得到含有1. Oppm/Bx以上、优选2. Oppm/Bx以上、进一步 优选3. Oppm/Bx以上的Cyclo(Phe-Phe)的麦芽提取物，故而该方法对Cyclo(Phe-Phe)的 制造也有利。
[0127] 实施例
[0128] 以下，基于实施例来说明本发明，但本发明不限定于这些实施例。此外，只要在本 说明书中没有特别表述，则如下记载：浓度等为重量基准，数值范围包含其端点。
[0129] (实施例1)由植物性肽的二酮哌嗪的制造
[0130] 作为植物性肽使用大豆肽及芝麻肽，在液体中进行高温高压处理来制造高浓度含 有二酮哌嗪的植物提取物。具体而言，在3g大豆肽（Hinute AM、不二制油公司制）及芝麻 肽（KM-20、KISC0公司制）中分别加入15ml蒸馏水，放入高压灭菌器（Τ0ΜΥ精工公司制）， 在135°C、0. 31MPa下施加3小时的高温高压处理。此外，作为对比例，制备使用相同的肽而 不进行高温高压处理的样品。将l〇ml处理后的液体进行50倍稀释并进行膜处理后供于 LC-MS/MS，求得各种二酮哌嗪的浓度。分析条件的详细内容如下所述。此外，使用数显折光 仪RX-5000a(ATAG0公司制）测定高浓度含有二酮哌嗪的植物提取物的白利度（Bx)，并计算 二酮哌嗪的总量（单位：yg/l〇〇g)与白利度（Bx)的比。
[0131] (LC-MS/MS 分析条件）
[0132] LC 装置 SHIMADZU UFLC XR
[0133] 色谱柱 Agilent technologies Zorbax SB-AQ 1. 8 μm 2.1X1 50mm
[0134] 柱温 40 °C
[0135] 流动相A:0. 1%甲酸、B:甲醇的梯度分析
[0136] 流速 总量0. 2mL/分钟
[0137] 进样量2 yL
[0138] 检测器 AB Sciex 4000 Q TRAP?-Turbo Spray (ESI)-Scheduled MRM(多反应 监测）
[0139] 喷嘴位置上4mm,横7mm
[0140] MRM detection window 40sec, Target Scan Time 0.5sec
[0141] [正离子模式]用Scheduled MRM进行分析
[0142] 离子源部条件 CUR 20. 0, CAD 6, IS 5500, TEM 700, GS170, GS270
[0143] 结果如表2所示（本说明书中，Cyclo (Leu-Leu)表示Cyclo (Leu-Leu)与 Cyclo (Ile-Ile)的合算值）。可知通过在本发明的液体中进行高温高压处理，可简 便地制造高浓度含有二酮哌嗪的植物提取物。此外，提示可使选自CyClo(Ala-Gln)、 Cyclo (His-Pro)、Cyclo (Ala-Ala)、Cyclo (Gly-Pro)、Cyclo (Ser-Tyr)、Cyclo (Pro-Thr)、 Cyclo(His-Phe)、Cyclo (Ala-Pro)、Cyclo(Phe-Ser)、Cyclo(Gly-Leu)、Cyclo(Gly-Phe)、 Cyclo (Pro-Pro)、Cyclo (Gly-Trp)、Cyclo (Asp-Phe)、Cyclo (Val-Pro)、Cyclo (Pro-Tyr)、 Cyclo(Met-Pro)、Cyclo (Met-Met)、Cyclo(Val-Val)、Cyclo(Leu-Pro)、Cyclo(Trp-Tyr)、 Cyclo (Phe-Pro)、Cyclo(Leu-Trp)、Cyclo(Phe-Trp)、Cyclo(Leu-Phe)、Cyclo(Leu-Leu)及 CyCl〇(Phe-Phe)中的至少1种的二酮哌嗪增加。尤其是，高浓度含有Cy Cl〇(Leu-Leu)及 Cyclo (Leu-Phe)，且其含量在高浓度含有二酮哌嗪的植物提取物中为21. 5%。
[0144] 表 2
[0145]
[0149] 1)大豆肽"Hinute AM"（不二制油公司制）：二·三肽为67%、平均分子量500
[0150] 2)大豆肽"Hinute DC"（不二制油公司制）：链长3~7、平均分子量1000
[0151] 3)大豆肽"Hinute HK"（不二制油公司制）
[0152] 4)大米肽"ORYZA PEPTIDE"（Oryza油化公司制）：三肽为40~50%
[0153] 5)小麦肽"Glutamine P印tide GP-1N"（日清 PHARMA 公司制）：分子量 5000 ~ 10000
[0154] 6)小麦肽"Glutamine P印tide GP-N"（日清 PHARMA 公司制）：分子量 5000 ~ 10000
[0155] 在3g植物性肽中分别加入15ml蒸馏水，放入高压灭菌器（T0MY精工公司制）， 在132 °C、0. 29MPa下施加2小时的高温高压处理。将10ml处理后的液体使用OASIS MAX (Waters公司制）进行固相萃取，将所得到的固相萃取物进行减压浓缩后溶解于100 μ 1 DMS0,其中用10 μ 1通过高效液相色谱（HPLC)求得环苯丙氨酰苯丙氨酸浓度。
[0156] 结果如表3所示。肽的种类不同，环苯丙氨酰苯丙氨酸的生成程度也存在差异。与 使用大米肽、小麦肽的情况相比，使用大豆肽时环苯丙氨酰苯丙氨酸高浓度生成。据此，提 示优选使用分子量5000以下（尤其是分子量1000以下）的肽的比例高的大豆肽。此外， 用大豆肽进行对比时，提示优选将分子量更小且大量包含二?三肽的寡肽作为原料。
[0157] 表 3
[0159](实施例3)由来自植物的蛋白质的二酮哌嗪的制造
[0160] 使用将来自植物的蛋白质作为原料并实施由酶进行的分解处理的物质。在来自植 物的蛋白质中使用大豆蛋白质（PR0LEENA 900(不二制油公司制））与大米蛋白质（Oryza protein P70(0ryza油化公司制））。将300mg蛋白质加入到15ml蒸馏水中。接着，添加 15mg酶A(proteose Axe)、酶B(Newlase F3G;来自雪白根霉的酸性蛋白酶（内酞酶））、酶 C(papain W-40;来自番木瓜的蛋白酶）、酶D(Protease △"△111&11〇"30;来自黑曲霉的蛋白 酶）、酶 E(Protease M "Amano"SD;来自黑曲霉的蛋白酶）、酶 F(Protease P "Amano"3SD; 来自黑曲霉的蛋白酶）、酶G(Bromelain F;来自菠萝的蛋白酶）、酶H(P印tidase R)、酶 I(Thermoase PC10F;来自嗜热脂肪芽孢杆菌的蛋白酶（内酞酶））、酶J(protin SD-NY10 ; 来自芽孢杆菌的蛋白酶）、酶K(protin SD-AY10 ;来自芽孢杆菌的蛋白酶）（以上均为Amano Enzyme公司制）中的任一个，在37°C下振荡混和2小时。其后，对该酶处理液不进行固液分 离而进行加热处理。加热处理为用高压灭菌器（Τ0ΜΥ精工公司制）在132°C下进行2小时 高温高压处理。此外，还制造对大豆蛋白质及大米蛋白质不进行酶处理而进行同样处理的 样品。将10ml处理后的液体使用OASIS MAX (Waters公司制）进行固相萃取，将所得到的 固相萃取物进行减压浓缩后溶解于100 μ 1 DMS0,其中用10 μ 1通过高效液相色谱（HPLC) 求得环苯丙氨酰苯丙氨酸浓度。
[0161] 使用大豆蛋白质时的结果如图1所示，使用大米蛋白质时的结果如图2所示。即 使未进行酶分解处理的样品（未）经过加热处理也生成二酮哌嗪。可知酶的种类不同，环 苯丙氨酰苯丙氨酸的生成程度也存在差异，存在使用来自芽孢杆菌的蛋白酶时较多生成的 趋势。
[0162] (实施例4)由植物体的二酮哌嗪的制造（1)
[0163] 作为植物体，使用日本国鹿儿岛县产的一番茶茶叶（品种：茶树种、总氮：6. 3% )。 对于该茶叶，首先进行减少水溶性蛋白质的前处理（3次前提取）。即，相对于10g茶叶加入 200g热水进行适当搅拌并进行5分钟提取。提取完成后，用140目筛过滤并回收提取残渣 (茶叶渣）。相对于该茶叶渣，倒入200g热水进行5分钟提取来回收茶叶渣。回收对该茶 叶渣再次进行了同样提取处理的茶叶渣。
[0164] 接着，对该进行了前提取的茶叶（茶叶渣）通过酶进行分解处理。相对于茶叶渣 (总量）倒入200g的50°C热水，添加 lg蛋白酶（商品名：protin NY100、大和化成公司制）， 一边用搅拌子搅拌（300rpm) -边在55°C的水浴内反应3小时。其后，于95°C保持30分钟 使酶失活。
[0165] 对该酶处理液不进行固液分离而以茶叶液体混合物的形态实施加热处理。加热处 理为放入高压灭菌器（Τ0ΜΥ精工公司制）在135°C下由高温高压流体进行3小时的加热处 理。将处理后的液体用140目筛过滤并得到茶提取物（提取物A)。关于该茶提取物（提取 物A) (BxO. 99)，与实施例1同样地对提取物中的二酮哌嗪进行分析。
[0166] 结果如表4所示。可知通过对茶叶（茶叶渣）在液体中进行高温高压处理，可 简便地制造高浓度含有植物提取物的茶提取物，该植物提取物高浓度含有二酮哌嗪。此 外，提不可使选自 Cyclo(Ala-Gln)、Cyclo(His-Pro)、Cyclo(Ala-Ala)、Cyclo(Gly-Pro)、 Cyclo(Ser-Tyr)、Cyclo (Pro-Thr)、Cyclo(His-Phe)、Cyclo(Ala-Pro)、Cyclo(Phe-Ser)、 Cyclo(Gly-Leu)、Cyclo (Gly-Phe)、Cyclo(Pro-Pro)、Cyclo(Gly-Trp)、Cyclo(Asp-Phe)、 Cyclo(Val-Pro)、 Cyclo(Pro-Tyr)、 Cyclo(Met-Pro)、 Cyclo(Met-Met)、 Cyclo(Val-Val)、 Cyclo (Leu-Pro)、Cyclo (Trp-Tyr)、Cyclo (Phe-Pro)、Cyclo (Leu-Trp)、Cyclo (Phe-Trp)、 Cyclo (Leu-Phe)、Cyclo (Leu-Leu)及 Cyclo (Phe-Phe 中的至少 1 种的二酮哌嗪增加。尤其 是，高浓度含有环亮氨酰亮氨酸及环亮氨酰苯丙氨酸，且其含量在高浓度含有二酮哌嗪的 植物提取物中为27. 2%。对该茶提取物的风味进行感官评价时，几乎无味无臭。
[0167] 表 4
[0170] (实施例5)由植物体的二酮哌嗪的制造（2)
[0171] 作为植物体，使用市售的水煮大豆及麦芽。对于水煮大豆及麦芽，分别与实施例4 同样在相对于植物体（大豆）的干燥重量为20倍量的热水中进行了 3次前提取后，进行与 实施例3同样的酶处理及在液体中的高温高压处理，从而得到大豆提取物（提取物B)及麦 芽提取物（提取物C)。且，基于五订数据，大豆的干燥重量换算为水煮大豆总量的36.5%。 关于提取物B及提取物C，将Bx调整为1后与实施例1同样地进行提取物中二酮哌嗪的分 析。结果如表5所示。可知由大豆、麦芽也可简便地制造高浓度含有二酮哌嗪的植物提取 物。
[0175] (实施例6)由植物体的二酮哌嗪的制造（3)
[0176] 作为植物体，使用与实施例4相同的茶叶，关于前提取、酶处理、加热处理的影响 进行研究。样品如表6所示。样品No. 5及6表示同时通过加热处理来实施以下工序：由植 物体使寡肽生成的工序与在液体中通过高温高压处理使寡肽环化来生成二肽的工序。前提 取的次数为2次，除此以外与实施例4同