专利名称：一种灯盏花素纳米注射制剂及其制备方法
技术领域：
本发明属中药制药技术领域，具体涉及一种灯盏花素纳米注射制剂及其制备方法。
背景技术：
纳米中药主要是指运用纳米技术制造的，粒径小于100纳米的中药有效成分、有效部位、原药及复方制剂。生物机体对药物的吸收、代谢是一个复杂的过程，中药制剂产生的药理效应不能仅仅归之于药物特有的化学组成还与该制剂的物理状态密切相关。因此，改变药物制剂的物理状态是新药研制的一种有效方法。在改变物理状态方面，改变药物的单元尺寸是十分有效的。当颗粒尺寸进入纳米量级时由于量子尺寸效应和表面效应，纳米粒子呈现出新奇的物理化学和生物学特性。这就是应用纳米技术于中药研究可能使药物活性和生物利用度提高乃至产生新的特性依据所在。
同传统中药相比，纳米中药具有以下特点①提高了药物的利用度，减少用药量。②增强药物的靶向性。③具有缓释功能，将中药纳米粒进行一定的表面修饰后，可能使中药具有缓释作用。④呈现新的药效，拓宽原药适应症，中药加工至纳米尺寸时，由于其量子尺寸等效应导致其物理、化学特性的改变，从而可使中药呈现出新功能。⑤丰富中药的剂型选择，提升传统给药途径。
目前纳米技术在中药研究中存在以下的问题。第一，纳米中药的制备困难我国虽已制备一些纳米级的中药，可是由于中药品种繁多，成分复杂，不同的成分由于其作用部位、作用机制及作用缓急的不同而要求其粒径大小、载体成分及给药剂量均有可能不同。同时纳米中药应该有它自己的一套质量标准，使其生产规范化。第二，纳米中药的毒副作用药物制成纳米微粒，其物理性质和化学性质均发生了显著的变化，这些变化对人体是否有毒副反应均未有有关的研究报道。但由于纳米材料的特殊性，除了可穿透皮肤，还会进入细胞器内，是否会直接参与或作为催化剂扰乱机体正常的化学反应，均未见有关报道。此外，纳米中药还可以通过机体的屏障系统，那它是否会影响中枢神经系统，精子的生成及其活力、胎儿的发育等，这些问题均无法回避。第三，中药在纳米级粉碎后，纳米微粒表面积变大，由于纳米微粒表面的活性使他们很容易团聚在一起，这给纳米微粒的收集及其药效的稳定性带来很大的困难。第四，成本提高由于现有技术水平及设备的限制，造成纳米中药在制备中的花费比传统中药的制备要高出不少。
目前纳米中药的研究主要集中于利用纳米技术对少数成分比较明确的单体有效成分进行纳米处理制成纳米制剂，或将原料药直接粉碎成纳米级，对大部分中药的纳米制剂研究还很少，主要是因为中药有效成分和有效部位特别是中药复方中有效部位本身就是一个“黑匣子”，中药中真正起药理作用的有效成分或有效部位研究本身就是一个难题，而且由于中药成分比较复杂，所以将其制备成纳米制剂需要克服的困难较多，因此，中药纳米制剂及技术是医药科研工作者的重要研究课题。
灯盏花素是从中草药灯盏花[Erigeron breriscapus(vant)Hand mazz]中提取分离的黄酮类有效成分，为灯盏花乙素为主和含有少量灯盏花甲素的混合物，在治疗脑血栓形成、脑梗塞、中风后瘫痪、冠心病心绞痛等心脑血管疾病上有非常显著的效果，灯盏花素口服时在胃和小肠中主要以游离的分子形式存在而难以溶解，造成吸收差，生物利用度低，灯盏花素注射剂由于灯盏乙素本身不稳定且难溶于水，一般在碱性pH下溶解配制注射液，但受多成分及降解的影响，澄明度和稳定性均难以保证，生产中采用吐温80增溶，但当将注射液加入到输液中稀释给病人静脉注射时，由于吐温80被稀释和pH值的改变，增溶效果下降，输液往往产生沉淀，尤其在给药剂量较大时更为严重，带来不安全因素。用冷冻干燥技术可以制备注射用粉针，对提高贮存稳定性有一定作用，但不能解决稀释过程中的溶解和安全性问题。
专利(申请号01100676.5)公开了一种“纳米灯盏花素制剂药物及其制备方法”，该专利实用性较差。也有将灯盏花素制备成脂质体的相关报道，该方法提高了原料要的溶解性，具有靶向功能，但是脂质体在体内转运、分布过程中不稳定，缺乏对血管的通透性，药物包封率相对较低，贮藏过程中稳定性欠佳，且脂质体易发生聚结现象，随时间变化，脂质堆积，产生邻近的脂质体颗粒合并成大颗粒，甚至导致脂膜破裂、渗漏增加。
发明内容
基于上述原因，本发明研究人员经大量实验研究，将灯盏花素与适宜脂质、乳化剂等辅料结合用本发明方法制备成本发明纳米注射制剂，本发明方法简便，易于大生产，采用本发明方法制备的制剂溶解性好，理化性质稳定，载药量大，且制剂稳定性显著提高，本发明制剂能显著提高灯盏花素通过血脑屏障的能力，更有利于发挥灯盏花素对脑梗塞、中风后瘫痪等心脑血管疾病的疗效，本发明制剂安全性更好、刺激性小，药理实验表明本发明制剂药理作用更显著。
本发明旨在提供一种溶解性好、质量稳定、疗效好的灯盏花素纳米注射制剂。
本发明还提供了上述灯盏花素纳米注射制剂的制备方法。
本发明通过以下技术方案实现一、工艺制法(1)制剂处方重量份组成为灯盏花素1份，脂质10-20份，乳化剂10-20份。
(2)取处方量的灯盏花素、乳化剂、脂质，加入10-40份羟丙基-β-环糊精，在80±5℃水浴条件下，搅拌溶于适量无水乙醇中，回收乙醇，迅速转移至0℃冰箱中冷冻2-4小时，取适量甘油和poloxamer188分散于注射用水中，加入上述冻干固体，搅拌均匀，在80±5℃条件下用高压乳匀机40-65MPa压力下乳匀5次，迅速冷至室温形成主药混悬液。
(3)制剂的制备水针制剂的制备.取上述混悬液，加注射用水至全量，搅匀，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明灯盏花素纳米水针制剂；输液制剂的制备取上述混悬液，加注射用水至全量，搅匀，加入氯化钠或葡萄糖调等渗，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明灯盏花素纳米输液制剂；粉针制剂的制备取上述混悬液，加入赋形剂，加注射用水调整浓度，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，制备成本发明灯盏花素粉针制剂。
本发明灯盏花素纳米注射制剂，其特征在于灯盏花素干燥品以灯盏乙素计含量大于等于90％。
本发明所用的脂质可以为脂肪酸甘油酯类(包括三硬脂酸甘油酯、三棕榈酸甘油酯、三肉豆蔻酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、三窬酸甘油酯、Witepsol W35、Witepsol H35、Witepsol H42、单硬脂酸甘油酯)及脂肪酸类(如硬脂酸、棕榈酸)等。
本发明所用乳化剂可以为磷脂(包括大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂及磷脂酰胆碱等)、Pluronic F68、泊洛沙姆、聚山梨醇、胆酸盐、四丁酚醛等。
由于灯盏花素水溶性差，与脂质、乳化剂结合力弱，本发明在制备过程中加入10-40份羟丙基-β-环糊精，可以显著提高灯盏花素的溶解性，减少脂质等的用量，显著提高制剂的包封率。
本发明纳米注射制剂可以为纳米水针剂、纳米粉针剂、纳米输液制剂。
本发明纳米水针剂、纳米输液剂加入少量PVP(聚乙烯吡咯烷酮)，可以提高制剂的稳定性。
本发明纳米粉针制剂的赋形剂为甘露醇、葡萄糖、乳糖、右旋糖酐、葡聚糖中的一种或两种。
除上述方法外，本发明制剂所用纳米载体还可以通过以下方法制备得到方法一、按处方称取乳化剂，加少量吐温80，在高速搅拌条件加入70±5℃的蒸馏水中，待完全熔融作为水相，再称取脂质加入处方量灯盏花素，加热熔融作为油相，将油相缓慢加入水相中，持续搅拌1h后超声分散室稳，频率45-50Hz，超声时间5-8分钟，即得。
方法二、取灯盏花素，脂质和丙酮适量加入容器中，超声使充分溶解，加入处方量的乳化剂，微热使溶成有机相，另取乳化剂溶于适量水中，构成水相，将有机相在(1000r/min)搅拌下注入75±2℃水相中，继续加热搅拌4h，使有机溶媒完全蒸发并使体系浓缩，将所得的半透明体系搅拌下(1000r/min)快速溶解于0-2℃的水相中，继续搅拌2h，即得。
方法三、取灯盏花素，溶于50％-80％乙醇中；将脂质的一种或多种溶于烷烃，混合搅拌均匀；将乙醇溶解物和烷烃溶解物混合，放入旋转刮膜蒸发仪，控制压力0.1-0.2个大气压，去除有机溶剂至尽，将蒸馏物放入密闭容器中进行超声处理，即得。
方法四将灯盏花素的油溶液(聚氰基丙烯酸烷酯、聚乳酸、聚丙交酯-乙交酯、壳聚糖、明胶中的一种或几种)，同10份无水乙醇混合，摇匀，得透明溶液；水相为0.5％非离子型表面活性剂Pluronic F68的水溶液40份(pH值约6)，两相均为20℃，将油相通过硅胶管或细针头射入电磁搅拌的水相中，立即形成纳米囊，将溶液真空蒸发至原体积的1/5左右，用玻砂漏斗(9-15μm)过滤，即得。
二、质量检测仪器H-7000型透射电镜仪(日本Hitachi公司)；Zetamaster光子相关光谱仪(英国Malvern公司)；LC-10A高效液相色谱仪(日本岛津)；TGL-18G型台式高速离心机。
检测依据参照《中华人民共和国药典》2005版二部附录XIX E指导原则项下的方法。
1、形态观察及粒径将本发明纳米药物在透射电镜下进行形态观察，可见呈圆球体，大小较均匀，表面光滑，无粘连。根据纳米药物的光学显微照片测定了500个，平均粒径为76.3nm，最大粒径为93.5nm，最小粒径为25.1nm，且粒径分布符合正态分布规律。
2、包封率和载药量测定采用反相高效液相色谱法进行含量测定(参照中药部颁标准20分册灯盏花素注射液项下的含量测定方法)，并用下述公式计算包封率和载药量包封率(％)＝(投药量-游离药物量)/投药量×100％；载药量(％)＝(投药量-游离药物量)/纳米药物的重量×100％。结果平均包封率为93.5％，载药量为2％-6％。
3、稳定性考察将本发明纳米药物分别置于小瓶内，密封。于冰箱(3-5℃)、室温(20-25℃)和37℃(RH75％)的环境中放置，于0、1、2和3月观测纳米药物的外观、大小、再分散性等。结果均未见明显变化，3种条件下的纳米药物再分散性保持良好，无聚合现象的发生。结果见表1。
表1稳定性实验结果
三、药理实验试药与动物灯盏花素注射液(哈尔滨圣泰制药有限公司)；注射用灯盏花素(昆明龙津药业有限公司)；本发明灯盏花素纳米注射制剂(按本发明制备工艺制备，由广东天之骄药物开发有限公司实验室制备)；新西兰家兔，体重约2.5kg；Wistar大鼠，体重180-220g；小鼠，体重18-22g。
1、血脑屏障透过实验取新西兰家兔30只，体重约2.5kg，雌雄不限，分为5组，即灯盏花素注射液组、注射用灯盏花素组和本发明灯盏花素纳米注射制剂组(包括水针剂组、粉针剂组和输液组)，静脉注射各组制剂，给药剂量为2.0mg/kg，灯盏花素注射液组、注射用灯盏花素组和本发明灯盏花素纳米注射制剂组(包括水针剂组、粉针剂组和输液组)，在不同时间抽取0.5ml左右脑脊液进行实验，取样时间分别为注射药物后的5、10、20、30、60min、90min、120min。取脑脊液0.25ml加适量溶剂混悬15min后，静置15min，以10000r/min离心1min，取上清液20μl进样，含量测定方法参照灯盏花素注射液项下的含量测定方法。结果见表2。
表2脑脊液中药物浓度的测定(μg/ml)
上述结果表明灯盏花素注射液和注射用灯盏花素透过血脑屏障的量少，且消除迅速，30min后即难以检测到有效成分，而本发明灯盏花素纳米注射制剂通过血脑屏障的量显著提高，且药物维持时间更长，。
2、对实验性大鼠急性脑缺血的影响取健康雄性Wistar大鼠70只，随机分成7组，每组10只，分别为对照组，脑缺血模型组，灯盏花素注射液组、注射用灯盏花素组和本发明灯盏花素纳米注射制剂组(包括水针剂组、粉针剂组和输液组)，给药剂量为3.3mg/kg，每日尾静脉注射给药一次，连续给药6d，末次给药后10min，以乌拉坦1g/kg剂量腹腔注射麻醉，背位固定，手术分离双侧颈总动脉，于给药后30min股静脉注射伊文思蓝50mg/kg，对照组不结扎双侧颈动脉，其它各组均于注射伊文思蓝5min后立即结扎双侧颈动脉结扎3h后断头取脑称重计算脑指数(mg/g)，另取部分脑称重后，置4ml甲酰胺溶液中，置于45℃恒温箱中72h，离心，取上层液于620nm处测定OD值，计算出脑内伊文思蓝含量(μg/g脑湿重)。将离心后脑组织置110℃烘箱中至恒重，计算脑含水量[％＝(湿重-干重)/湿重×100％]。结果见表3表3对实验性大鼠急性脑缺血的影响
与对照组比较**p＜0.01，与模型组比较Δp＜0.05ΔΔp＜0.01实验结果表明灯盏花素制剂对动物脑指数、脑含水量和伊文思蓝含量均有改善作用，而本发明灯盏花素纳米制剂作用更为显著，说明本发明纳米制剂对实验性大鼠急性脑缺血的保护作用更强。
3、对大鼠血液血栓形成的影响取健康大鼠60只，雌雄各半，随机分6组，每组10只，分别为生理盐水组，灯盏花素注射液组、注射用灯盏花素组和本发明灯盏花素纳米注射制剂组(包括水针剂组、粉针剂组和输液组)，给药剂量和方法同2，生理盐水组给予等容量生理盐水，于末次给药后10min，以乌拉坦1g/kg剂量腹腔注射麻醉，固定，分离右侧颈总动脉及左侧颈外静脉，按旁路法进行血栓形成测定，使右侧动脉插管血液流经置有棉线(6cm)的聚乙烯管进入左侧颈外静脉，循环15min后，立即取出棉线称重，计算血栓湿重及抑制率。结果见表4。
表4大鼠血液血栓形成的影响
与对照组比较**p＜0.01，与灯盏花素注射液、注射用灯盏花素比较Δp＜0.05以上结果表明灯盏花素制剂均能显著减轻大鼠血栓湿重，而本发明灯盏花素纳米制剂与灯盏花素注射液、注射用灯盏花素比较有显著性意义，表明本发明纳米制剂具有更强的抑制血栓形成的作用。
4、对小鼠血液凝血时间的影响取健康小鼠60只，雌雄近半，随机分成6组，每组10只，分别为生理盐水组，灯盏花素注射液组、注射用灯盏花素组和本发明灯盏花素纳米注射制剂组(包括水针剂组、粉针剂组和输液组)，给药剂量为5mg/kg(0.2ml)，每日尾静脉注射给药一次，连续给药6d，生理盐水组给予等容量生理盐水，末次给药后30min眶静脉取血，采用毛细管法，观察药物对小鼠血液凝血时间的影响。结果见表5。
表5对小鼠血液凝血时间的影响
与对照组比较**p＜0.01，与灯盏花素注射液、注射用灯盏花素比较Δp＜0.05以上结果表明灯盏花素制剂均能显著延长小鼠血液凝血时间，而本发明灯盏花素纳米制剂与灯盏花素注射液、注射用灯盏花素比较有显著性意义，表明本发明纳米制剂具有更好的的延长小鼠血液凝血时间的作用。
5、血管刺激性考察取健康大耳家兔3只，将动物固定于兔箱内，用酒精将皮肤消毒后，于右侧耳缘静脉处注射本发明纳米药物溶液，于另一侧对应部位注射同一体积的生理盐水作为对照。每日注射1次，连续3次，观察兔耳缘静脉反应。于末次给药24h后将兔放血处死，取下两耳，用10％甲醛溶液浸泡，距注射部位1-4cm处，解剖取出静脉，做组织切片检查，观察注射部位的反应。
结果试验过程中，肉眼观察两耳静脉注射部位处，未见红肿、热等刺激表现。表明给药组切片部位组织形态无明显差异，未见本品毒性所致的病理形态学改变(血管结构正常，无内皮细胞损伤，无血栓形成及其他病理性变化)。
6.溶血毒性考察2％红细胞混悬液的制备取兔耳缘静脉取血10-20ml，放入盛有玻璃珠的锥形瓶中，振摇10分钟，除去纤维蛋白原，使成脱纤血。加10倍量的生理盐水溶液，摇匀，离心，除去上清液，沉淀的红细胞再用生理盐水溶液洗涤2-3次，至上清液不呈红色时为止。将所得的红细胞用用生理盐水配成浓度为2％的混悬液，即得。
试验方法取试管6支，按表中的配比量依次加入2％红细胞混悬液和生理盐水溶液，混匀，于37℃恒温箱中放置30分钟，分别加入不同量的药液(以第6管为空白对照)，摇匀后，置37℃恒温箱中，开始每隔15分钟观察1次，1小时后，每隔1小时观察1次，共观察2小时。结果见表6。
表6溶血实验结果
结果以第3试管为准，各管均未染有红色，显微镜下观察未见有红细胞破裂，说明本品不溶血，安全性好。
7.急性毒性实验取小鼠100只，雌雄各半。禁食24h，随机分5组，每组20只。稀释成相同的生药浓度，各组分别尾静脉注射灯盏花素100mg/kg，每天给药3次，连续7天，观察小鼠死亡情况，记录数据，按改良寇氏法计算各组的LD50，结果见表7。
表7各实验组LD50比较
以上急性毒性实验结果表明本发明灯盏花素纳米注射制剂与市售灯盏花素注射液、注射用灯盏花素相比，LD50相当，说明本发明将灯盏花素制成纳米注射制剂后安全性没有变化。
结论以上全部实验结果表明灯盏花素纳米制剂疗效显著增加，药物血脑屏障通过率增加，维持时间延长，而安全性与原制剂比较没有变化四、制备实施例实施例1(1)取灯盏花素2.5g、羟丙基-β-环糊精100g、卵磷脂40g、硬脂酸50g，在80±5℃水浴条件下，搅拌溶于适量无水乙醇中，回收乙醇，迅速转移至0℃冰箱中冷冻2-4小时，取甘油4g和poloxamerl88 20g分散于注射用水中，加入上述冻干固体，搅拌均匀，在80±5℃条件下用高压乳匀机40-65MPa压力下乳匀5次，迅速冷至室温形成主药混悬液。
(2)制剂的制备水针制剂的制备.取上述混悬液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，搅匀，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明灯盏花素纳米水针制剂；输液制剂的制备取上述混悬液，加PVP 3g，加注射用水至20000ml，搅匀，加入氯化钠调等渗，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明灯盏花素纳米输液制剂；粉针制剂的制备取上述混悬液，加入甘露醇20g，加注射用水调整浓度，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，制备成本发明灯盏花素粉针制剂500瓶。
实施例2(1)取灯盏花素4g、羟丙基-β-环糊精40g、卵磷脂80g、单硬脂酸甘油酯40g，在80±5℃水浴条件下，搅拌溶于适量无水乙醇中，回收乙醇，迅速转移至0℃冰箱中冷冻2-4小时，取甘油4g和poloxamer188 20g分散于注射用水中，加入上述冻干固体，搅拌均匀，在80±5℃条件下用高压乳匀机40-65MPa压力下乳匀5次，迅速冷至室温形成主药混悬液。
(2)制剂的制备水针制剂的制备.取上述混悬液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，搅匀，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明灯盏花素纳米水针制剂；输液制剂的制备取上述混悬液，加PVP 3g，加注射用水至20000ml，搅匀，加入葡萄糖调等渗，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明灯盏花素纳米输液制剂；粉针制剂的制备取上述混悬液，加入乳糖30g，加注射用水调整浓度，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，制备成本发明灯盏花素粉针制剂500瓶。
实施例3(1)取灯盏花素5g、羟丙基-β-环糊精100g、Pluronic F68 50g、硬脂酸60g，在80±5℃水浴条件下，搅拌溶于适量无水乙醇中，回收乙醇，迅速转移至0℃冰箱中冷冻2-4小时，取甘油5g和poloxamer188 20g分散于注射用水中，加入上述冻干固体，搅拌均匀，在80±5℃条件下用高压乳匀机40-65MPa压力下乳匀5次，迅速冷至室温形成主药混悬液。
(2)制剂的制备水针制剂的制备.取上述混悬液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，搅匀，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明灯盏花素纳米水针制剂；
输液制剂的制备取上述混悬液，加PVP 4g，加注射用水至20000ml，搅匀，加入氯化钠调等渗，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明灯盏花素纳米输液制剂；粉针制剂的制备取上述混悬液，加入葡萄糖20g，加注射用水调整浓度，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，制备成本发明灯盏花素粉针制剂500瓶。
实施例4(1)取卵磷脂40g，吐温802g，在高速搅拌条件加入70±5℃的蒸馏水中，待完全熔融作为水相，再称取三窬酸甘油酯40g加入灯盏花素2.5g，加热熔融作为油相，将油相缓慢加入水相中，持续搅拌1h后超声分散室稳，频率45-50Hz，超声时间5-8分钟，即得。
(2)制剂的制备水针制剂的制备.取上述混悬液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，搅匀，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明灯盏花素纳米水针制剂；输液制剂的制备取上述混悬液，加PVP 3g，加注射用水至20000ml，搅匀，加入葡萄糖调等渗，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明灯盏花素纳米输液制剂；粉针制剂的制备取上述混悬液，加入右旋糖酐20g，加注射用水调整浓度，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，制备成本发明灯盏花素粉针制剂500瓶。
实施例5(1)取灯盏花素2.5g，硬脂酸25g和丙酮适量加入容器中，超声使充分溶解，加入处方量的卵磷脂30g，微热使溶成有机相，另取泊洛沙姆20g溶于250ml水中，构成水相，将有机相在(1000r/min)搅拌下注入75±2℃水相中，继续加热搅拌4h，使有机溶媒完全蒸发并使体系浓缩到约500ml，将所得的半透明体系搅拌下(1000r/min)快速溶解于0-2℃的100ml水相，继续搅拌2h，即得。
(2)制剂的制备水针制剂的制备.取上述混悬液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，搅匀，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明灯盏花素纳米水针制剂输液制剂的制备取上述混悬液，加PVP 4g，加注射用水至20000ml，搅匀，加入氯化钠或葡萄糖调等渗，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明灯盏花素纳米输液制剂；粉针制剂的制备取上述混悬液，加入葡聚糖30g，加注射用水调整浓度，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，制备成本发明灯盏花素粉针制剂500瓶。
实施例6(1)取灯盏花素5g，溶于50％乙醇中；将三肉豆蔻酸甘油酯60g溶于正己烷，混合搅拌均匀；将乙醇溶解物和正己烷溶解物混合，放入旋转刮膜蒸发仪，控制压力0.1-0.2个大气压，去除有机溶剂至尽，将蒸馏物放入密闭容器中进行超声处理，即得。
(2)制剂的制备水针制剂的制备.取上述混悬液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，搅匀，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明灯盏花素纳米水针制剂；
输液制剂的制备取上述混悬液，加PVP 4g，加注射用水至20000ml，搅匀，加入氯化钠调等渗，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明灯盏花素纳米输液制剂；粉针制剂的制备取上述混悬液，加入甘露醇20g和乳糖10g，加注射用水调整浓度，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，制备成本发明灯盏花素粉针制剂500瓶。
实施例7(1)取灯盏花素2.5g，溶于80％乙醇中；将硬脂酸30g和单硬脂酸甘油酯20g的溶于正己烷，混合搅拌均匀；将乙醇溶解物和正己烷溶解物混合，放入旋转刮膜蒸发仪，控制压力0.1-0.2个大气压，去除有机溶剂至尽，将蒸馏物放入密闭容器中进行超声处理，即得。
(2)制剂的制备水针制剂的制备.取上述混悬液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，搅匀，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明灯盏花素纳米水针制剂；输液制剂的制备取上述混悬液，加PVP 4g，加注射用水至20000ml，搅匀，加入葡萄糖调等渗，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明灯盏花素纳米输液制剂；粉针制剂的制备取上述混悬液，加入乳糖10g和右旋糖酐20g，加注射用水调整浓度，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，制备成本发明灯盏花素粉针制剂500瓶。
实施例8(1)将灯盏花素2.5g溶于聚丙交酯-乙交酯30g，同500ml无水乙醇混合，摇匀，得透明溶液；水相为0.5％非离子型表面活性剂Pluronic F68的水溶液2000ml(pH值约6)，两相均为20℃，将油相通过硅胶管或细针头射入电磁搅拌的水相中，立即形成纳米囊，将溶液真空蒸发至原体积的1/5左右，用玻砂漏斗(9-15μm)过滤，即得。
(2)制剂的制备水针制剂的制备.取上述混悬液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，搅匀，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明灯盏花素纳米水针制剂；输液制剂的制备取上述混悬液，加PVP 3g，加注射用水至20000ml，搅匀，加入葡萄糖调等渗，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明灯盏花素纳米输液制剂；粉针制剂的制备取上述混悬液，加入葡萄糖10g和乳糖15g，加注射用水调整浓度，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，制备成本发明灯盏花素粉针制剂500瓶。
实施例9(1)将灯盏花素2.5g溶于聚氰基丙烯酸烷酯40g、同500ml无水乙醇混合，摇匀，得透明溶液；水相为0.5％非离子型表面活性剂Pluronic F68的水溶液2000ml(pH值约6)，两相均为20℃，将油相通过硅胶管或细针头射入电磁搅拌的水相中，立即形成纳米囊，将溶液真空蒸发至原体积的1/5左右，用玻砂漏斗(9-15μm)过滤，即得。
(2)制剂的制备水针制剂的制备.取上述混悬液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，搅匀，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明灯盏花素纳米水针制剂；输液制剂的制备取上述混悬液，加PVP 3g，加注射用水至20000ml，搅匀，加入氯化钠调等渗，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明灯盏花素纳米输液制剂；粉针制剂的制备取上述混悬液，加入乳糖15g和葡聚糖15g，加注射用水调整浓度，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，制备成本发明灯盏花素粉针制剂500瓶。
权利要求
1.一种灯盏花素纳米注射制剂，其特征在于该药物包括下述重量份的组成成分灯盏花素1份，脂质10-20份，乳化剂10-20份。
2.根据权利要求1所述的灯盏花素纳米注射制剂，其制备方法为(1)取处方量的灯盏花素、乳化剂、脂质，加入10-40份羟丙基-β-环糊精，在80±5℃水浴条件下，搅拌溶于适量无水乙醇中，回收乙醇，迅速转移至0℃冰箱中冷冻2-4小时，取适量甘油和poloxamer188分散于注射用水中，加入上述冻干固体，搅拌均匀，在80±5℃条件下用高压乳匀机40-65MPa压力下乳匀5次，迅速冷至室温形成主药混悬液。(2)制剂的制备水针制剂的制备.取上述混悬液，加PVP适量，加注射用水至全量，搅匀，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明灯盏花素纳米水针制剂；输液制剂的制备取上述混悬液，加PVP适量，加注射用水至全量，搅匀，加入氯化钠或葡萄糖调等渗，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明灯盏花素纳米输液制剂；粉针制剂的制备取上述混悬液，加入赋形剂，加注射用水调整浓度，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，制备成本发明灯盏花素粉针制剂。
3.根据权利要求1所述的灯盏花素纳米注射制剂，其制备方法为(1)主药混悬液的制备方法一、按处方称取乳化剂，加少量吐温80，在高速搅拌条件加入70±5℃的蒸馏水中，待完全熔融作为水相，再称取脂质加入处方量灯盏花素，加热熔融作为油相，将油相缓慢加入水相中，持续搅拌1h后超声分散室稳，频率45-50Hz，超声时间5-8分钟，即得。方法二、取灯盏花素，脂质和丙酮适量加入容器中，超声使充分溶解，加入处方量的乳化剂，微热使溶成有机相，另取乳化剂溶于适量水中，构成水相，将有机相在1000r/min搅拌速度下注入75±2℃水相中，继续加热搅拌4h，使有机溶媒完全蒸发并使体系浓缩，将所得的半透明体系在1000r/min搅拌下快速溶解于0-2℃的水相中，继续搅拌2h，即得。(2)制剂的制备水针制剂的制备.取上述混悬液，加PVP适量，加注射用水至全量，搅匀，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明灯盏花素纳米水针制剂；输液制剂的制备取上述混悬液，加PVP适量，加注射用水至全量，搅匀，加入氯化钠或葡萄糖调等渗，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成本发明灯盏花素纳米输液制剂；粉针制剂的制备取上述混悬液，加入赋形剂，加注射用水调整浓度，调pH值为6.5-7.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，制备成本发明灯盏花素粉针制剂。
全文摘要
本发明公开了一种灯盏花素纳米注射制剂及其制备方法，将灯盏花素与适宜量的脂质、乳化剂与其它辅料采用本发明工艺方法制成纳米载体，并制备成水针剂、粉针剂和输液剂，本发明制剂稳定性好，易通过血脑屏障，药理作用表明本发明纳米注射制剂具有更好的疗效且安全性好。
文档编号A61K9/107GK1879645SQ20051007750
公开日2006年12月20日 申请日期2005年6月17日 优先权日2005年6月17日
发明者张晴龙 申请人:张晴龙