7280-77-5 ;CyCl〇(Leu-Phe))、环亮氨酰亮氨酸（CAS注 册号：952-45-4 ;Cyclo (Leu-Leu))、环苯丙氨酰苯丙氨酸（CAS注册号：2862-51-3 ; Cyclo(Phe-Phe))中的至少1种的二酮哌嗪增加。
[0061] 尤其是本发明对高浓度含有以相对较高的浓度含有Cyclo (Leu-Leu)及 Cyclo (Leu-Phe)的二酮哌嗪的植物提取物的制造有利。此外，本发明对高浓度含有 Cyclo (Phe-Phe)的植物提取物的制造有利。
[0062] 也可通过从高浓度含有本发明的二酮哌嗪的植物提取物实施公知的纯化处理来 选择性制造高浓度含有特定的二酮哌嗪的来自天然植物的二酮哌嗪。因此，从1个观点出 发，本发明为高浓度含有包含CyCl〇(Leu-Leu)及Cycl 〇(Phe-Phe)的二酮哌嗪的植物提取 物的制造方法，另外从其他观点出发，本发明为特定的二酮哌嗪（例如Cyclo (Ala-Ala)、 Cyclo (Leu-Phe)、Cyclo (Leu-Leu)、Cyclo (Phe-Phe))的制造方法。
[0063] (植物提取物）
[0064] 本说明书中提到的提取物是指液体状的提取物，本发明的"植物提取物"是指对植 物体实施提取处理所得到的液体状的提取物或其加工品。
[0065] 根据本发明可得到 Cyclo (Ala-Gln)、Cyclo (Ala-Ala)、Cyclo (Ser-Tyr)、 Cyclo (Gly-Trp)、Cyclo (Val-Val)、Cyclo (Trp-Tyr)、Cyclo (Leu-Trp)及 Cyclo (Phe-Phe) 中的任意一个以上的单位Bx的含量为10yg/100g/Bx以上的植物提取物。